全 文 ：·药理实验与临床观察·
三七总皂苷对烫伤大鼠心肌 GsαmRNA表达的影响
张海港 ,李晓辉 ,李淑惠 ,徐红梅 ,谭　娅⒇
(第三军医大学 药理教研室 ,重庆　 400038)
摘　要 :目的　研究三七总皂苷 ( panax notoginseng saponins, PN S) 对烫伤早期大鼠心肌 GsαmRNA表达的影
响。方法　通过 30% 体表面积皮肤 Ⅲ 度烫伤大鼠模型 ,应用 do t blotting杂交、心肌组织原位杂交、放射免疫分析
等技术观察三七总皂苷对严重体表烫伤大鼠心肌 GsαmRNA表达水平、 cAMP产生量、腺苷酸环化酶 ( adenyly l
cycla se, AC)活性的影响。结果　大鼠心肌组织中 GsαmRNA表达量、 cAM P含量、 AC活性在烫伤后 3 h均明显
降低。 100, 200 mg /kg PN S明显增加烫伤大鼠心肌组织 GsαmRNA的表达 ,增加量与 PNS剂量呈显著正相关
( r= 0. 95, P < 0. 05)。 100, 200 mg /kg使烫伤大鼠心肌组织 cAM P含量分别增加 21% , 36% , AC活性分别增强
40% , 63% (P < 0. 01)。 结论　 PNS可增加烫伤大鼠心肌 GsαmRNA表达 ,增强 AC活性 ,增加 cAM P生成。
关键词: 烧伤 ;兴奋性 G蛋白 ;信使 RNA;信号转导 ;三七总皂苷 ;腺苷酸环化酶 ;环 -磷酸腺苷
中图分类号: R285. 5; R286. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 1000 03
Effect of Panax notoginseng saponins on myocardial GsαmRNA expression
of seriously scalded rat
ZHANG Hai-gang , LI Xiao-hui , LI Shu-hui, X U Hong-mei, TAN Ya
　　 ( Depa rtment o f Pharmaco log y, Third M ilitar y Medical Univ ersity , Chongqing 400038, China)
Abstract: Object　 To investig ate the ef fects of Panax notoginseng saponins ( PN S) on myocardial Gsα
m RNA expression of seriously scalded rat. Methods　 A 30% skin-full-thickness scald model w as produced
by immersing ra t in 95℃ wa ter for 10 s. The ef fects of PN S on myoca rdial GsαmRNA level w ere ob-
serv ed w ith do t blot ting hybridization and in situ hybridization technique; effects on cAMP and adenyl cy-
clase ( AC) activi ties w ere determined wi th radioimmunoassay. Results　 Myocardial GsαmRNA, AC ac-
tivi ty and cAM P content w ere reduced significantly 3 h af ter scalding. PN S ( 100, 200 mg /kg ) could
markedly increase the lev el o f myocardial GsαmRNA expression. The eleva ted quanti ty w as co rrelated
markedly wi th PN S dosage (r = 0. 95, P < 0. 05) . In situ hybridiza tion show ed GsαmRNA expression
w as also increased. AC activi ty w as enhanced by 40% and 63% ( P < 0. 01) at 100, 200 mg /kg PN S re-
spectiv ely; cAMP content was increased by 21% and 36% , respectiv ely. Conclusion　 PN S could improve
myocardial GsαmRNA expression, enhance AC activi ty and increase cAMP content of seriously scalded
ra ts.
Key words: burn; stimulato ry G protein; message RN A; signal transduction; Panax notoginseng
saponins ( PN S) ; adenyl cyclase, cyclic AMP
　　严重体表烫伤后常有明显的心功能障碍 [ 1] ,表
现为心脏舒缩功能降低 ,心输出量下降 ,心律紊乱
等。既往研究发现大鼠严重体表烫伤后心功能下降、
心肌 β肾上腺素受体数目下调、 GsαmRNA表达减
少、心肌 Gsα亚单位含量降低 ,腺苷酸环化酶
( adeny l cy clase, AC)活性降低 ;心功能降低与 Gsα
及其 mRNA表达减少有良好相关性 [2～ 4 ]。
三七总皂苷 ( Panax notoginseng saponins,
PN S)是五加科人参属多年生植物三七的主要活性
成分 ,具有广泛的作用 [ 5]。能有效改善烧伤后心功能
障碍 [6, 7 ]。PNS改善烫伤后心功能作用与其对心肌 β
受体信号转导的正向调节作用有密切关系。 为进一
步探讨 PN S改善烧伤后心功能的分子机制 ,本研究
通过 30% 体表面积皮肤 Ⅲ 度烫伤大鼠模型 ,观察
