全 文 ：· 药剂与工艺 ·
H P Lc
一光敏二极管阵列检测法测定
人参单体皂试的研究
保定市药品检验所 ( 0 7 10 0 0)
河北大学理化分析中心
刘 军 辛
王燕桓 傅承光
摘 要 讨论了流动相为异丙醇一甲醇非水体系配合极性柱分离人参单体皂贰的情况 。 试验中选
用了极性较强的 NH : 基键合相柱 , 以甲醇 一异丙醇 ( 62 : 38 V / V )为流动相 , 选择二极管阵列检测
器 , U V 204 n m 处检测 ,分离了单体皂贰 R e 、 R g , 、 R b : ,方法操作简单 、快速 、 重现性好 , 线性范围
宽 ,检出限低 ,可用于人参及各种制剂的分析 。
关键词 H P L C 人参单体皂贰 R e 、 R g l 、 R b l 人参
人参是我 国的名贵药材 ,人参皂贰是其
最重要 的生理活性成分 ,有关人参及其制剂
中人参皂贰的分离 、 分析的方法较多 ,有分光
光度法川 , 比色法田 , 气相色谱法川 , 薄层 扫
描 法叫 , 高效液相色谱法 , 一 8〕等等 。 但是 ,
H P L c 法在分离人参皂贰 R g , 和 R e 与其它
单体皂贰时 , 目前普遍使用的 O D S 柱需要两
种流动相系统川或梯度洗脱川 ,操作繁杂 ,分
离亦不甚理想 。 我们首次应用异丙醇与甲醇
组成非水流动相与 N H : 基键合相柱 ,选择光
敏二极管阵列检测器 , 所得谱图保证了定性
的 准确性和 可 靠性 。 U V 2 04 n m 检测 , 将
R g
l 、
R e 和 R b , 同时检测 出来 。 流动相简单 ,
精密度高 ,分离效果好 , 准确 ,快速 ,并分析了
人参中主要单体皂贰的含量 , 结果满意 。
1 实验部分
1
.
1 仪器和试剂 : 岛津 L C 一 g A 型液相色谱
仪 , S P D 一M 6 A 型 U V 一 V I S 检测 器 , 7 2 2 5 型
注射进样阀 , 氨基键合相柱 , N u e l e o s i l N H Z
( 5 拼m 2 5 O m m x 4 . 6 m m ) 自装柱 ; 4 8 6 微机
数据处理系统 。试剂 : 甲醇为优级纯 ,异丙醇 、
乙 醚均 为分析纯 , 水饱和正 丁醇 , 人参皂贰
R e
、
R g
, 、
R b
,
(中国药品生物制品检定所 ) ,水
为三蒸水 。人参样品 : 生晒参须根 、 西洋参 、 高
丽参 (市售商品 ,保定市药检所中药室鉴定 ) 。
1
.
2 样品 处理 : 将生药样 品 60 C烘干 , 研
磨 ,取粉末 1 9 ,加 甲醇 2 5 m L ,加热回流 7 h ,
放冷 , 过滤 , 用甲醇 20 m L 分 5 次洗涤残渣 ,
每次用甲醇 4 m l , ,洗液及滤液合并于 50 m L
容量瓶中 ,并定容 。 取滤液 2 m L , 蒸干 ,残渣
用 Z m 工矛 水溶解 , 每次加 乙醚 Z m L 提取 4
次 ,弃去 乙醚液 ,然后用水饱和正丁醇提取水
相 3 次 , 每次用水饱和正丁醇 1 m L , 合并提
取液 , 用水洗 2次 , 每次用水 2 m L 。 将水饱和
正丁醇减压蒸干 , 残渣用 甲醇稀释成 1 in L ,
供进样分析用 。
.1 3 H P L C 分析 : 色谱条件 : 采用氨基键合
相柱 , N u e l e o s i l N H Z ( 5 拌m 2 5 0 m m 又 4 · 6
m m ) 自装柱 。 流动相 : 甲醇 一异丙醇 一 62 : 38
( V /V ) ;流速 : 0 . 5 m L /m in ;紫外检测波长 :
入= 2 0 4 n m ;人参单体皂贰 R e 、 R g , 、 R b , 对照
品的色谱图见图 1。
2 结果与讨论
2
.
