全 文 ：马蔺子甲素的药物动力学研究
天 津药物研究 院 (3 0 0 1 9 3) 李全胜 ‘ 高连用 刘 昌孝
摘 要 采用 H P LC 方法 测定生物样 品中的马蔺 子 甲素浓度 。 大 鼠 19 10 0 、 2 0 和 80 m g /k 9 3 个
剂量 的药代动力学研究表 明体 内代谢非常快 , 血 药浓度 不呈线性 消除特 征 , 药物 吸收非常迅速 , 消
除快 。 达峰时 间 (t 、 * )分别 为 3。、 3 。和 15 m in , 浓度 一时间 曲线下 的面积 (A U C )分别为 1 0 . 1 、 3 23 8
.
1 和 4 5 0 9 . 9 n g · m in / m l, , 半衰期 ( t l / 2 )分别为 6 6 . 6 、 一0 1 . 9 和 1 3 3 . 3 m in 。 组 织分布试验 表明 , 在
大 鼠 19 20 0 m g / k g 后 1 、 2 、 4 h , 心 、肝 、脾等组织 测不 出原 型药物 。 排 泄试验在 大 鼠 19 2 0 m g / k g
后 , 36 h 内从粪 中测不到 原型药物及代谢产物 , 36 h 内测 不出从尿 中排 出的原型药物 ;其代谢产物
12 h 内排 出总量 的 78 % 以 上 , 马蔺子 甲素 是一蛋 白结合率非 常高 的药物 , 平均蛋 白结合率 为 9 0.
9 %
。
关键词 马蔺子 马蔺子 甲素 药物动力 学 高效液 相色谱
中药马蔺子为莺尾科植物马蔺 Iri : Pal -
la s ii v a r
.
c h in e n s is (F is e h ) K o id z 的 成 熟 种
子 , 所含有的马 蔺子 甲素 (ir is q u in o n e A )和
马 蔺子乙素 (ir is q u in o n e B )是其重要化学成
分 , 主要为马蔺子甲素 。 我们在生物分析方法
研 究〔刘昌孝 , 等 . 中草药 , 1 9 9 8 ; 2 9 (8 ) : 5 3 3〕
基础上 , 研究 了马蔺子 甲素的药物动力学 , 观
察药物在体 内变化 。
1 材料和仪器
1
.
1 试验药物 : 马蔺子甲素标准品由山东新
华制药股 份有 限公司提供 , 含量 95 % 。 马蔺
子素 , 含 马蔺子 甲素 86 % 。 内标物 (IS )为盐
酸氟桂嗦 , 含量 9 % 。
1
.
2 试剂 : 乙睛 、甲醇 , 优级纯 ; 正己烷 、 异丙
醇 , 分析纯 , 均为天津 化学试剂二厂产 品 。 超
纯水 , 本研究室 自制 。
1
.
3 仪器 : 日本岛津 L C 一 6A 高效液相 色谱
仪 , 包括紫外检测器 、柱温控制器 、 自动进样
器 、色谱数据处理器和中央 控制单元 。 纯水
器 , M ill一Q 亚型纯 水器 , 日本 M illp o r e 公 司
产品 。 医 用离心机 , L D S一ZA 型 , 北京医 用仪
器 厂产品 。 混合器 , K H 一8 51 型 , 上海环宇仪
器厂产品 。 高速组织均浆器 , X H F一 1 型 , 上海
金达仪器厂产品 。
1
.
4 动物 : W is t a r 大 鼠 , 雌雄兼用 , 体重 1 5 0
g 左右 , 天津药物研究院动物室提供 。
2 方法和结果
2
.