·1000· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2000-02-10基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( No. 39370791)作者简介:张海港 ( 1970-) ,男 ,河南南阳人。 1988年级第三军医大学临床医疗 (六年制 )专业学士 ; 1996年就读该校药理专业 ,获医学硕士学位。现为第三军医大学药理学讲师。主要研究方向:信号转导药物药理、心血管药理。联系地址:重庆市第三军医大学药理教研室 ,
400038; Tel: ( 203) 68753397(办 ) , 68753295(宅 ) ; E-mail: h g2@ mai l. tmmu. com. cn
PN S对严重体表烫伤后心肌 GsαmRNA表达水平
的影响及其意义。
1　材料与方法
1. 1　药物:三七总皂苷 ( PN S) ,粉剂 ,由中国科学
院昆明植物研究所提供 ,纯度> 99% 。
1. 2　试剂: 地高辛 ( DIG) 3′端加尾试剂盒、 DIG
标记与检测试剂盒以及 Tripure RN A抽提试剂盒
均为 Boehringer Mannheim公司产品。大鼠 Gsα寡
核苷酸探针 ( 5’ -TCC AGA GGT CAG GAC GCG
GCA GCG AAG CAG GTC CTG GTC-3′)由中国
科学院上海细胞生物学研究所合成 ,经 HPLC反相
柱纯化。与大鼠 GsαcDN A第 580～ 618位核苷酸
碱基互补 ,焦碳酸二乙酯 ( diethy l pyrocarbona te,
DEPC)为 Sigma公司产品。环腺苷酸 ( cAMP)测
定试剂盒购自上海第二医科大学同位素室。
1. 3　仪器: GDS7600S型 UV P凝胶成像分析系统
(美国 ) ;液体闪烁计数仪 ( LKB-Bas K-Ba ta 1217
型 ,瑞典 )。
1. 4　动物: 健康成年 Wistar大鼠 ,由本校实验
动物中心提供 (Ⅱ级 ,合格证号 No. 24301050) ,体
重为 ( 178± 17) g。
1. 5　烫伤模型制作: 于致伤前 1天 ,剪短背部占
30% 体表面积的毛 ,用 1. 2 mo l /L Na2 S脱净 ,以温
水冲洗后擦干 , 24 h后用乙醚麻醉动物 ,置 95℃水
浴中烫 10 s,造成 30% 体表面积皮肤 Ⅲ 度烫伤
(病理检查证实 )。致伤后 ip生理盐水约 5 mL,分笼
喂养 ,自由进食。
1. 6　分组与给药:正常对照组以 37℃ 温水代替热
水进行假烫伤 ;给药组分为 3组 ,分别于烫伤后 ip
50, 100, 200 mg /kg体重的 PN S。伤后 3 h活杀取
心脏置液氮中保存备用。
1. 7　 GsαmRNA表达量的测定:按说明书提取心
肌总 RNA,紫外分光光度法定量 , 1% 琼脂糖电泳
确定其完整性。将各组总 RNA样品用 DEPC水稀
释到同一浓度 ,按说明书及文献 [8 ]进行 dot blo t ting
杂交 ,结果照片 ,用凝胶成像分析系统扫描各点 ,测
定各时间点杂交信号的积分吸光度值。以对照组斑
点吸光度值为 100,求出各组杂交信号的相对值。同
时用 DIG标记探针 300 ng /mL 进行心肌组织
GsαmRNA原位杂交。
1. 8　心肌 cAMP产生量、 AC活性测定: cAMP测
定采用放射免疫法 ,按说明书进行 ; AC活性测定采
用间接方法。
1. 9　数据处理: 数据采用 x± s表示 ,用 SPSS进行
单因素方差分析及相关分析。
2　结果
2. 1　 PN S对烫伤大鼠心肌组织 GsαmRNA表达
量的影响: Dot blot tig n杂交可见在烫伤后 3 h大鼠
心肌组织 GsαmRNA的表达量显著减少 ; 100, 200
mg /kg PNS明显增加 GsαmRNA表达 (见表 1) ,
增加量与 PN S剂量呈显著正相关 (r= 0. 95, P <
0. 01)。 原位杂交同样可见应用 100或 200 mg /kg
PN S后烫伤大鼠心肌 GsαmRNA表达增强。
表 1　 PNS对烫伤大鼠心肌组织 GsαmRNA表达、
cAMP含量及 AC活性的影响 (n= 8, x± s)
组别 剂量
(μg /mL)
GsαmRNA
表达量 ( RA)
cAM P含量
( pmol /g)
AC活性
( pmol /g· s )
正常对照 - 　 100 744± 72 49± 13
烫伤 - 61± 15△ 598± 68△ 31± 11△
PNS 50 73± 12 613± 75 34± 12
100 107± 22* 725± 83* 43± 14*
200 122± 19* 816± 105* 51± 18*
　　 RA:相对吸光度值 ( relativ e absorbance) ; 与正常对照组比较:
△ P < 0. 01; 与烫伤组比较: * P < 0. 01
2. 2　 PNS对烫伤大鼠心肌组织 cAMP、 AC活性的
影响: 100, 200 mg /kg PN S可使烫伤大鼠心肌组织
cAMP含量分别增加 21% , 36% , AC活性分别增强
40% , 63% ( P < 0. 01)。 50 mg /kg PN S对此无明显
影响 (P> 0. 05) ,见表 1。
3　讨论
在烫伤后心功能障碍的发生发展中 , Gs-AC-
cAMP系统功能异常占据重要地位。 PNS可显著增
加离体心脏心输出量、冠脉流量、+ dp /dtmax、 - dp /
dtmax以及 Vmax ,具有明显的增强心功能的作用 [9 ] ;能
够明显增加烫伤大鼠心肌组织 AC活性及 cAMP
含量 ,改善烫伤后心功能 [7 ]。但有研究发现三七皂苷
不影响心肌细胞膜上 β 受体的亲和力及受体数
目 [10 ]。据此推测 PNS改善烧伤后心功能的机制与
其影响 β -AR受体后环节有关。本研究观察到 PNS
可使烫伤早期心肌 GsαmRNA表达增多、 AC活性
增强、 cAMP含量增加 ,且呈剂量依赖关系。相关分
析表明 , GsαmRNA表达水平与 AC活性、 cAMP
含量呈显著正相关。 分析可能的原因有: PN S改善
了心肌供血 ,使心肌能量供应好转 ,蛋白质分解减
少 ,转录酶增多。 PN S通过增加心肌组织 GsαmR-
NA表达而使 Gsα增多 ,从而激活 AC,使 cAM P产
量增加 ,改善心功能。至于 PNS对 AC是否具有直
接的激活作用 ,尚待进一步的实验证实。
参考文献:
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42.