1 分离检测条件 : 采用氨基键合相柱 , 甲
犷督 s公扎韶絮撵贾笋晶琶突驾笔舞号裔翼货兮掇,耙器7 年在河北大学理化分析中心攻读硕士研究生 ,获硕士学位 。 期间在导师傅承光教授等的指导下主要从事高效液相色谱法在药物分析中的应用研究 , 取得系列成果 ,论文曾在《药物分析杂志 》 、 《中国药学杂志 》等多家刊物上发表 , 并在第七届国际精细化学与功能高分子学术研讨会上交流 ,录人论文集 。 现为保定市药检所主管药师 。
一
2 2 8
-
醇一异丙醇非水二元体系 ,对人参单体皂贰实
现了 良好分离 , 流动相中异丙醇与甲醇配 比
选择见图 2 。
}
时间 t( n u D )
图 i 人参单体皂试 R e 、 R g l 、 R b ; 谱图
峰号 : 1一 R g 1 2一 R e 3一 R b ,
/ 丫
2 5
ǎ昌àJ宜七画联
1
:黑蒸熟恙禹
10 0 90 8 0 7 0 6 0 5 0
图 2
异丙阵 一 甲醉 ( v / v )
流动相组成对人参皂俄保留时间的影响
1
一
R又 2 2一R e 3一 R b l
当异丙醇 一甲醇一 20 : 8 0( V /V )时 ,人参
皂贰 R g l 、 R e 、 R b l 实现基线分离 , 分离时间
在 15 m in 内 ,氨基键合相是一种极性较强的
固定相 , 其中一 N H : 基具有强 的氢键结合能
力 , 氨基可与人参单体皂贰分子中的轻基间
有选择性的相互作用 。 实验中采用甲醇一异丙
醇作 .流动相 ,改善了人参皂贰分子的溶解性
能 , 使该体系对 3 种皂贰的相互作用存在差
异 , 因而对人参皂贰这种多官能 团化合物有
较好的分离能力 ,在这一体系中使单体人参
皂贰 R e 、 R g , 、 R b : 实现 了 良好的基线分离 。
选用 U V 20 4 n m 波长检测 ,改善了检测灵敏
度 ,获得了较低的检出限 。
实验工作中还检验了 P E 一 O D S 柱与 甲
醇一水 、 甲醇一乙腊 一水 、 甲醇 一异丙醇一水等体
系 , 当以 U V 2 0 4 n m 检测时 ,以 甲醇 一水效果
最好 ,当采用 甲醇 一水 一 65 : 35 ( V /V ) ,磷酸
调 p H 3 ` 9 0 为流动相时 ,对 R e 、 R g , 分离较
好 , 但与 R b l 的保 留时间相 差太大 , 因此未
《中草药》 1 99 8 年第 29 卷第 4 期
采用 O D S 柱与甲醇 一水流动相组成的反相体
系 ,而选用了甲醇一异丙醇的非水二元体系作
为流动相配合 N H : 基柱 。 在测定人参样品
时 ,考虑到人参成分较复杂 ,为了确保色谱峰
定性的准确可靠 ,将流动相中甲醇 一异丙醇组
成 比例改变 , 同时采用三维谱图定性 , 结果 ,
当 甲醇一异丙醇为 62 : 3 8( V / V ) 时即可很好
地分离样品中的主要人参单体皂贰 , 而且保
留时间适中 。
2
.
2 标准工作曲线的回归方程 、 最低检出
限 、 线性范围 、重复性 : 用 甲醇配制单体人参
皂贰 R e 、 R g , 、 R b , 的标准混合溶液 , 浓度均
为 1 m g /m L , 作为贮备液 , 并稀释成一定浓
度 , 取一定量进样 , 分别进样 3 次 , 按选定的
条件进行实验 , R e 、 R g , 、 R b 、 以平均峰高对
单体皂贰的含量伽 g ) , 求得回归方程 , 以二
倍信噪 比计算最低检出限 ,结果见表 1 。
将标样重复进 样 , 测 得 人参皂贰 R e 、
R g
l 、
R b
, 的 相 对 标 准 偏 差 R S D 分 别 为
1
.
4%
、
1
.
0 %
、
2
.
2 % ( n = 7 )
。
表 1 标准工作曲线的回归方程 、
线性范围 、最低检出限
组分 线性范围
(拜g ) 回归方程
相关系数
( r )
最低检出限
( n g )
R g l 0
.
2~ 30
R
e 0
.
3~ 30
Y 一 1 . 75 8十 2 2 . 3 8X
Y一 3 . 32 6+ 15 . 5 8X
0
,
99 99 1 20
0
.
99 99 1 67
R b l 0
.
4~ 3 0 Y 二 0 . 95 83 + 9 . 82 0X 0 . 99 99 2 97
结果表 明 , 已建立的分析方法线性关系
很好 , 而且重现性也很好 ,适于含人参皂贰样
品的定量分析 。
2
.
