全 文 ：· 药剂与工艺 ·
R P
一
H P L C 法测定不同采收期黄花乌头中
关附甲素的含量
中国药科大学天然 药物化学教研 室 (南京 2 1 0 0 0 9) 冯 锋 ’ 黄 剑 刘静 涵
摘 要 采 用 R P一 H IP J C 方 法 对 黄花 乌头 A oc 瓜 ut m oc er a n u m 抗 心律 失 常 有 效成分关附 甲素
(g
u a n uf b sa
e
A )的含量进 行了测定 。 并对不同采收期 黄花乌头的不 同部位 中关附 甲素的含量进 行
比较 .结果显示关附甲素在 8月 份采收的根 中含量最高 。 实验采 用 C 工8柱 , 以 乙 睛一磷 酸三乙胺缓冲
液为流动相 , 检测 波长 2 0 8 n m , 以 外标法定量 , 为合理有效地 利用药 物资源提供了参考 。
关键词 黄花乌头 关附 甲素 R P一 H P L C 含量测定
关 白附子为毛莫科乌头属植物黄花乌头 刘静涵教授提供 ; 供试 品 : 共 n 种 , 由沈 阳药
A c o , ` i t u m c o r ` a n u , n ( L e v l
·
) R a p a ic s 的块根 , 材公司宁绍智提供 。
具有祛风 、 燥湿 、 化痰 、 止痛的功效 , 主治中风 试剂 : 乙睛 、 甲醇为色谱纯 ,无水 乙醚 、 浓
痰奎 、 口 眼歪斜 、 头痛 、 癫痈 、 风寒湿痹等 , 为 氨水 、 三乙胺 、 磷酸均为分析纯 。
中医 临床常用中药之一 .[ 2〕 。 据文献报道 , 已 2 实验方法
从关 白附子中得到了 十几种生物碱 ,且大多 2 . 1 色谱条件 : 色谱柱 : A n t ec h a lt im a C 18
数具有较显著的生理活性川 。 药理研究表明 , 5 林 15 0 m m x 4 . 6 m m 色谱柱和 A l t ec h ep l -
其主要成分关附甲素 、 关附庚素 、 关附壬素具 l i e u l a r C 1 8 r e f i l l 3 g r s 预柱 。
有抗 心律失常 、 抗炎 、 镇痛作用川 , 其 中盐酸 流 动相 : 乙 睛 一磷 酸三 乙 胺 缓 冲液 ( p H
关附 甲素注射液由中国药科大学申报国家一 3 . 0 4) (2 : 8) , 流速 1 . 0 m L /m in 。
类新药 , 现已进入一期临床研究末期 ,有望成 检测波 长与灵敏度 : 检测 波长 2 08 n m ,
为一个疗效显著的新型抗心律失常药 。 本实 A U F S 一 0 . 05 。
验应用 R P 一 H P L C 法测定关附 甲素的含量 , 2 . 2 样品溶液的制备 :取生药粉末约 1 9 , 精
具有分离度好 、 准确 、 快速等优点 ,并 根据不 密称 定 , 置于锥 形瓶 中 , 加 0] %氨溶液 0 . 5
同采收期黄花乌头的不同器官中该生物碱含 m L 及 乙醚 1 5 m 工2 , 冷浸 4 O h ,滤过 。 残渣用
量 , 提出黄花乌头的最佳药用部位及 最佳采 乙醚洗涤 3 次 ,每 次 s m l 一, , 合并 醚液 ,挥 干 。
收期 , 为有效合理地利用生药资源提供 了参 残渣加少量甲醇溶解 ,移人 Z m L 容量瓶中 ,
考 。 加 甲醇至刻度 , 摇匀即得 。
1 仪器与药品 2 . 3 标准曲线的制备 : 精密称定关附甲素对
1
.
1 仪 器 : 岛 津 L C 一 10 A T 高 效 液相 色 谱 照品约 10 m g , 甲醇定容至 10 m L , 制成浓度
仪 , 岛津 S P D 一 10 A V 型紫外 一可见光检 测器 , 约为 1 . 0 m g /m L 的关附甲素对照品溶液 。 分
W D L
一
95 色谱工作站 (中科 院大连化学物理 别量取该对照液 2 , 0 、 1 . 0 、 0 . 8 、 0 . 5 、 0 . 3 m L ,
研究所 , 国家色谱研究分析中心 ) , C Q 2 50 型 甲醇定容至 2 . 0 m L 容量瓶 , 得系列关 附 甲
超声清洗器 , p H S 一 25 型数显酸度计 。 素对照品溶液 。 在选定的色谱条件下各进样
1
.
2 药品 : 对照品 : 关附甲素 由植化教研室 1 0 扛L ,测定峰面积 , 以平均峰面积 A 对进样
, 气d d r e s s : F e l l g F e n g . C h i n a P h a r m a e e u t i e a l U n i v e r s l t y , N a n J一n g
了中草药 》 1 9 99 一笼第 3G 卷第下助 。 4 9 5 。
量 环一伽 g )计算回归方程 :
A = 1
.
5 4 1 5 十 1 . 6 3 8 0 X 10 4 W ( n ~ 5 , r =
0
.
9 9 9 8 )
, 线性范围 : 1 , 5 5一 1 0 . 3 拜g 。
2
.
4 精密度试验
2
.
4
.
