全 文 ：用 R P 一H PL c 法测定黄蔑毛状根中黄茂 甲昔的含t △
上海中医药大学中药学院中药生物工程研究室 (2 0 0 0 3 2) 郑志仁 . 宋纯清 刘 涤 胡之璧
摘 要 R P 一H PL C 法对黄蔑毛状根中黄蔑甲昔进行定量分析 , 在实验条件下 , 黄蔑 甲昔标准 品在
1 0
.
6 4 ~ 5 3
.
2 0 拌g 范围内与峰面积 呈 良好的线性关系 ,平均加样回收率为 92 . “% ; 精密度试验 相
对标准偏差为 4 . 2 0 % 和 2 . 40 % ; 测得黄蔑 毛状根中黄蔑 甲昔的含量为 0 . 14 % (千重 ) 。
关健词 HPL C 黄蔑 毛状根 黄蔑甲昔
黄蔑 为多年 生 草本植 物膜 英黄 蔑 A s -
tra g a lu s m em bra n a e e u s (Fis eh
.
)B u n g e 和蒙
古 黄 蔑 A · m e m bra n a c e u s B u n g e v a r .
m o n g h o lie “s (B u n g e ) H sia o 的干燥根 〔‘〕 ; 黄
蔑甲昔 (a s t r a g alo s id e w )为其主要有效成分
之一 , 有 降压 消炎 , 镇静镇痛 , 影响血清和肝
脏 蛋 白质合 成 , 影 响 血浆 。A MP 及再 生 肝
D N A 合成 , 促进 N K 细胞 (自然杀伤细胞 )活
性及抗肝损伤等作用 〔卜 6〕。 为扩大药物资源 ,
近年来我们研究 室用发根农杆菌 (A g ro ba ‘-
te ri u m rh i
z o g e n e s ) L B A 9 4 0 2 菌株诱导形成
膜 英黄茂毛状根 (h al r yro o t ) , 进行毛状根大
规模 培养研究 , 并 用 R P 一H P L C 法测定 了毛
状根中黄蔑 甲昔的含量 。 本文报道其测定方
法和结果 。
1 仪器与试剂
W at er
s 高效 液 相 色谱 仪 : 包 括 5 10 型
泵 , 9 91 光 电二极 管阵列 型检测器 , U 6 K 型
进样器 ; N E 仁 Po w e r M a te 型计算机 。
黄蔑 甲昔标 准品购 自上海市 药 品检验
所 。甲醇 、正丁醇为分析纯 , 乙睛为色谱纯 、水
为去离子水 ;黄蔑毛状根 培养按 文献 〔7〕方法
进行 。崇明产膜荚黄蔑购 自上海市药材公 司 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱 条 件 : 色谱柱 为 N u ele o s il C 1 8 柱
(4
·
6 m m X 2 5 0 m m
,
5 拜m ) ; 流动相 为乙 睛 -
水一 1 : 2 ; 流速为 0 . 8 m L / m i川 检测波长为
2 0 5 n m ;纸速度为 0 . 4 m m / m in 。
2
.
2 标准 曲线制作 : 精密称取黄蔑 甲昔标准
品 2 . 1 2 8 m g , 加流动相定容至 2 m L , 配制 曳
1
.
0 6 4 m g / m L 的标准品溶液 , 分别以 1 0 、 2 , 、
3 0
、
4 0
、
5 0 拼L 进样测定 , 以峰 面积对 进样量
作线性 回归 , 得回归方程为 Y - 一 5 . 6 x 10 一 ”
+ 6. 9 3 6 5 X IO一
4
X (Y 为峰面积 , X 为黄茂 甲
昔量 ) , r 一 0 . 9 9 9 4 , 黄蔑 甲昔标准品在 1 0 . 64
一 53 . 2 0 拜g 范围 内与峰 面积 呈 良好线性关
系 。
2
.
