全 文 ：·药剂与工艺·
丹参及丹参注射液指纹图谱的 HPLC-MS研究
张尊建 ,李　茜 ,王　伟 ,邹巧根 ,赵陆华
(中国药科大学 分析测试中心 ,江苏 南京　 210009)
摘　要:目的　采用 HPLC-UV-MS法对丹参药材、丹参注射液中间体及丹参注射液进行指纹图谱的研究。方法　
采用 Alltima C18分析柱 ,甲醇-水 -冰醋酸梯度洗脱系统 ,流速: 1 mL /min,检测波长: 281 nm, MS同时记录总离子流
( T IC)色谱图。结果　得到分离度较好的丹参药材、中间体及注射液的 HPLC-UV及 HPLC-MS指纹图谱。结论　
为丹参药材、中间体及注射液的质量控制提供全面、可靠的依据。
关键词: 丹参 ;丹参注射液 ;指纹图谱 ; HPLC-UV ; HPLC-M S
中图分类号: R286. 0　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 12 1074 03
Study on fingerprints of Radix Salviae Miltiorrhiza and its INJECTION by HPLC-MS
ZHANG Zun-jian, LI Qian, WANG Wei , ZOU Qiao-gen, ZHAO Lu-hua
( Center fo r Instr umenta l Analysis, China Pha rmaceutical Univ ersi ty, Nanjing 210009, China)
Abstract: Object　 To investigate the chromatog raphic fingerprints o f Radix Salv iae Miltiorrhizae
( RSM ) , i ts intermedia te and IN JECTION by HPLC-UV-M S. Methods　 Sepa ra tion w as perfo rmed on an
Alltima C18 analytical co lumn with the mobile phase consisting of methanol-w ater-acetic acid as gradient
eluent at the flow ra te of 1 mL /min. The UV detection w as set at 281 nm and T IC w as recorded by an
electro spra y ioniza tion mass spect rometer in nega tiv e ion mode. Results　 The HPLC-UV and HPLC-M S
fingerprints o f RSM , i ts intermediate and IN JECTION were obtained wi th perfect i solation. Conclusion　
The fingerprints could be used fo r the contro l of RSM , its intermediate and IN JECTION.
Key words: Radix Salv iae Milt iorrhizae ( RSM ); RSM IN JECTION; fing erprint; HPLC-UV; HPLC-
M S
　　指纹图谱 [1 ]是国际公认的控制中药或天然药物
质量最有效的方式之一。在药效、毒理及临床研究试
验等已经确定该品种安全有效的前提下凭借实用的
指纹图谱 (或图像 )既可以确认该产品的真伪 ,同时
又能判断质量的稳定性。 丹参为唇形科植物丹参
Salv ia m iltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎 ,性微寒味
苦 ,具有活血化瘀、凉血消肿、清心除烦之功效 [2 ]。现
代药理学研究 [3 ]表明丹参具有增加冠状动脉血流
量、调血脂、抑制血栓形成和改善微循环等作用。丹
参主要成分为水溶性酚性酸—— 丹参素、原儿茶醛 ,
脂溶性二萜醌类—— 丹参酮Ⅱ 等。 本实验采用
HPLC-M S技术对丹参、丹参注射液中间体及丹参
注射液所含成分进行分离 ,得到了分离度及重现性
均较好的丹参及其制剂的指纹图谱 ,并对所含化学
成分进行了 MS归属。
1　仪器与试剂
Agilent 1100 LC /DAD /M S系统 ,含在线真空
脱气机、高压二元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、
二极管阵列检测器 ( DAD)、电喷雾 ( ES)接口。 HP
Chemstation Rev. A. 0. 8. 03.色谱工作站。
甲醇 (色谱纯 ) ,冰醋酸 (分析纯 ) ,纯净水 ;丹参
药材产自河南灵宝 ,经本校中药学院余伯阳教授鉴
定为丹参 S. miltiorrhiza Bge. ;丹参注射液中间体、
丹参注射液为国内某药厂生产。
2　方法与结果
2. 1　供试品的制备: 药材供试品的制备: 取 2. 0 g
丹参药材粉末 (过 40目筛 ) ,加 40 mL水 ,热回流 2
