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Studies on Pharmacological Functions of Hatry Root of Astragalus membranaceus

黄芪毛状根药理作用的研究



全 文 :#药理#
黄芪毛状根药理作用的研究 3
金若敏 张晓晨 陈长勋 孙峥嵘 沈玉如 刘涤 胡之壁
k上海中医药大学 上海 usssvul
摘要 目的 }了解黄芪毛状根的药理作用 ∀方法 }口服给药 o观察黄芪毛状根对 ∆2半乳糖所致衰老
小鼠记忆力的影响及抗氧化作用 ~制备大鼠肾缺血再灌注模型 o测定黄芪毛状根对肾组织超氧化物歧化
酶k≥’⁄l活性及丙二醛k  ⁄„l含量的影响 ~测定环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠口服黄芪毛状根后
‘Ž细胞活性 ∀结果 }黄芪毛状根能改善衰老小鼠记忆力 o提高脑 !肝组织 ≥’⁄活性 o降低肝脏  ⁄„ 含
量 ~能降低缺血再灌注大鼠肾  ⁄„含量及血肌酐浓度 ~能提高免疫功能低下小鼠 ‘Ž细胞活性 ∀结论 }
与天然黄芪相似 o黄芪毛状根具有抗衰老 !抗过氧化及免疫调节作用 ∀
关键词 黄芪毛状根 衰老 抗氧化 ‘Ž细胞
黄芪为豆科植物膜荚黄芪及蒙古黄芪的干
燥根 o是最常用的补虚药之一 ∀我校中药生物
工程研究室采用生物工程技术以发根农杆菌
Αγροβαχτεριυ µ ρηιζογενεσ感染双子叶植物培养
毛状根已取得成功 ∀我们曾证实用大规模培养
技术生产的黄芪毛状根与黄芪在免疫功能及促
进造血方面的作用相似≈t ou  ∀本文进一步观察
黄芪毛状根在抗衰老等方面的作用 ∀
1 材料
1 q1 药物和试剂 黄芪毛状根水煎液 }黄芪毛
状根打成粗粉k由本校中药生物工程研究室提
供l o取 ussª加蒸馏水微火煮沸两次 o每次
vs°¬±o浓缩至 uss °¯ o药液浓度为每毫升含生
药 tª∀栽培黄芪水煎液 }黄芪购自上海药材公
司崇明分公司 o制备方法同上 ∀野生黄芪水煎
液 }黄芪购自上海药材公司 o经上海市中药质量
监督检验室叶愈青鉴定为山西产豆科植物膜荚
黄芪 Αστραγαλυσ µε µ βραναχευσkƒ¬¶¦«ql…ª¨ q的
干燥根 o制备方法同上 ∀ ∆2半乳糖 o上海试剂
二厂产品 o批号 |ys|us ~≥’⁄o ⁄„ 试剂盒 o南
京聚力生物医学工程研究所产品 o批号
|zs|ux ~肌酐k≤µ¨¤l生化测定试剂 o上海长征医
学科学有限公司产品 o批号 |{su|{ ~环磷酰胺