3 人参样品的色谱分析 : 人参样品分析的
色谱图见图 3 。 表 2 列出几种生药的定量分
析结果 。 .
表 2 样品中单体皂试含 t 的测定结果
样品 含 量 ( 写 g / g )
R g l R e R b l
生晒参根须
西洋参
高丽参
0
.
4 7 0
.
4 3 0
.
9 8
0
.
7 2 0
.
1 9 0
.
3 1
0
.
4 0 0
.
3 2 0 7 4
·
2 2 9
.
方一了一下一才一方一窍一亩尸玄飞了飞方牛方
时间 艺( un n)
图 3 西洋参色谱图
峰序号同图 1
2. 4 方法的精密度和 回收率试验 :以生晒参
根须为样品 ,分别准确称取 5 份参根粉 ,进行
精密度试验 ,结果 R e 、 R g , 、 R b , 的 R S D 分别
为 2 . 3 0 % 、 1 . 2 5% 、 2 . 8 5% ( n = 5 ) 。
以西洋参根为样品 ,准确称取 4 份 ,将其
中的 3 份分别入加一定量的单体皂贰标准
品 , 进行 回收率试验 , 结果表 明 , 样品 的回收
率在 94 % ~ 1 02 %之 间 。
3 结论
本文建立了高效液相色谱紫外检测人参
单体皂贰的定量分析方法 。 该方法快速 、 简
便 、 准确 ,可用于人参生药的测定 。 选择合适
的甲醇一异丙醇的比例 ,可测定各种人参制剂
中的人参皂贰 。
致谢 : 保定市 药检所中药室的张 建英 、 田
桂敏 、 谢超群等同志提供对照品 和 帮助 , 特此
致谢 。
参 考 文 献
l 阎天午 , 等 . 中成药 , 1 9 9 3 , 1 5 ( 1 1 ) : 1 4
2 王 林 , 等 . 中国药学杂志 , 19 95 , 3 0 ( 6) : 3 64
3 板本征则 , 他 . 某学雏蒜 , 1 9 7 5 , 9 5 ( 1 2 ) : 1 4 6
4 刘高峰 , 等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 6 , 2 1 ( 9 ) : 5 4 2
5 马 鹏 , 等 . 华西药学杂志 , 1 9 9 5 , 1 0 ( l ) : 2 1
6 周志华 , 等 . 药学学报 , 1 9 8 8 , 2 3 ( 2 ) : 1 3 7
7 K a n a z a w a H
, e t a l
.
J C h r o m a t o g r
,
1 9 9 0
,
5 0 7
:
3 2 7
8 顾光华 , 等 . 色谱 , 1 99 4 , 1 2 ( l ) : 4 0
( 1 9 9 7
一 0 1
一
0 3 收稿 )
D e t e r m i n a t i o n o f G i n s e n g S a P o n i n s b y H P L C
一
P h o t o d i o d e A s s a y U V
一
V I S D e t e c t i o n
L i u J u n ( B a o d i n g I n s t i t u t e f o r D r u g C o n t r o l
,
B a o d i
n g 0 7 1 0 0 0 )
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a n h u a n
,
F u C h
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,
H e b e i U n iv e r s it y )
A b s t r a e t A
s t u d y o n H P L C d e t e r m i n a t io n o f g i n s e n o s i d e s (R g l
,
R
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R b l ) in G i n s e n g w i t h p h o t o d i o d e a s
-
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一
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a s b e e n p r o p o s e d
.
T h
e g in s e n o s id
e s e a n b e s e p a r a t e d o n N u e le o s il N H : e o l u m n w i t h
m e t h a n o l
一
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,
3 8 ) a s e lu e n t
.
T h e e f f e e t o f t h e e o m p o s it i o n o f m o b il e P h a s e o n t h e s e P a r a t i o n
o
f g i
n s e n o s id
e s w a s in v e s t ig a t e d
.
T h i
s m e t h o d w a s s im p l e
, s e n s i t iv e
, a e c u r a t e a n d p
r e e i s e
, a n d h
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b
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e
d
in t h
e
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e t e r m in a t i o n o f t h e g i n s e n o s id e e o n t e n t o f w h i t e G in s e n g h a i r r o o t
,
A m e r i e a n G i n s e n g a n d K o r e a n
G i
n s e n g
,
w i t h s a t i s fa e t o r y r e s u l t s
.
K e y W
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R g
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· 书 讯 ·
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邮编 : 1 0 0 0 9 4 电话 : ( 0 1 0 ) 6 2 8 9 6 7 7 2
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2 3 0
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