全 文 ：社 , 1 9 9 5 : 2 7 2
高云瑞 ,等 . 中药药理与临床 , 1 9 90 , 6( 2) : 23
伊伯元 . 放射免疫分析在医学 中应用 . 北京 : 人 民卫生
出版社 , 1 9 9 1 : 3 1 0
( 1 9 9 8
一 0 6
一 0 1 收稿 )
A s s a y o f E s t r a d i o l a n d T e s t o s t e r o n e i n P i l o s e A n t l e r
L i
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u n , L u o F a n g e h
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.
A b s t r a e t T h e C h in e s e t r a d i t io n a l d r u g
,
p i lo s e a n t le r w a s a s s a y e d t o e s t a b lis h it s q u a l it y s t a n d a r d
·
T h e e o n t e n t s o f e x t r a d i o l a n d t e s t o s t e r o n e i n p i lo s e a n t le r w e r e d e t e r m in e d b y r a d io m m u n o a s s a y
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n g / 9 w e r e b o t h h ig h l y s ig n i f ie a n t d i f f e r e n t ( p < 0
.
0 1 ) a s e o m p a r e d w i t h o s s i fi e d a n t le r ( 1
.
9 0士 0 . 26 ) n g / 9 .
T h e e o u n t e r f e i t p i lo s e a n t le r a n d a n t l e r g l u e e o n t a i n e d lo w le v e ls o f e s t r a d i o l
,
h a v i n g n o s ig n if ie a n t d if fe r
-
e n e e s f r o m o s s i f ie d a n t le r ( P < 0
.
0 5 )
.
A n d t h e r e w e r e n o s ig n i f ie a n t d i f f e r e n e e s o f t e s t o s t e r o n e l e v e ls i n s
c r u d e d r u g s m e n t io n e d a b o v e
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a s s a y o f e s t r a d i o l i n p il o s e a n t le r m a y e o r r e e t l y e v a l u a t e t h e q u a l it y o f t h e
e r u d e d r u g
.
K e w wo
r d s P i lo s e a n t le r e s t r a d io l t e s t o s t e r o n e r a d i o im m u n o a s s a y
H P L C 法测定石刁柏中的蜀葵氨酸含里
中国林业科学院森林环境与保护研究所 (北京 1 0 0 0 91) 刘惠文 . 韩振秦
摘 要` 采用 Z or b a xr x 一 lC 。色谱柱 , 以 0 . 05 m ol /L 醋酸钠一甲醇 (8 O : 20) 为流 动相 ,邻苯二甲醛 一 2
琉基 乙醇做柱后衍生剂 , 利用荧光检测器 的高效液相 色谱法对石 刁柏中的蜀 葵氛酸进行了直接分
离分析 , 方法简便 、 快速 、 重现性好 , 回收率为 96 . 4 % 。
关镇词 H P L C 蜀葵氨酸 石 刁 柏 柱后衍生
存在于棉花 、 置草 、 百合等植物体内的蜀
葵 氨酸 a( lht ie n e) 在 中草药物 中所发 挥的药
学作用早 已被人们所重视 , 这种成分 在医疗
上具有很显著的止 咳平喘功效 。 石刁 柏 A *
P a ar g u : 刃关` in a l t’s 俗 称 “ 芦笋 ” 、 “ 龙须 菜 ” ,
属多年生宿根草本的百合科植物 ,实验证 明 ,
该植物体 内含有较 为丰富的蜀葵氨酸成分 。
笔者采用 R P 一 H P L C 法 ,邻 苯二 甲醛 一 2 琉基
乙醇柱后衍生 , 成功地进行 了对石刁 柏 中蜀
葵 氨 酸 的 分 离 与 检 测 , 得 到 回 收 率 为
9 6
.
4 %
, 标准偏差为 0 . 0 0 4 2% 的良好结果 。
1 仪器与试剂
仪器 : 美 国 W at er s 公 司 高效 液相 色谱
仪 : 包 括 M 一 5 10 高 压泵 , M 一 7 1 0 B 自动 进样
器 , M 一 47 0 荧光检测器 , M 一 7 30 数据处理机 ,
柱温控制系统 。
试剂 : 甲醇 、 无水醋酸钠 、 硼酸 、 氢氧化钾
为分析纯 ; 邻苯二 甲醛 、 2一琉 基乙 醉 、 蜀葵氨
酸标准品为优级纯 ; 水为重蒸水并经过 0 . 45
拜m 滤膜过滤 。
A d d r e s s
:
L iu H u iwe
n , I n s t i t u t e o f F o r e s t E n v
刘惠文 女 , 1 9 8 0 年毕业于 清华大学化学工程系事仪器化学和分析化学研究与试 验工作 。 19 9 4 年 以编 委出版专著《现代实用 仪器分析方法 》 , 先后在 《分析化学 》 、 《色甭》 、《中草药 》 、 《氛基酸与生物资源 》等杂志上发表论文 14 篇 。
示石最蚕下两丽百落乃万再丽万1丽 · 5 0 1 ·
2实验方法
2
.