1 体 内转 化试 验 : 每 只大 鼠给 予 12 m g
马 蔺子素后 , 在 0 . 5 、 1 及 Z h 处死 , 取出胃及
小肠 内容 物 , 用三氯 甲烷 10 m L 提取 , 提取
液稀释后进样 , 测定消化道 中马蔺子 甲素的
含量 , 见表 1 。 试验结果表 明马蔺子 甲素在 胃
中消除很快 , 给药后 0 . s h 胃中含 药为给药
量的 4 7 . 9 7 % , 到给药后 Z h 胃中仅含给药量
的 1 . 8 8 % 。 肠 中基本测不到原型药物 。
表 1 大 鼠胃肠道转运试验 (n 一 3)
t(h) 0 0
.
5 1 2
胃中药量 (拼g ) 1 2 0 0 0 5 7 5 7 . 3 1 8 7 1 . 0 22 6 . 0
含量 (% ) 1 0 0 . 0 4 7 . 9 7 1 5 . 5 9 1 . 8 8
肠 中药 量 (拜g ) 0 0 . 7 0 0
含量 (% ) 。 () . 0 0 5 8 O C
2
.
2 大鼠 19 给药 的药代动力学研究
2
.
2
.
1 给 药 剂 量 确定 原 则 : 设 定大 鼠 19
1 0 0
、
2 0 0 和 8 0 0 m g / k g 3 个剂量组供药代动
力学研究 。其确定原则如下 : 1) 根据药效学实
验结 果 及新 药 审 评 办 法 的规 定 , 设 10 0 和
20 0 m g /k g 剂量组 , 由于本品代谢很快 , 血药
浓度很低 , 故在安全的基础上设 8 0 m g / k g
剂量组 , 以进一步 阐明血药浓度与剂量的关
A d d r e
s s : 1 1 Q u a n
s
h e n g
,
T ia n jirl In
s t it u t e o f Pha r ; n a e e u t ie a l R e s e a r eh
,
T ia n uin
.
6 0 6
·
系 ; 2) 本品 19 给药 L D S。为 2 . 5 19 9 / k g . 设定
的最大剂量 8 。。 m g / k g 仅 为其 1 / 3 ; 3 )根据
检测的灵敏度 , 药代的最小剂量不宜太低 ; 4 )
按药代研究 的技术 要求 , 根据安全有效的原
则 , 确定正常大 鼠 1 次 口服给 药 1 0 0 、 2 0 0 和
8 0 0 m g / k g 3 个剂量进行药代试验 。
2
.
2
.
2 试验程序和 方 法 : 大 鼠 19 马蔺子素
1 0 0
、
2 0 0 和 8 0 0 m g / k g 3 个剂量后 O 、 5 、 1 5 、
3 0
、
6 0
、
1 2 0
、
1 8 0 和 2 4 0 m in 采 血 (各组 的每
一时间点 5 只动物 ) , 立即离心 , 分离出血浆 ,
取血浆 l m l才 , 加人含有 5 0 拼g / m l lS SO 拼L
的试 管 中 , 再 加人 s m IJ 混合试 剂 (正 己烷 -
异丙醇一 95 , 5) , 振荡提取 , 离心分离 出有机
相 4 m L , 在 60 ℃水浴 中用氮气挥干 。残留物
加 入 2 0 0 可洲 流 动 相 , 振 荡 、 溶 解 . 进 样 50
越J 。 如不能当即测定 , 样品干管将于一 1 8 ‘C
冰冻保存 , 直至分析处理 。
2
.
2
.
3 血清药物浓度测定结果 : 见表 2 。 马
蔺子素 口服 吸收非常快 , 在给药 后 15 m in 一
3 0 m in 血 药浓度最 高 , 1 0 0 、 2 0 0 和 8 0 0 m g /
k g 剂量组马蔺子 甲素 Cn l a二分别为 1. 1 、 24 . 3
和 4 0 . 0 n g / m l一 。
表 2 大 鼠 ig 马蔺子素后 的血药浓度
(n g / m L
, n 一 5 厉士 s )
9 9 n li n
, 曲线下面积 A U C 随剂 量增加而增
大 , 但不成 比例 。 半衰期随剂量增加而延长 。
表 3 主要药代动力学参数
参 数 单 位
A T JC 〔。 , ) n g
·
m in / m l
t pe o k m
生n
M R
’
r m in
C
a、 n g / m l
K l / n l in
t〔J/ 2 , m ln
剂 量 (m g / k g )
1 0 0 2 0 0 8 0 0
1 0 0
.