h,滤过 ,取滤液 20 mL,加乙醇 20 mL,放置 12 h,滤
过 ,再用 0. 45μm微孔滤膜滤过后作为丹参药材供
试品。
丹参注射液中间体供试品的制备: 取丹参注射
液中间体 0. 5 mL,用水稀释至 50 m L, 0. 45μm微
·1074· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
收稿日期: 2002-04-24作者简介:张尊建 ( 1960-) ,男 ,副教授 , 1983年毕业于南京药学院药物分析专业 ,先后工作于天津药物研究院、江苏徐州医学科学研究所 , 1994年获中国药科大学药学博士学位 ,现为中国药科大学分析测试中心主任 ,研究方向为中药色谱分析、药物波谱分析和药物现代仪器分析 ,目前已在各类学术期刊上发表论文 30余篇。 　 Tel: ( 025) 3271454( O)　 E-mail: zjzhang@ sina. com
孔滤膜滤过后作为丹参注射液中间体供试品。
丹参注射液供试品的制备: 取丹参注射液 ,用
0. 45μm微孔滤膜滤过后作为丹参注射液供试品。
2. 2　液相色谱条件及分析方法: 色谱柱: Alltima
C18柱 ( 250 mm× 4. 6 mm, 5μm);流动相: 甲醇-水 -
冰醋酸梯度洗脱系统 ;流速: 1 m L /min;柱温: 25
℃ ;检测波长: 281 nm;柱后分流 0. 4 m L /min进质
谱仪 ; M S同时记录总离子流 ( T IC)色谱图。 离子极
性: ESI(-) ;扫描范围: 80～ 800;干燥气流速: 10 L /
min;雾化室压: 40 psi;毛细管电压: 4 kV;传输电
压: 70 V。取供试品各 20μL分别注入 HPLC-M S联
用仪进行测定。
2. 3　试验结果: 丹参药材、丹参注射液中间体及丹
参注射液的 HPLC-UV和 HPLC-M S指纹图谱分
别见图 1, 2。
图 1　丹参药材 ( A)、丹参注射液中间体 (B)和丹参注射
液 (C)的 HPLC-UV指纹图谱
3　讨论
3. 1　 HPLC-UV指纹图谱:由图 1可以看出丹参药
材、中间体与注射液的指纹图谱有一定的相关性。但
由于注射液在制备过程中受高温煎煮 ,一些成分发
生变化 ,与药材温水浸取液所分离得到的成分有明
显差异。在中间体和注射液中一些相对分子质量较
图 2　丹参药材 (A)、丹参注射液中间体 ( B)和丹参注射
液 ( C)的 HPLC-MS指纹图谱
大的成分含量相对较少 ,而中间体与注射液的指纹
图谱之间有很好的相关性。我们对 10批次的注射液
进行了测定 ,确定了 6个共有峰 ,以 tR= 14. 3 min
的化合物为自身内标 ,计算相对保留时间分别为:
0. 580± 0. 009, 0. 683± 0. 008, 2. 001± 0. 025,
3. 757± 0. 060, 4. 098± 0. 066。 峰面积占总峰面积
30%以上色谱峰共 2个 ,其相对峰面积分别为:
0. 348± 0. 030, 0. 389± 0. 054。
用梯度洗脱法得到的丹参及其制剂 HPLC-UV
指纹图谱分离度、重现性好 ,可作为鉴别丹参药材真
伪优劣和注射液质量控制的依据。
3. 2　 HPLC-M S指纹图谱: 实验条件下 ,丹参供试
品对质谱负离子检测有较好的响应。正离子检测信
号较弱 ,这与丹参注射液中主要含有酚酸类化合物
有关。根据化合物的质荷比及相关的文献 [4～ 6 ] ,对图
中的主要色谱峰进行了 M S归属。丹参药材 HPLC-
M S色谱图中 tR= 9. 8 min为丹参素 ,其 [M - H]-
为 m /z 197; HPLC-UV对照品试验表明 tR= 14. 3
min的化合物为原儿茶醛 ,相对分子质量为 138,相
同位置处 MS谱图中出现原儿茶醛的 m /z 137 [M
- H]
-峰 ,其结果与对照品试验一致 ; tR= 19. 3 min
处 MS谱图中表现为 m /z 179 [M- H ]-峰 ,推测为
丹参素的脱水产物 ; tR= 25. 3 min处为 m /z 537 [M
- H]
-峰 ,是紫草酸 ; tR= 28. 7 min处的吸收峰是丹
参药材 HPLC-UV图中最大的吸收峰 ,相同保留时
间处 MS图中也有较大的吸收峰 ,为 m /z 717[M -
·1075·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
H ]
-峰 ,并伴有 m /z 739, 519, 359, 197碎片 ,推测
m /z 717为丹参酸乙的 [M - H ]-峰 ; tR= 30. 5 min
处出现 m /z 741( 100% )峰 ,推测 m /z 741为紫草酸
乙镁盐的 [M- H]-峰。紫草酸乙镁盐是丹参中酚性
酸的主要成分 ,具有纤溶作用和增强冠脉流量的作
用 ;在 tR= 27. 7, 31. 7 min处 , M S中均有 m /z 493
[M - H ]
-峰 ,且它们的碎片离子相似 ,推测为紫草
酸中的二氢呋喃环开环后脱水脱羧 ,形成的一组顺
反烯烃异构体。
丹参中间体和注射液的 HPLC-M S谱图较丹参
药材少 ,在 tR= 9. 8, 14. 3 min处分别出现 m /z 197