1 进样精 密度 试 验 : 取浓 度 约 为 1 . 0
m g / m L 对照液 10 产L , 连续进样 5 次 , R S D
一 2 . 9 % 。
2
.
4
.
2 方法精密度试验 : 平行称取同种药材
( 19 9 7
一
8
一
2 4 采集根 ) 3 份 , 依 “ 供试品制备 ” 项
下方法制备溶液 , 在上述色谱条件下测定含
量 , R S D 一 0 . 9% 。
2
.
5 稳定性试验 : 将关 附 甲素对 照液放 置
0
.
5
、
1
.
0
、
1
.
5
、
2
.
0
、
2
.
5
、
3
.
o h 后 , 按 上述 色
谱条件进行测定 , 其峰 面积的 R S D 一 3 . 3% ,
表明关附甲素甲醇溶液在 3 h 内稳定 。
2
.
6 回收率试验 : 精 密称 取 2 份 1 9 9 7 年采
老根样品各 2 9 , 分别加人浓度为 0 . 9 2 m g /
m L 的关附甲素对照液 l m L 和 0 . s m L , 依
“ 供试 品制备 ” 项下方法制备溶液 , 在上述色
谱条件下测定含 量 , 结果 回 收率 为 92 . 1% 、
9 7
.
2%
。
2
.
7 样品关附甲素含量测定 :分取供试 品溶
液进样 ,依法测定 ,按标准曲线计算含量 。 结
果见表 1 。
3 结论与讨论
由本实验的数据结果可知 , 不 同采收期
黄花乌头的不同部位中关附甲素的含量有显
著差异 ,其 中根中含量最高 ,尤以 8 月份采集
的根 中含量最高 。 因此建议黄花乌头的最佳
采集部位是根 , 最佳采集期为 8 月份 。
表 1 不 同采收期黄花乌头不
同部位的关附 甲素含 t
供试品编号 采集部位 采集时间 甲素含量 (% )
l 小枝 1 9 9 7一 0 8一 2 4 0 . 2 0 8 8
2 主千 1 9 9 7一 0 8一 2 4 0 . 1 3 6 0
3 花 1 9 9 7一 0 8一 2 4 0 1 9 9 9
4 根 1 9 9 7一 0 8一 2 4 1 . 1 58 0
5 地上茎 19 9 7一 1 0 0 . 1 35 2
6 根 19 9 7一 1 0 0 . 4 4 8 0
7 地上茎 19 9 7一 1 1 0 . 10 53
8 根 1 9 9 7一 1 1 0 , 0 8 0 0 9
9 老根 1 9 9 7 0 . 0 7 3 5 4
1 0 根 19 9 7一 0 8一 3 0 1 . 0 7 2
1 1 根 1 9 97 一 0 7一 2 5 0 . 9 1 6 6
在实验过程 中 , 注意到关 附甲素在 甲醇
中长时间放置不稳定 , 易分解成为胺醇 。 因而
在实验过程 中尽量缩 短样 品在 甲醇 中的时
间 ,对照品溶液最好现配现用 , 以保证实验结
果的准确性 。
参 考 文 献
1 刘静涵 ,等 . 中草药 , 1 9 8 1 , 1 2 ( 3 ) : l
2 孙友富 ,等 . 中国中药 杂志 , 1 9 9 1 , 1 6 ( 12 ) : 7 38
( 1 9 9 8
一
0 9
一
2 1 收稿 )
A s s a y o f G u a n f u B a s e A i n K o r e a n M o n k s h o o d ( A e o n i t u m co er a n u m )
a t D i f f e r e n t S t a g e s o f R e a P i n g b y R P
一
H P L C
F e n g F e n g
,
H
u a n g Ji a n a n d L iu J in g h a n ( D e P a r t n 、 e n t o f P h y t o e h e m is t r y , C h i n a P h a r m a e e u t ie a l I J n iv e r -
s
i t y
,
N
a n
j in g 2 1 0 0 0 9 )
A b s t r a e t A m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t io n o f g u a n f u b a o e A
, t h
e a e t iv e a n r i
一 a r r h y t hm i e p r i n c i p le i n A
-
c o n i t u m
c o er a n u m ( L 己v l . ) R a ip a i e s b y R P一H P L C w a s r e p o r t e d . R e s 、i l t s s h o w e d t h a t i t s e o n t e n t w a s h ig h e r i n
t h
e r o o t e o ll
e e t e d i n A u g u s t
.
A g
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s e p e r a t io n a n d q
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e t e r m in a t i o n m e t h o d w a s a e e o m p l is h e d o n
a n O D S e o l u m n w it h U V d e t e e t o r a t 2 0 8 n m
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0 4 ) w a s u s e d a s t h e
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e y w o r d s A
c o n t i u m
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,: u m ( L亡v 诬, ) 里之a i p a ; e s g u a n f u b o s e A R P 一 I I P L C
敬 告 读 者
本刊编辑 部尚存 部 卜 过 刊梢装 合订木 , 包括 : 1 9冬八 ’ 几 \)1 年 饰 。 元 /年 ) ; 1 9 9 5一 1 9 9 了年 ( 1 0 2 元 / 年 ) ; 1 9 9 8 年 ( 1 2 () 元 ) :
l {) {) 6 年增刊 t o o 元 ) ; l 三乡9 7 年增刊 ( 4 5 少` ) ; 1 9 9 5 年增刊 ( 5 , 元 ) 。 欢 迎来 求 来电订购 。
,
4 9 6
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