1
3 0
7 0
.
0 5
L 1
0
.
0 1 0 4
6 6
.
6
3 2 3 8
.
1
3 0
1 0 0
.
3 9
2 4
.
3
0
.
0 0 6 8
1 0 1
.
9
4 5 0 9
.
9
1 5
9 9
.
7 3
4 0 0
0
.
0 0 5 2
13 3
.
3
2
.
2
.
5 代谢产物的血药浓度 : 为进一步阐明
马蔺子 甲素 的体 内过程 , 用第 2 种流动相系
统进行代谢产物测定 。具体方法为 : 给药剂量
20 0 m g /k g
, 采血时间点同上 , 血清加人 2 倍
量 的乙 睛 , 振荡 , 超速离心 , 取上清液 50 川J
直接进样测定 。 由于代谢产物结构未定 , 按相
同条件下的马蔺子甲素测定效应进行归 一化
计算 主要代谢产物浓度 , 其浓度远高于原型
药物 , 结果见 图 1 , 色谱 图见图 2 。
s x ‘o’
!
科!叫|.耐卜巾咧J。1洲脚朴拟图ƒ侧鼓砚勿„形那如絮丢国
( m in ) 10 0
荆量 ( 。、g / k g )
20 0 一\ 、5 N 9 . 4 二乞6 . 0 1 2 . 8 士 1 . 815 0 . 8 士 0 . 2 2 2 . 2 士 1 2 . 9 落0 . 0 上] 2 . 0
3 0 七 1 二全0 . 6 2 注. 3 士 8 . 7 3 1 . 4 士 10 . 9
6 0 0
.
7 士 0 . 魂 15 . 7士 斗, 7 2 1 . 7 士 8 . 6
1 2 0 0
.
4士 0 . 2 15 . 遵士 3 . 9 1 6 . 2 光 2 . 2
1 8 ( ) 0
.
2 10
.
2士 1 . 8 1 5 . 连士 3 . 2
2 4 0 N 4
.
8 士 魂. 4 9 . 0 士 4 . 0
2 0 0
时间 ‘( m i n )
今00 50
大 鼠血中代谢物 一时 间关 系曲线
⋯|.|||||d注 : N 为测不 出数据
2
.
2
.
4 药代动力学参数 : 用大 鼠 19 1 0 0 、 2 0 0
和 8 0 0 m g / k g 3 个剂量组 的血药浓 度 一时 间
数据 , 由中国药理学会数学药理专业委 员会
的 3P 8 7 实用药代动力学计算程序 自动拟合
c 一 t 曲线 , 所 得药代参数 见表 3 . 可见 大 鼠 19
马蔺 子 甲素从消化道吸收迅速 , 吸收相半 衰
期 短 , 达峰 时间快 。 3 个剂 量 的 杨 a 差分别 为
3 0
、
3 0 和 1 5 m in , 平 均驻 留时间 M R T 基 本
不 随剂 量增加 而增加 , 分别 为 70 . 0 、 1 0 和
《中草药》1 9 9 8 年第 2 9 卷第 9 期
A
一空白血清 B 一给药 20 0 m g / k g 后 Z h 的血清
1
一代谢产物 ( t R 一 1 5 . 6 m in
图 2 测定血.清中马蔺子素代谢产物色谱图
·
6 0 7
·
2
.