k≤ ≠l o上海华联制药公司产品 o批号 |ytuus ~
ƒ ˜§• o≥¬ª°¤公司产品 ~tuxŒ2˜§• o中国科学院
北京原子能科学院同位素研究所产品 o批号
|ztsts ∀
1 q2 动物 昆明种小鼠 o雌雄皆用 ~≥⁄大鼠 o
雄性 o由上海中医药大学实验动物中心提供 ∀
1 q3 仪器 ≥‘2y{u放射免疫 µ计数器为中国
科学院上海原子核研究所日环仪器厂生产 ~zxu
紫外光栅分光光度计为上海第三分析仪器厂生
产 ∀
2 方法和结果
2 q1 对 ∆2半乳糖所致衰老小鼠记忆的影响
将 tz ∗ usª小鼠随机分成 y组 ∀t ou组k正
常组 o模型对照组l每组 tu只 ov ∗ y组每组 ts
只 ∀第 t ou 组小鼠每天灌服生理盐水 ts °¯ #
®ªp t o第 v ∗ y组小鼠分别每天灌服黄芪毛状根
x otsª#®ªp t o栽培黄芪 tsª#®ªp t o野生黄芪 tsª
#®ªp t o连续 xs§∀第 u ∗ y组小鼠同时每天每
只皮下注射 x h ∆2半乳糖 s qx °¯ ∀各组小鼠于
第 w|天开始按跳台法≈v 进行记忆力测定 ∀先
将小鼠放在实验箱内熟悉环境 t°¬±o然后放到
平台上 o当小鼠从台上跳下 o四肢均接触铜条时
立即给予 vs∂ 的电刺激 o迫使小鼠逃避回到平
台上 ∀若小鼠在平台上 v°¬±不跳下 o则将小鼠
放到铜条上 o并立即给予电刺激 o使其逃避回到
3 国家自然科学基金资助项目 ‘²qv|yzs{zz
#|ty# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期
平台上 ∀uw«后以同法对各小鼠进行测验 ∀将
小鼠第 t次在平台上逗留的时间作为 ≥⁄o第
t次受电刺激后逃避回到平台上的时间作为
∞o同时记录小鼠在 x°¬±内跳下平台的错误
次数 ∀若小鼠在平台上逗留时间已达 v°¬±还
没跳下 o则 ≥⁄计作 v°¬±o并将其取下放到铜
条上立即给予电刺激 o继续观察 ∞及小鼠
x°¬±内跳下平台的错误次数 ∀将正常组或各
给药组小鼠的 ∞值 !≥⁄值及错误次数进行
编秩 o求秩和 o进行两样本比较的秩和检验 o并
查秩和检验 × 界值表统计分析 o比较差异 o结果
见表 t ∀
结果显示 o∆2半乳糖模型小鼠记忆明显减
退 o表现为 ∞时间延长 o≥⁄时间缩短 o跳台
错误次数增多 o而 tsª#®ªp t的黄芪毛状根可改
善衰老小鼠的记忆 o与模型组比较有显著性差
异 o此作用与同剂量的栽培黄芪 !野生黄芪作用
相近 ∀
表 t 黄芪毛状根对衰老小鼠记忆的影响
组别
剂量
ª#®ªp t
∞ ≥⁄ x°¬±错误次数
正常组