3 样品提取方法的选择 : 用 3 种不同提取
方法 (索氏提取器 提取 l h ; 80 ℃温浸提取 1
h 和超声波提取 l h )提取样 品 , 后 2 种提取
方法测得黄氏甲昔含量略低 , 故选 用第一种
方法 。
2
.
4 流动相 的选择 : 实验试 用多种溶剂 系
统 , 最后确定 以乙睛 一水一 1 : 2 为流动相 , 黄
蔑甲昔分离效果最好 , 保 留时间也较适宜 。
色谱图见图 1 (A 、B 、C ) 。
2
.
5 样 品液制备 : 精密称取黄蔑毛状根粉状
5. 0 9
, 置索氏提取器中用 1 0 m L 80 % 甲醇
提取 Z h , 提取液减压蒸去 甲醇 , 用 ZO m L 正
丁醇分配 3 次 , 合并正丁醇部分 , 减压蒸 干 ,
残渣 用重蒸 甲醇定容 至 Z m L , 用 0 . 45 拌 微
孔滤膜 过滤 , 滤液用 于 H PL C 分析 , 每 次进
A d d r e s s
:
Zh e n g Z hir e n
,
C o lle g e o f C hin e s e M a t e r ia M ed ie a
,
Sh a n g h a i U n iv e r s ity o f T r a d itio n a lC hin e s e M ed iein e a n d
M a t e r ia M e d ie a
,
郑 志仁 男 , 1 9 9 4 年 7 月毕 业于 范大学生物系 , 获理学 硕士学位 , 1 9 9 7 年 7 月毕业于上海 中医药大学 中药 系 , 获
医学 博士学位 , 1 9 9 7 至今为中国科学院上海植物生理研究所博 士后 。△ 国家 自然科学基金 , 上海市科 委和教委资助项 目
.
9 8
.
样 1 0 拌L 。 的含量 , 结果见表 1 。
裹 1 毛状根及干澡根中黄蔑甲普的含t
样品 黄蔑甲昔 (m g / g )
干燥根
毛接根
0
.
1 5
O
。
1 4
时间 r(丽 . )
A
一标准品 压毛状 根 C 一生药 1 一黄蔑 甲昔
圈 l 黄蔑甲普 H P LC 图谱
2
.
6 加样 回收率试验 : 称取 已知黄蔑甲昔含
量的黄茂毛状根粉 5 . 0 0 9 3 份 , 分别精密加
人黄蔑 甲昔 标准品 2 . 0 m g , 按样 品制备方
法提取样 品并进行定量分析 , 将测定结果扣
除样 品中黄蔑 甲昔含量 , 与加人标准品的 比
为加样回收率 。 结果为 9 2 . 6 6 % (n 一 3 ) 。
2
.
7 精密度试验 : 取 同一样品液 , 重复进样
5 次 , 根 据测 得 的样 品 中黄 蔑 甲昔 的浓 度
恤g / m L )计算其相对标准偏差为 2 . 40 % 。
又取同一样品 5 份 , 制备 5 份样品液 , 分
别进样测 出黄茂 甲昔的浓度 , 计算其相对标
准偏差为 4 . 2 0 % 。
2
.