3 组织分布 : 选 择心 、肝 、脾等组织测定 ,
方法 为给药 2 0 m g / k g 后 1 、 2 、 4 h 取 出组
织 , 制成 2 0 %的匀浆按拟定测定方法测定药
物含量 。 以不给药的相应组织匀浆作为空 白 。
大 鼠 1 次 19 马蔺子素 2 0 0 m g / k g 后 , 在 1 、 2 、
4 h 各组织均测不出原型药物 。
2
.
4 尿粪排 泄 : W is ta r 大 鼠 5 只置于代 谢
笼中 , 收集给药前的尿和粪作为空白 , 然后 19
马蔺子素 2 0 0 m g / k g , 给药容量为 1 m L / 1 。。
g 体重 , 收集给药后 O一 Z h 、 Zh 一 4 h 、 4 h一 8
h
、
s h一 1 2 h 、 1 2 h 一 2 4 h 、 2 4 h一 3 6 h 尿和粪
样本 。 尿样按一定 比例稀释用拟定提取方法
提取后测定药物含量 。 粪用适量水做成混悬
液 , 离心后 , 取上清液按拟定提取方法提取后
测定药物含量 。
2
.
4
.
1 尿排 泄 : 在 0 一 36 h 内 , 测不 到原 型
药物从尿 液中排出 。 从 H PI JC 图上发现有保
留时 间分别 为 1 3 . 4 、 1 8 . 3 和 2 1 . 3 m in 的 3
个 代谢 产物 M : 、M Z 、 M : (图 3 ) , 其代谢产物
在 Z h一 4 h 排泄速率最大 。 代谢产物 主要在
给药后 12 h 内由尿排泄 , 占排泄总量的 7 8 %
以上 。 若按归一化法处理 , 36 h 内这 3 个代
谢物的排泄总量约占给药剂量的 34 % 。 说 明
尿是马蔺子素的主要排泄途径 , 且排泄较快 ,
见表 4 。 由于 3 种 主要代谢物结构有待确证 ,
没有进行定量测定 , 表 4 数据仅 以测定效应
来表示 。 另还有 2 个代谢产物 N l 和 N Z , 由于
受 内源性物质 (尿中成分 )干扰 , 难以 确定 。
表 4 大鼠 ig 马蔺子素 2 0 0 m g / k g 后 尿排泄结果
尿排泄 量
(i) 讶严定蟹 , 只 ‘跳
0 ~ 2
2 ~ 4
4 ~ 8
8 ~ 1 2
1 2 ~ 2 4
2 4 一 3 6
2 8 9 3 0 68 2 7 9
3 9 38 3 5 2 5 2 3 0 0
1 0 7 3 9 1 0 2 8 2 8 5 2
1 8 7 4 1 1 3 8 1 5 4 5
3 1 3 9 3 0 5 1 8 2 8
3 2 6 1 6 8 1 9 8 0
累积尿排泄量
(测定效应 ) 又 1 。“
3 6 3 6
1 3 3 9 9
2 8 0 18
3 2 5 1 5
3 9 5 9 9
4 1 5 8 0
2
.
4
.
2 粪排泄 : 大 鼠 19 马蔺子 素 2 0 m g /
k g 后 , 收集不 同时间区 间的粪样 品 , 测定药
物 的粪排泄量 , 结果无论原型药物还是代谢
产物均测不出来 。
2
.