tsvul
kt|zl
ustul
k||l
ttttl
kt{|l
黄芪毛状根 x

|u qx
ktys qxl
twv qx
kts| qxl
|s
ktyvl
ts
yw qxul
kt{{ qxl
tyuul
k|tl
y{ul
kt{xl
栽培黄芪

ts

yv qxul
kt{| qxl
tv{
kttxl
{x
kty{l
野生黄芪

ts

ysul
kt|vl
tyt qxul
k|t qxl
ztul
kt{ul
注 }表内数值为秩和值 o括号内数值为模型组秩和值 o各组
均与模型组排秩比较tl Π s qsx ul Π s qst
2 q2 对衰老小鼠组织过氧化脂质k°’l及
≥’⁄活性的影响 取上述小鼠于第 xt天取大
脑及肝脏 o计算脑重r体重指数 o将脑与肝脏制
备成匀浆 o按试剂盒说明书测定 ≥’⁄活性及
°’含量 o°’ 含量以  ⁄„ 表示 o结果见表
u ∀
表 u 黄芪毛状根对衰老小鼠脑指数及脏器 ≥’⁄o ⁄„含量的影响
组别
剂量
ª#®ªp t
脑指数
°ª#tsªp t

≥’⁄ ‘˜# °¯ p t  ⁄„ ±°²¯# °¯ p t
肝脏
≥’⁄ ‘˜# °¯ p t  ⁄„ ±°²¯# °¯ p t
正常组 {w qvw ? tt qs| v{ qyz ? u q{xul vw qus ? x qtz ys qzw ? u qxuul vv qtx ? v qz{ul
模型组 z{ qsz ? | qwz vw qsu ? v qxs vy qy{ ? v qyt xt qyy ? x qsv v| qt| ? x qy{
黄芪毛状根 x {t qx{ ? tu q{t vz qxs ? w qww vv qt{ ? w qut xw qt{ ? { qsy vz qu{ ? w q{t
ts {x qvz ? tu qyy vz qyw ? w quxtl vw qzz ? t q|| x{ qty ? x quyul vv qy{ ? u qvyul
栽培黄芪 ts {x qyz ? tx q{x vz qvy ? v q{{tl vv qwv ? v qz{ x{ qwv ? z qwztl vu qs{ ? v qzsul
野生黄芪 ts {w qzz ? tt qxt v| quu ? u qx|ul vt q|y ? w qzxtl x{ q{y ? x qtsul u| qxw ? v quyul
注 }≠ ξ ? σ 与模型组比较 t) Π s .sx u) Π s qst
结果显示 o衰老模型小鼠大脑及肝脏 ≥’⁄
活性明显下降 o肝脏 °’ 含量明显升高 ∀tsª#
®ªp t的黄芪毛状根可显著提高模型鼠大脑和肝
脏 ≥’⁄活性 o抑制肝组织 °’的生成 ∀此作用
与同剂量的栽培黄芪 !野生黄芪作用相近 ∀模
型组小鼠脑重指数有下降趋势 o给黄芪毛状根
或黄芪后 o小鼠脑重指数有提高趋势 ∀
2 q3 对大鼠肾缺血再灌注肾组织 °’ 及 ≥’⁄
的影响≈w  取 uws ∗ uzsª大鼠随机分为 y组 o
每组 ts只 ∀第 t ou组大鼠每天灌服生理盐水
ts °¯ #®ªp t o第 v ∗ y组大鼠分别每天灌服黄芪
毛状根 x otsª#®ªp t o栽培黄芪 tsª#®ªp t o野生
黄芪 tsª#®ªp t o连续 w§∀第 v天给药 t«后以
v h戊巴比妥钠麻醉大鼠 o仰位固定 o打开腹腔 o
由肾动脉注入 t h肝素 s qx °¯ #®ªp t o然后结扎
右肾动脉并切除 ∀除第 t组k正常组l外 o其余
各鼠以动脉夹夹闭左肾动脉 t«o然后去除动脉
夹并缝合伤口 o造成肾缺血再灌注模型 ∀ uw«
后 o取大鼠左肾肾皮质 t{s ∗ uss°ªo制备组织
匀浆 o测定肾组织 °’ 含量及 ≥’⁄活性 o结果
见表 v ∀
结果显示 o缺血再灌注后肾组织 °’含量
#suy# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期
表 v 黄芪毛状根对大鼠缺血
再灌注肾脏 ≥’⁄o ⁄„含量的影响
组别
剂量
ª#®ªp t
≥’⁄
‘˜# °¯ p t
 ⁄„
±°²¯# °¯ p t
正常 ww q|v ? v qs| ux qzz ? w qwsul
模型 wu qus ? y qyu ws qt| ? w qty
黄芪毛状根 x wv qyy ? v q|{ vw q|w ? w q|wtl
ts wy qww ? w q|x vw qyu ? w q{xtl