地黄苷 A对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症的影响
于　震 ,王　军 ,李更生 ,王玉升⒇
(河南省中医药研究院 ,河南 郑州　 450004)
摘　要 :目的　观察地黄苷 A对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症的影响。方法　利用环磷酰胺 ip造成小鼠白细胞减
少症模型 ,地黄苷 A进行治疗 ,对模型小鼠体重、外周血象、网织红细胞数、脾脏指数、骨髓有核细胞数和 DN A含
量进行检测。 结果　地黄苷 A可明显升高模型小鼠的白细胞数、红细胞数、血小板数、网织红细胞数、骨髓有核细
胞数和 DN A含量及体重。 结论　地黄苷 A具有明显升白作用。
关键词: 地黄苷 A;环磷酰胺 ;白细胞减少症 ;升白
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 1002 00
Effect of rehmaionoside A on cyclophosphamide induced leukopenia in mice
YU Zh en, W ANG Jun, LI Geng-sheng , WANG Yu-sheng
　　 ( Henan Academy o f TCM , Zheng zhou Henan 450004, China )
Abstract: Object　 To observ e the effects o f rehmaiono side A on mice leukopenia models induced by
cyclopho sphamide. Methods　 Mice leukopenia models w ere prepa red by ip cyclophosphamide and then
treated wi th rehmaionoside A. The lev els o f body w eigh t, peripheral hemog ram, reticulocy te count,
spleen index , bone marrow ka ryocyte count and contents of bone ma rrow DN A were determined. Results
　 Rehmaionoside A could obviously raise the counts o f w hi te blood cell, red blood cell, pla telet, reticulo-
cyte and bone ma rrow ka ryocyte, contents o f bone marrow DN A, and body w eight o f the leukopenia mod-
el. Conclusion　 Rehmaiono side A has appa rent leukogenic and antianemic actions.
Key words: rehmaionoside A; cyclophosphamide; leukopenia; leukogenic action
　　地黄为玄参科植物地黄 Rehmannia glutinosa
Libosch的新鲜或干燥块根。熟地具有滋阴补血 ,益
精填髓功效 ,生地具有清热凉血 ,养阴 ,生津功效。现
代药理学研究表明其具有升白、补血 ,提高人体免疫
力的作用。地黄苷 A ( rehmaionoside A) 为地黄中
的单体化学成分 ,其药理活性国内外尚未见报道。我
室成功提取分离地黄苷 A后 ,为探讨其药理活性 ,
对其升白作用进行了研究。
1　实验材料
1. 1　药品与试剂: 地黄苷 A,河南省中医药研究院
中药研究所植化室提供。生白口服液 ,郑州市东方药
业有限公司生产。环磷酰胺 ,上海华联制药有限公司
生产。 RPM I1640营养液 ,美国 GIBCO公司提供。
1. 2　动物: 昆明种小鼠 ,雌雄各半 ,体重 18～ 20 g,
由河南省中医药研究院实验动物中心提供。
1. 3　仪器: 血球计数仪 (日本东亚 ) ; UV-265紫外
·1002· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2001-02-19基金项目:国家中医药管理局资助 ( No. 95Y3411) ;国家“九· 五”科技攻关项目 ( No. 96-903-02-04)作者简介:于　震 ,男 , 1996年毕业于上海中医药大学中西医结合专业 ,硕士 ,助理研究员。主要从事中药新药开发研究 ,共发表论文 7篇 ,成果 3项 ,专著 1部。 目前正在进行国家“九· 五”科技攻关和国家中医药管理局科研课题的研究工作。