5 蛋 白结合 : 采用平衡透析法测定马蔺子
素的蛋 白结合率 , 装置 由用半透膜分隔成两
室的平衡透析池组成 。 以 1/ 1 5 m ol /I J 的磷酸
盐缓 冲液 (pH 7 . 2) 为一侧 (A 侧 ) , 另一侧 (B
侧 )注人大鼠血清含有不同浓度 的马蔺子素 ,
两侧容量均为 1 0 m l一 。 3 种药物浓度为 2 0 0 、
5。。和 l 0 0 0 n g / m L , 每个浓度作 5 个样本试
验 。加人试药后 , 将平衡透析池置于 4 ℃ 冰箱
中放置 4 8 h 。 取 A 侧透析液用 H PI 一C 方法测
定药物浓度 , 然后用 以下公式计算 不同浓度
水平的药吻蛋 白结合率 。
蛋 白结 合率 一亘竺皇妥羹羹鱼丝里 x l。。%
讨 i状 J艾
」义~一 匕
A
一空白尿 样 B一给药 2 。。 m g / k g 后 。一 Z h 的尿样
图 3 测定尿 中马蔺子素代谢产物色谱 图
试验结果见 表 5 。 在此 3 种浓度下马蔺
子素的平均蛋 白结合率为 (90 . 6 士 1 . 46 )% 。
表 5 马蔺子素的蛋 白结合率
总浓度 游离浓度 蛋 白结合 率
((卜t , 工1 9 / ri 1L ) (e f , n g / m l ) (% )
2 0 0 9
.
9士 8 . 9 9 0 . 1 士 8 . 9
5 0 0 28
.
1士 7 . 1 8 9 . 4 士 6 . 0
1 0 0 0 34
.
0 土 5 . 0 9 3 . 2 士 4 . 5
3 讨论
采用大 鼠 19 给药进行 马蔺子素的药代
动力学研究 。 本研究所测定的原型药物均为
马蔺子甲素 , 其药代 动力学特征可归纳为以
下几点 : l) 马蔺子 甲素的体内外代谢非常快 ,
原型药物的血药浓度非常低 , 由于化学结构
有待证明 , 尚无代谢产物的标准品 , 只能测定
其代谢产物的相对含量 。 其原型药的药代动
力学特点为 : 平均驻 留时间 M R T 并 未随剂
量增加而变化 ;峰浓度和浓度 一时间曲线下的
!⋯||||J⋯|l||、‘l,
一
6 0 8
·
面积随剂量增加而增加 , 但没有相关性 ;半衰
期随剂量增加而延长 。 2) 在 1 0 m g / k g 剂量
组 由于各 时间点浓度低于检测灵敏度 , 为方
便检测 , 是采用浓缩后的测定液进行分析 , 用
外标法计算的 。可能与实验浓度有一定差异 。
3 )本品蛋 白结合率 高 , 平均达 90 . 9 % , 这 可
能导致其血药浓度极低 , 也可能有利于药物
在肿瘤部位的聚集 , 有利于发挥疗效 。 4 )排泄
试验表明马蔺子甲素主要经尿排泄 , 虽然在
3 6 h 内从尿 中排出的原型药物测不出来 , 初
步确定尿 中存在 至少 3 种代谢产物 , 代谢产
物由尿排 出也有一定规律 ;粪 中无论 原型药
还是代谢产物均测不出来 。 5) 胃肠道转运试
验表明本品主要经 胃吸收 , 且吸收较快 。 6) 醒
类化合物为不稳定的化合物 , 在体 内均被酶
还原生成酚类化合物 , 再进一步代谢和消除 ,
其代谢产物有待研究确证其化学结构 。
(1 9 9 8
一
0 3
一
3 1 收稿 )
P h a r m a e o k in e tie s o f Ir isq u in o n e A in R a t
L i Q
u a n s h e n g
,
G a o L ia n yo n g a n d L iu C h a n g x ia o (T ia n iin I
n st itu te o f P h a r m a e e u tie a l R e s ea r e h
,
S t a te
Ph a r m a e e u tie a l A d m in ist r a tio n o f C h in a
,
T ia n jin
,
3 0 0 1 9 3 )
A b st ra e t Ph a rm a e o k in e ties o f ir is q u in o n e A w a s st u died in r a t
.
A fte r o r a l a dm in is t r a tio n
,
it w a s
r a p idly a b s o rb e d a n d e lim in a te d
.