栽培黄芪 ts wu qyz ? w qtw vw qww ? y qzvtl
野生黄芪 ts wy q{t ? y qzz vv qt| ? y qsvul
升高 o而 x otsª#®ªp t黄芪毛状根可显著抑制
°’升高 o作用与栽培黄芪 !野生黄芪相似 ∀
缺血再灌注 uw«后测定表明 o正常组 !模型
组 o黄芪毛状根 x otsª#®ªp t及栽培黄芪 tsª#
®ªp t o野生黄芪 tsª#®ªp t组大鼠血清肌酐含量
分别为kz qw ? t qslΛ°²¯ #pt okuz qv ? { qyl
Λ°²¯#p t okt| q| ? x q|lΛ°²¯ #pt okt{ qv ?
x qulΛ°²¯ #p t okt| qt ? y qxlΛ°²¯ #pt及
ktz q{ ? y qtlΛ°²¯#pt ∀模型组血清肌酐含量
显著升高k Π s qstl o表明肾功能受损 o而黄芪
毛状根及栽培黄芪 !野生黄芪均可显著抑制血
清肌酐含量的升高k Π s qsxl ∀
2 q4 对环磷酰胺型小鼠 ‘Ž细胞活性的影
响≈x  取 t{ ∗ uuª小鼠 o随机分为 y组 o每组
ts只 ∀第 t ou组小鼠每天灌服生理盐水 ts °¯ #
®ªp t o第 v ∗ y组小鼠分别每天灌服黄芪毛状根
x otsª#®ªp t o栽培黄芪 tsª#®ªp t o野生黄芪 tsª
#®ªp t o连续 tu§∀第 u ∗ y组各小鼠隔天腹腔
注射环磷酰胺 ws°ª#®ªp t o末次给药 t«后在无
菌条件下取小鼠脾脏进行效应器细胞的制备 o
以 ≠¤¦2t细胞作为靶细胞 otuxŒ2˜§• 作为标记
物测定 ‘Ž细胞的活性 o以tuxŒ2˜§• 释放百分
率作为 ‘Ž细胞的活性指标≈x  ∀结果上述各组
‘Ž
细胞的活性分别为u{ qv ? tw qy os qwt ? s qzv o
u qx| ? u qsu ov qvs ? u qt{ ov qz{ ? u qys及 w qyv
? u qxu ∀模型组与正常组比较 ‘Ž细胞活性明
显降低k Π  s qstl o黄芪毛状根 x otsª#®ªp t o
及栽培黄芪 !野生黄芪能明显对抗环磷酰胺所
致免疫功能低下小鼠 ‘Ž细胞活性的降低 o作
用显著k Π s qstl ∀
3 讨论
黄芪是中医处方的常用要药 o具有补虚抗
衰的功效 ∀本文选择与此相关的药理指标观察
比较黄芪毛状根与黄芪的作用 ∀实验结果显示
黄芪毛状根对 ∆2半乳糖所致衰老小鼠有抗衰
老作用 o可改善记忆 ∀从分子生物学角度分析 o
衰老与氧自由基引起生物膜脂类过氧化 o导致
膜结构损伤和功能失活有密切关系 o尤其对脑
细胞的影响是导致老年人记忆 !思维功能减退
的重要因素 ∀本文研究结果表明 o黄芪毛状根
可抑制衰老小鼠肝脏过氧化脂质的生成 o且可
提高肝 !脑组织 ≥’⁄活性从而加速自由基的清
除 ∀在肾缺血再灌注实验中 o由于大量自由基
产生导致膜脂质过氧化 o肾功能受到损害 ∀黄
芪毛状根通过抑制脂质过氧化而保护了肾功
能 o从另一角度证实了黄芪毛状根抗自由基的
作用 ∀
中医有/正气存内 o邪不可干0 o/邪之所凑 o
其气必虚0的论述 o明确指出/正气0与机体对疾
病抵抗力的内在联系 ∀本实验证实黄芪毛状根
能显著增强体虚小鼠 ‘Ž细胞的活性 o与扶正
固本 o抗衰老作用一致 ∀
本实验从多方面证实黄芪毛状根与黄芪具
有相似的作用 o且作用强度相近 o从而为开发利
用黄芪毛状根提供了新的实验依据 ∀
4 参考文献
t 金若敏 o陈长勋 o沈艳 o等 1 黄芪毛状根与黄芪药理作用的
比较研究 1 上海中医药大学上海市中医药研究院学报 o
t||y otskul }|{
u 金若敏 o陈长勋 o孙峥嵘 o等 1 黄芪毛状根对造血系统功能
的作用 1 中药材 ot||{ outktl }uy
v 陈长勋 o金若敏 o李仪奎 o等 1 银杏叶提取物改善小鼠记忆
作用的研究 1 中国中药杂志 ot||t otykttl }y{t
w 陈鸿瑾 o刘桂东 o王昆 o等 1 黄芪对大鼠肾缺血再灌流时过
氧化脂质含量的影响 1 徐州医学院学报 ot|{| o|kvl }t{y
x 李仪奎主编 1 中药药理实验方法学 1 上海 }上海科学技术
出版社 ot||t qtyx
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#tuy# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 ts期