全 文 ：水蛭中小分子活性成分的 GC-MS研究
黄荣清 ,骆传环 ,彭江南 ,李艳玲* ,张 宁 ,杨文财* * ,梁晓东 ,孙晓东* * * ⒇
(军事医学科学院放射医学研究所 ,北京 100850)
水蛭是传统中药 ,俗称蚂蝗 ,全世界共有 300多
种 ,我国分布有 62种。 国外对水蛭的研究一直非常
活跃 ,从水蛭中得到了多种活性多肽如能强烈抑制
胰蛋白酶、纤维蛋白酶的 bdellins,抑制弹性硬蛋白
酶、组织蛋白酶的 eg lins及 hirustasin, hementin,
kallin, hyaluronidase, co llagenase等 [1～ 6 ] ,目前对水
蛭活性成分的研究仍在进行。本实验通过对国内外
文献的仔细分析 ,根据传统中医应用水蛭要经过炮
制、煎煮等特点 ,提出水蛭 Whitmania pigra Whit-
man中含有经口服有效的、较稳定的、小分子抗凝血
活性成分 ,并通过试验证实了这一观点。我国应用水
蛭已有上千年的历史 ,《神农本草经》中谓其“味咸
平 ,主逐恶血、瘀血、月闭 ,破血瘀积聚 ,无子 ,利水
道”。《中华人民共和国药典》收载为水蛭科动物蚂蝗
W . pigra Whitman、水蛭 Hirudo nipponica Whit-
man或柳叶蚂蝗 W . acranulata Whitman的干燥
体。据对我国 9省市商品水蛭药材的调查及品种鉴
定 ,可以认证 95%以上属于蚂蟥 ,其色谱行为、蛋白
电泳图谱也表明目前国内使用的水蛭以蚂蟥为主流
商品。 水蛭性味苦、咸 ,归肝、膀胱经 ,有破血、逐瘀、
通经的功能 ,主治癫痫、痞块、血瘀经闭、跌打损伤等
症。在治疗多种因瘀血所致的疾病中疗效确切 ,适应
症涉及心脑血管、肝肾和血液病变、男科妇科疑难
症、外伤疼痛及呼吸、神经系统和癌症。现代药理研
究结果表明: 水蛭能扩张脑血管 ,降低脑血管的阻
力 ,增加脑血流量 ;能扩张毛细血管 ,解除小动脉痉
挛 ,改善微循环 ;有抗凝、纤溶作用 ,能降低红细胞压
积、全血比粘度和红细胞电泳时间 ,抑制血小板聚
集 ;能降低血脂 ,减轻动脉内膜斑块形成和抗血栓作
用 ;改善局部血液循环 ,减少炎症渗出 ,促进其吸收
的抗炎作用。水蛭化学成分主要含蛋白质 ,此外含有
十几种氨基酸和 Zn, M n, Fe, Co, Cr, Se, Mo , Ni等
多种微量元素。国外对水蛭进行了长时间深入的研
究 ,发现了水蛭素等活性多肽 ,目前水蛭及水蛭素是
国际抗凝血药物研究的热点之一。在新鲜水蛭唾腺
中含有抗凝血物质水蛭素 ,以及肝素、抗血栓素及组
胺样物质。不同种水蛭分离出活性成分是不相同的 ,
大致可分为两大类:一类是直接作用于凝血系统的
成分 ,包括凝血酶抑制剂 ,以及其它抑制血液凝固的
物质 ,这或许就是水蛭活血化瘀的物质基础。二类是
其它蛋白酶抑制剂及其它活性成分。
本实验应用 GC-M S技术 ,分析鉴定了水蛭中
有很强的抗凝血活性提取物中的 15个化合物 ,主要
为不饱和脂肪酸甲酯、甾体等。
1 实验部分
1. 1 仪器: 美国惠普 HP5890 /5970A型气相色谱
仪-质谱联用仪 , HP59970化学工作站 , NM S检索
库。 Ultra- 2(交联甲基硅酮 )弹性石英毛细管柱
( 25 m× 0. 20 mm, 0. 33μm)。
1. 2 材料:水蛭 W . pigra Whitman粗粉经甲醇提
取后 ,提取物用不同极性的有机溶剂萃取 ,提取物按
极性大小分为 4个部分 ,各部分分别进行抗凝血试
验 ,结果脂溶性部分Ⅰ表现有较强的抗凝血活性。Ⅰ
部分经柱色谱分离 ,得到一个组份 ( Fr. 1) , Fr. 1部
分用气质联用技术分析鉴定。
1. 3 测试条件:气相测试条件 ,程序升温 140℃以
4. 0℃ /min至 260℃ ,保持 8 min, 5℃ /min升温至
285℃ ,载气为高纯氦。质谱条件:电子轰击 ( EI) ,电
子能量 70 eV,进样口温度 260℃ ,传输线温度
280℃。离子源温度 250℃ ,电子倍增器电压: 2 400
V,扫描范围 35～ 450 amu。
2 结果与讨论
水蛭的 Fr. 1组份经 GC-M S分析鉴定 ,通过
NBS的质谱数据系统检索 ,并核对质谱标准图谱 ,
鉴定了 15个化合物 ,各成分的相对百分含量按峰面
积归一化法计算得到 ,结果见表 1。Fr. 1组份主要为
不饱和脂肪酸甲酯、甾体等。以上的化学成分的研究
和正在进行的药理实验为中药水蛭的临床应用提供
了科学依据 ,为筛选有强抗凝血活性的、较稳定的抗
凝血的药物奠定了基础 ;同时也为动物中药活性成