A t d o s e s o f 1 0 0
,
2 0 0 a n d 8 0 0 m g / k g
, th e t
p e。k w e r e 3 0
,
3 0 a n d 1 5 m in ; C 。
x
1
.
1
,
2 4
.
3 a n d 4 0 n g / m L
; A U C 1 0 0
.
1
、
3 2 3 8
.
1 a n d 4 5 0 9
.
9 n g
·
m in / m l
a n d t l : 6 6
.
6
、
1 0 1
.
9 a n d 1 3 3
.
3 m in
r e s p e e tiv e ly
.
A t l
、
2 a n d 4 h fo llo w in g 19 d o s e
, t he o rig in a l fo r m o f t he d r u g e (〕u ld n o t be d e t e e t e d in h e a r t , Iiv -
e r a n d s p le e n
, n o r in u rin e a n d fa ee e s a ft e r 3 6 h
.
M
o r e th a n 7 8 %
o f th e t o t a l m e t a b o lit e s w e r e e x e r e t e d fr o m
u r in e w ith in 1 2 h
.
T h e p r o t e in b in d in g r a tio w a s 9 0
.
9 %
.
K e y w o r d s I r is Pa lla sii F is e h
.
v a r
.
e h in e n sis F is e h ir is q u in o n e A
骆驼蓬总碱抗肿瘤及其协同抗瘤作用渔
中山医科大学 肿瘤研究所 (J ‘州 51 0 0 6 0) 杨 小平 朱 潘启超 谢冰芬 李春杰
摘 要 用小鼠移植性肿瘤和裸 鼠异体移植人肿瘤模 型研究骆驼蓬 总碱 (T A H )抗 肿瘤作用及其
协同抗瘤作 用 。 结果表 明 : T A H 对小 鼠 S 一 180 、 L , 、肝癌以及裸 鼠移植人鼻咽癌 (C N E 2) 和人 (B E L -
7 4 0 2) 肝癌均 有抗肿瘤 作用 , 并发现 T A H 与顺铂 (D D P )或例 霉索 (A D M )合 用 , 具 有协 同抗肿瘤作
用 。
关键词 骆 驼蓬总碱 抗肿 瘤作用 增 效作用
已经证明骆驼蓬混合生物碱及一叫噪生
物碱有抗肿瘤作用“ , “〕 。新疆 医学院附属第二
医 院药剂科从 骆驼蓬种 子 中提 取骆驼 蓬总
碱 。 并用于治疗消化道肿瘤 , 认为有一定疗
效〔3〕。 我们应用小 鼠移植性肿瘤和裸 鼠异体
移植人肿瘤研究骆驼蓬总碱 的抗肿瘤作用及
其与抗癌药顺铂和阿霉素合 用的协 同抗瘤作
用 。
1 材料和方法
1
.
1 药 物 : 骆 驼 蓬 总 碱 盐 酸 盐 , 含 量 为
A d d r e
s :
Y a n g X ia o p in
杨小平 1 9 6 7 年毕业 于
g , C a n e e
r
In
s t it u t e , S u n Y
a t 一s e n U n iv e r s ity o f M ed ie a l S e le n e e s
,
G u a
北京 医科大学 医疗系 , 学 士 , 副研究员 。 研究方 向 : 肿瘤药理 。 已 发表
n g z h o u
文章 4 0 余篇 。 1 9 8 0 年参加
“广谱 抗肿瘤抗生素— 平阳霉素 ”获 国家科委发 明奖二等奖 ; 1 9 9 3 年参 加 “骆驼蓬 抗癌作 用研究 ”获广东省 医 药科技 进步二等奖 ; 1 9 97 年参加 “携带 E B 病毒的鼻 咽癌裸 鼠移植瘤 及相应体处 细胞株的建 立 、特性研究及其应 用 ”获广东省 医药科技
进步三等奖 。
△国家 自然科 学基金资助项 目
《中草药 》1 9 9 8 年第 2 9 卷第 9 期 · 6 0 9 .