1样品制备 :标准样品 :准确称取蜀葵氨
酸标准品5 .2m g于5 2mL 容量 瓶中 , 用重
蒸水溶解并定容 ,摇匀备用 。 样品制备 : 准确
称取石 刁柏植 物样 品 5 9 , 剪碎研细 后放人
25 0 m L 锥形 瓶 中 , 加人 50 m L 重蒸 水在水
浴上 回流提取 Z h ,过 滤定容于 50 m L 容量
瓶 中 , 滤液 经 0 . 45 拜m 滤 膜过 滤 后上 机 检
测 。
2
·
2 色谱条件 : 色谱柱 : Z o r b a x r x 一 C l : ( 0 . 4 6
X 2 5 e m )
, 柱 温 : 3 5 ℃ , 流动相 : 0 . 0 5 m o l / I J
N a A e
一
C H
3
O H = 8 0
: 2 0
, 流速 : 0 . 8 m L /m i n ,
荧光检测器 ,礼二 : 3 3 8 n m ,礼m : 4 2 5 n m o
3 实验结果
3
.
1 标准曲线绘制 : 准确 吸取上述标准溶液
2
、
4
、
6
、
8
、
1 0 m I
J ,分别放人 5 个 2 5 m L 容量
瓶中 , 用蒸馏水定容到刻度 ,摇匀 。 在上述色
谱条件下 , 对以上 5 种浓度的标准溶液进行
衍生 、 分离 , 以进样量为横坐标 , 峰面积 为纵
坐标绘制标准曲线 , 同时得标准图谱见 图 1 -
A
, 蜀 葵 氨 酸 的 线 性 回 归 方 程 为 Y -
3 0 1 6 5
.
O3X 十 1 2 5 8 7 . 8 3 , r = 0 . 9 8 4 2 。
3
.
2 精密度试验 : 精确吸取石刁柏样品提取
液 5 拌L , 平行进样 5 次 (n 一 5) , 测得蜀葵氨
酸 的 变 异 系 数 为 0 . 94 % , 标 准 偏 差 为
0
.
0 0 4 2%
。
3
.
3 回 收率实验 : 精确称取 2 . 8 m g 蜀葵氨
酸标 准品于 已精确称量好 的石刁柏样 品中 ,
重复样品制备过程 ,得测试液 ,进样 10 拜L 进
行分析 ,计算蜀葵氨酸的回收率为 96 . 4% 。
3
.
4 样品测定 : 精确吸取样品提取液 10 仁L
进样分析 , 得样品分离图谱见图 1一B , 以外标
定量 法计算石 刁 柏提取液 中蜀葵氨酸 的含
量 ,见表 1 。
时同 t( . . . ) 时闻 叹创 . )
A
一蜀葵氮酸 B一石刁柏
圈 1
表 1 样品中蜀葵氮酸含 .
石 刁柏样品中蜀葵氮酸分离图
样品号 1 2 3
含量 ( g八 0 0 9 ) 0 . 5 9 8 0 . 4 6 3 0 . 4 8 2
4 讨论
本文根据蜀葵氨酸的分子结构确定了其
在 Z or b a xr x 一 lC 。反 向分离柱上会 有很强的保
留 ,在对不 同比例的醋酸纳 / 甲醇流动相进行
的 多 次 试 验 中 , 发 现 0 . 05 m ol / L N a A c -
C H
3
O H = 8 0
: 2 0
, 流速为 0 . 8 m L / n , i n 时的
分离效果最好 。
由于氨基酸及其部分酞胺类物质的衍生
物在荧光 礼二 : 3 38 n m 、 礼m : 4 25 n m 波长处具
有很强的吸收 ,所 以本实验采用 了邻苯二 甲
醛 一 2一琉基 乙醇 ( O P A )柱后衍生 ,荧光检测器
检测的方法进行 了蜀葵氨酸的有效分离和检
测 , 在此波长下 , 蜀葵氨酸的 O P A 衍生物具
有很强的荧光吸收强度 ,不仅图谱清晰 , 峰形
对称 , 同时还避免了许多其它物质 的吸收干
扰 ,使定量更加准确 。
参 考 文 献
1 中国林科院分析中心 . 现代实用仪器分析方法 . 北京 :
中国林业出版社 , 19 9 4
2 oD
r r e s t e ij R C
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J C h
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,
1 9 9 6
,
A 7 2 4
:
1 5 9
3 中国人 民解 放军南京军 区药物 研究 组 . 中草药 通讯 ,
1 9 7 2
, 3 ( 4 )
:
3 0
( 1 9 9 8
一 0 9一 2 8 收稿 )
.
5 0 2
·