·788· 中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 9期 2003年 9月
⒇ 收稿日期: 2002-12-10基金项目:国家自然科学基金 ( No. 2977209, 29905005, C030502500; 北京市自然科学基金 ( No. 7002029)
* 河南中医学院硕士研究生 * * 江西医药学校实习生 * * * 第一军医大学实习生
分的研究积累了技术经验。
表 1 水蛭 Fr. 1组份的化学成分及相对含量
Table 1 Chemical constituents and relative
content of Fr. 1 fromW. pigra
峰号 化 学 成 分 相对含量 /%
1 己醛 4. 50
2 4-甲基十四烷酸甲酯 2. 95
3 12-甲基十四烷酸甲酯 3. 19
4 11-十六碳烯酸甲酯 2. 40
5 14-甲基十五烷酸甲酯 7. 05
6 11-甲基十六烷酸甲酯 2. 10
7 14-甲基十六烷酸甲酯 4. 20
8 十七烷酸甲酯 2. 33
9 13-十八碳烯酸甲酯 8. 27
10 十八烷酸甲酯 4. 01
11 10-十九烯酸甲酯 3. 65
12 13-二十二烯酸甲酯 7. 67
13 2-乙酰氧基 -7, 9-十九烯酸甲酯 6. 75
14 胆固醇 11. 57
15 胆甾 -5, 7-二烯 -3酮 6. 90
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雀儿舌头化学成分及晶体结构再研究
廖新成 ,郁有祝 ,陈晓岚 ,卢建莎 ,屈凌波 ,赵玉芬⒇
(郑州大学 化学生物学重点实验室 ,河南 郑州 450052)
雀儿舌头系大戟科黑钩叶属 ,为一年生草本植
物 ,辛温 ,具有理气止痛之功 ,用于治疗胃痛、腹泻下
痢等 ,民间还用来治疗黄疸、胃炎、水肿等多种疾
病 [1, 2 ]。在河南汝州用来治疗癌症。我们观察到雀儿
舌头的乙醇提取物和水提物对食管癌 Eca-109细胞
株体外有较强的抑制作用。 为了深入研究其药用价
值 ,对其进行了化学成分的提取分离和结构测定的
研究工作 ,首次从雀儿舌头中分离出 6个化合物 ,经
过理化常数测定和光谱、波谱学研究 ,前文已确定其
化合物分别是 3α-羟基木栓烷 -2-酮、作为植物生长
调节剂的三十烷醇、蔗糖 [ 3]以及 2α, 3β -二羟基木栓
烷 ( f riedelane-2α, 3β -diol ) ,β -谷甾醇。本文报道了从
此植物中首次提取的另一化合物 β -谷甾醇 -3-氧-β -
D-葡萄糖苷 (β -si tostero l-3-O-β -D-gluco-side )的提
取过程 ,另外首次给出了前文提出的 3α-羟基木栓
烷 -2-酮的晶体结构及其重要参数。
1 仪器与材料
药材由河南省汝州外贸局提供 ,河南医科大学药
学系潘成学鉴定。 X-ray结果由郑州大学分析测试中
心测定。XRC-熔点测定仪 (日本岛津 ) ,核磁共振测定
仪 ( Bruker-DTX-400)、质谱测定仪 ( Q P5000) (日本
岛津 ) ;硅胶 (青岛海洋化工厂 )、乙醇、石油醚、无水乙
醚、醋酸乙酯、正己烷、氯仿皆为分析纯。
2 提取与分离
将粉碎后的 5 kg生药 (全草 )用 95%医用酒精
浸泡两周 ,回收乙醇 ,浸膏依次用石油醚、无水乙醚、
醋酸乙酯萃取。取醋酸乙酯萃取部分浸膏 20. 8 g拌
硅胶上柱 ,用氯仿 -醋酸乙酯-甲醇 ( 5∶ 4∶ 1)洗脱 ,
得白色粉末 (Ⅰ )。取部分石油醚萃取部分 ,硅胶色谱
分离 ,首先用石油醚 -醋酸乙酯 ( 10∶ 1)洗脱 ,收集合
并 38-42号收集瓶流份 ,再重上硅胶柱 ,用正己烷-
醋酸乙酯 ( 4∶ 1)为洗脱剂 ,得无色棒状晶体 (Ⅱ )。
3 鉴定
化合物Ⅰ : 白色粉末 , C35 H60O6 , mp 290℃ ,
Liebermann-Burchard反 应呈阳 性。 其 EI-M S,
1
H-NMR,
13
C-NMR数据与文献报道部分数据相比
·789·中草药 Chinese T raditional and Herbal Drug s 第 34卷第 9期 2003年 9月
⒇ 收稿日期: 2002-11-15基金项目:河南省自然科学基金和留学人员基金资助作者简介:陈晓岚 ( 1964- ) ,女 ,河南郑州人 ,副教授 ,留学于英国 READING大学化学系 ,主要从事天然药物化学教学和科研工作 ,已在国内外发表文章 20多篇。