[ M - H ]- 峰和 m /z 359 [ M - H ]- 峰 ,与药材
HPLC-M S谱图相同。 tR= 28. 7 min处 MS表现为
m /z 359 [M - H ]
-峰 ,为迷迭香酸 ,药材中无此峰。
tR= 28. 7 min处中间体和注射液 HPLC-M S谱图中
未出现丹参酸乙的 m /z 717 [M- H ]-峰 ,但在 tR=
30. 5 min出现较强的紫草酸乙镁盐 m /z 741 [M-
H ]
-峰。另外 ,药材 HPLC-M S谱图中出现的丹参素
脱水产物、紫草酸、紫草酸的脱水脱羧产物 ,在中间
体和注射液的 HPLC-M S谱图中均未出现 ,从而进
一步说明了丹参在制备过程中所含成分发生了较大
变化。我们正对上述化学成分做进一步确证。
以 MS作为检测器 ,可以将色谱的保留值、响应
值与化合物的相对分子质量信息结合起来 ,实现对
各主要流出组分的定性 ,为药材、中间体和成品制剂
的鉴别及质量评价提供更加全面、可靠的依据。
参考文献:
[ 1 ]　谢培山 . 中药制剂色谱指纹图谱 (图像 )鉴别 [ J] . 中成药 ,
2000, 22( 6): 391-395.
[2 ]　中国药典 [ S] . 2000年版 .一部 .
[3 ]　郑虎占 ,董泽宏 ,佘　靖 . 中药现代研究与应用 [M ]. 第 2卷 .
北京:学苑出版社 , 1999.
[ 4 ]　周长新 ,罗厚蔚 ,丹羽正武 . 丹参水溶性化学成分的研究 [ J ].
中国药科大学学报 , 1999, 30( 6): 411-416.
[5 ]　孔德云 .丹参化学成分 [ J] . 中国医药工业杂志 , 1989, 20( 6):
279-285.
[ 6 ]　郑国墀 ,柿泽宽 .丹参化学成分的研究概况 [ J] . 中国药学杂
志 , 1989, 24( 1): 6-10.
麦冬总皂苷提取工艺的研究
周跃华 ,徐德生 ,冯　怡 ,吴笑如 ,李谨谨
(上海中医药大学 ,上海　 200032)
摘　要:目的　对麦冬总皂苷的提取工艺进行优化。方法　以麦冬皂苷 D的含量为指标 ,采用正交试验法对麦冬提
取的条件进行考察。结果　通过试验找出了麦冬提取的优化条件。麦冬用 5～ 10目药材 ,加 10倍量 80%乙醇 ,热回
流提取 3次 ,每次 1 h。 结论　此优选条件可充分提取麦冬总皂苷。
关键词: 麦冬 ;皂苷 ;麦冬皂苷 D;正交试验
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 12 1076 03
Investigation on extract process for total saponins in root of Ophiopogon japonicus
ZHOU Yue-hua, XU De-sheng , FENG Yi, WU Xiao-ru, LI Jin-jin
( Shanghai Univ er sity o f TCM , Shanghai 200032, China )
Abstract: Object　 To optimize the best ex t raction of the to tal saponins in the roo t o f Ophiopogon
japonicus ( Thunb. ) Ker-Gaw l. ( RO) . Methods　 The ex t ract condition o f total saponins in RO was ob-
serv ed by o rthogonal design wi th ophiopogonis D as index. Results　 The optimum ex tract condi tion o f RO
was established. The mo re ef fectiv e way w as to smash RO to 5-10 mesh and ex t ract total saponins in RO
w ith ten times amount of 80% alcohol thrice by ref luxing, one hour each time. Conclusion　 The to tal
saponins in RO could be fully ex t racted in this condi tion.
Key words: the roo t of Ophiopogon japonicus ( Thunb) . Ker-Gaw l. ( RO) ; to tal saponins; ophiopogo-
nis D; orthogonal design
　　麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬 Ophiopogon
japonicus ( Thunb. ) Ker-Gaw l.干燥块根 ,是常用
滋阴中药 ,始载于《神农本草经》 ,历代重要本草都有
记载。具有养阴生津 ,润肺清心的功能 ,可用于热病
·1076· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 12期
收稿日期: 2002-06-10
* 本校 1997级本科毕业生