8 毛状根及生药 中黄蔑 甲昔的定量分析 :
依法测定黄茂毛状根及祟明黄茂中黄蔑甲昔
3 讨论
黄 蔑 甲昔 是 黄 茂 的 主 要 有 效 成 分 之
一 〔8 , 9“ , 为定量分析黄蔑毛状根中黄蔑甲昔的
含量 , 本 实验建立 了黄蔑 甲昔的 R P 一H P L C
测定法 , 测得黄蔑毛状根中黄蔑 甲昔的含量
为 0 . 1 4 % (干重 ) , 与其亲本植 物 (崇 明产膜
英黄蔑 )根中含量 (0 . 1 5% )相近 。
目前 , 黄蔑 甲昔常用的定量测定方法为
薄层扫描法 〔10 一 12j 和 比色法〔13j 。 本实验建立
的 R P一H PL C 测定 法加样回收率高 , 精密度
试验相对标准偏差小 , 测试数据更可靠 。
参 考 文 献
1 中华人 民共和 国药典 (一部 ) . 广 州 : 广东 科技 出版社 ,
1 9 9 5
:
2 7 1
2 张银娣 , 等 . 药学学报 , 1 9 8 4 , 1 9 (5 ) : 3 3 3
3 张银 娣 , 等 . 南京医学院学报 , 1 9 84 , (4) : 2 25 ,
4 张银娣 , 等 . 药学学报 , 1 9 8 4 , 1 9 (8 ) : 6 1 9
5 尤丽芬 , 等 . 中国免疫学杂志 , 1 9 90 , 6( 1 ) : 60
6 张银娣 , 等 . 药学学报 , 1 9 9 2 , 2 7 (6 ) : 4 0 1
7 郑志仁 , 等 . 植物生理学通讯 , 1 9 97 , 3 3 (2) : 13 3
8 H ir o ta n i M
, e t a l
.
Phy t o ehe m is tr y
,
1 9 9 4
,
3 6 (3 )
:
66 5
9 H ir o ta n iM
, e t a l
.
Phy t o eh e m is t r y
,
1 9 9 4
,
3 7 (5 )
;
14 0 3
1 0 鲁 静 , 等 . 中成药 , 1 9 92 , 14 (6 ) : 34
1 1 曹正 中 , 等 . 药物分 析杂志 , 1 9 98 , 8 (3) : 176
1 2 李连 达 , 等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 1 , 1 6 (2 ) :习0
1 3 俞家华 , 等 . 中药通报 , 1 9 8 6 , 1 1 (9 ) : 3 8
(1 9 9 8
一
1 2
一
2 收稿)
D e te r m in a tio n o f A st r a g a lo sid e W in th e H a iry R o o t C u ltu r e s o f M e m b r a n o u s M ilk v e t c h
(A s tra g a lu s m e m bra n a ce u s ) by R P
一
H P L C
Z h e n g Z h ir e n
,
S o n g C hu n q in g
,
L iu D i
, et a l
.
(L a b o r a to ry o f Bio te e h n o lo g y o f C h in e s e M
a te ria M
e die a
,
S h a n g h a i U n iv e rs it y o f T ra d it io n a l C h in e s e M
e d ie in e a n d M
a te ria M
e d ie a
,
S h a n g h a i
,
2 0 0 0 3 2)
A bs t
r a c t A n a e e u r a te H PL C m e th o d fo r th e d e t e rm in a tio n o f a s tr a g a lo s id e IV in th e h a ir y r o o t e u l
-
tu r e s o f A stra 邵lu s m e m b r a n a c eu s (F is e h . ) B u n g e w a s d e v e lo p e d . C a lib r a t io n g r a p h s w a s r ee t ilin e a r b e tw e e n
1 0
·
6 4 拌9 a n d 5 3 · 2 0 拜9 u n d e r th e e x p e r im e n ta l e o n d itio n s · T h e r e e o v e r y w a s 9 2 · 6 6 % · T h e r e la tiv e s t a n d a rd
d e v ia tio n s (R S Ds )
o f m e a s u r e m e n t p re eis io n te s t w e r e 4
.
2 0 %
a n d 2
. 心。% . T h e a s tr a g a lo s id e W e o n te n t m e a -
s u r e d in t he ha iy r o o t eu ltu r e s w a s o
·
1 4 % (d
r y w e ig ht )
·
K e y w o r d s R P
一
H PL C A stra g
a lu s m em bra
n a c e u s (F is e h
·
) B u n g e h a ir y r o o ts a s tr a g a lo s id e IV
《中草药》1 9 9 9 年第 3 0 卷第 2 期