全 文 ：绞股蓝总苷对老化小鼠脑中 MAO和 Na /K-ATP酶活性的影响
龚国清 ,钱之玉 ,周　曙
(中国药科大学 药理教研室 ,江苏 南京　 210009)
摘　要: 目的　研究绞股蓝总苷对老化小鼠脑中 M AO和 Na /K-AT P酶活性的影响。 方法　采用连续眼球后注射
D-半乳糖 1个月 ,造成小鼠老化模型 ,观察绞股蓝总苷对老化鼠脑中单胺氧化酶 ( M AO )和 Na / K-ATP酶的活性影
响。 结果　老化小鼠可造成脑中 M AO活力的升高和 Na /K-ATP活力的降低 ,而绞股蓝总苷在造模型同时 ig给
药 ,每日剂量 75和 150 mg /kg下 ,能逆转小鼠因老化而产生的上述二种酶活性的改变。 结论　绞股蓝总苷能对抗
老化小鼠因衰老引起的 M AO和 Na /K-ATP酶的活性改变 ,从生化酶学角度 ,进一步阐明绞股蓝总苷的抗衰老
作用。
关键词: 绞股蓝总苷 ;老化小鼠 ;单胺氧化酶 ; N a /K-AT P酶
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 05 0426 02
Effects of gypenosides on monoamine oxidase and Na /K-ATPase activities in
brain tissues of aging mice
GONG Guo-qing , Q IAN Zhi-yu, ZHOU Sh u
　　 ( Depa rtment o f Pharmaco log y, China Pharmaceutical Univ ersity, Nanjing Jiang su 210009, China )
Abstract: Object　 To study the ef fects of g ypenosides on MAO and Na /K-AT Pase activi ties in brain
tissues o f aging mice. Methods　 Models of aging mice w ere prepared by continuous po st-orbi to l injection
o f 120 mg /kg D-galactose fo r a month , then the ef fects of g ypenosides on MAO and Na /K-ATPase activi-
ties in brain ti ssues w ere investiga ted. Results　 It was observ ed tha t MAO activi ty w as increased and Na /
K-ATPase activ ity was decreased in brain tissues of aging mice models significantly; and these effects w ere
reversible respectiv ely by gypeno sides ig o f 75 and 150 mg /kg. Conclusion The result that gypeno sides
could inver t the changes of M AO and Na /K-AT Pase activi ties in brain ti ssues of aging mice, may provide
a further explaination of the anti-aging mechanism o f gypeno sides in mo lecule enzymology.
Key words: g ypenosides; aging mice; monoamine oxidase; Na /K-ATPase
　　绞股蓝总苷 ( g ypenosides )是葫芦科植物绞股
蓝 Gynostemma pentaphyl lum ( Thunb. ) M ak. 的
主要有效成分 ,药理作用很多 ,主要表现在心血管方
面 ,长期服用不仅能改善血脂血糖水平 ,而且能全面
改善机体的衰老体症 ,有防衰抗衰之功用 [1 ]。而机体
因衰老产生的变化不仅仅体现在各种体症上 ,而且
组织内部的各种酶系、递质水平也发生了相应的变
化 ,尤其是机体的中枢脑组织。我们在验证衰老模型
动物中 ,脑组织中单胺氧化酶 ( MAO )和 Na /K-
A TP酶活性发生的改变的基础上 ,研究绞股蓝总苷
对这二种酶活性的影响 ,进一步阐明它的抗衰老作
用机制。
1　材料
绞 股蓝总苷 (自行从药材中提得 ,含量为
92% ); D-半乳糖 (上海试剂二厂 ,生化试剂 ) ;盐酸
苄胺 (上海试剂厂 ,分析纯 ) ;三磷酸腺苷 (上海生化
试剂厂 ) ;考马斯亮蓝 G250( Fluka公司 ) ;其余试剂
均为市售分析纯。 ICR小鼠购自南京药械厂繁殖场 ,
雌雄各半 ,体重 18～ 22 g。
2　方法
2. 1　老化小鼠制作 [2 ]:将 ICR小鼠每天眼球后注
射 D-半乳糖 120 mg /kg ,连续 1个月 ,即成老化
小鼠。
2. 2　动物分组与给药: 40只 ICR小鼠 ,雌雄各半 ,
随机分成 4组 ,每组 10只 ,分别为正常对照组、老化
模型组、绞股蓝总苷低剂量组 ( 75 mg /kg )和高剂量
组 ( 150 mg /kg ) ,除正常对照组外 ,其余各组每天均
眼球后注射 D-半乳糖 120 mg /kg,且绞股蓝总苷组
还每天按上述二剂量 ig给药 ,老化模型组仅给予
0. 5% CMC-Na溶液。 1个月后处死各组动物 ,取出
脑组织 ,冷冻保存。
2. 3　脑中 MAO活力测定 [3 ]: 脑组织放入冰冷的
·426· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2001年第 32卷第 5期
收稿日期: 2000-11-16作者简介:龚国清 ( 1966-) ,男 ,江苏常熟人 ,博士。 研究方向:生化药理学 ,从事相关领域研究和新药的药效毒理学研究工作。
Tel: ( 025) 3271322, E-mai l: gonggq@ hotmail. com
0. 1 mol /L PBS( pH7. 4)中 ,超声匀浆 2次 ,以 3 000
r /min, 4℃离心 30 min,弃上清液 ,将沉淀用 PBS
悬浮 ,得粗酶液。 取粗酶液 0. 6 mL加 PBS和 8
mmol /L盐酸苄胺 ,在 37℃振荡水浴中反应 3 h
后 ,加 70%过氯酸终止反应 ,加环己烷 3 mL混匀 ,
吸环己烷层于 242 nm测吸光度 ,并换算成苄醛的
生成量 ,粗酶液蛋白质含量用考马斯亮蓝 G250测
定 [4 ] ,小牛血清白蛋白作标准 ,最后 M AO活力以
nmo l /( mg· h )表示。
2. 4　脑中 Na /K-AT P酶活力的测定 [ 5]:取小鼠脑
组织加入提取液 ( 0. 25 mo l /L蔗糖 , 0. 03 mol /L组
氨酸 , 0. 005 mo l /L EDTA, 10%去氧皮质酮 ) ,在冰
浴中匀浆 ,再用 3层纱布过滤 ,得粗酶液 ,其中蛋白
质含量测定方法同前。 酶促反应分成二组: A组 ,加
介 质 AT P 液 0. 4 mL ( 6 mmol /L M gCl2 , 100
mmol /L NaCl , 20 mmol /L KCl, 30 mmo l /L Tris, 3
mmol /L AT P) , 介质液 50μL( 6 mmol /L MgCl2 ,
100 mmo l /L NaCl, 20 mmo l /L KCl, 30 mmol /L
Tris)和粗酶液 50μL。 B组 ,加哇巴因抑制 Na /K-
A TP酶 ,用 5 mmol /L哇巴因 50μL取代 50μL介
质液 ,其余相同。 在 37℃水浴中分别反应 20 min
后 ,立即加入 30%三氯乙酸 0. 25 m L,并移入冰浴
中 , 1 500 r /min离心 5 min,取上清液 0. 5 mL测定
无机磷含量 ,用标准磷溶液作标准曲线 ,最后 Na /
K-AT P酶所分解的无机磷量为 A- B的量 ,酶活力
用μmoL /( mg· h)表示。
3　结果
3. 1　绞股蓝总苷对老化小鼠脑组织 M AO活力的
影响:见表 1。老化模型组小鼠脑组织中 M AO活力
较正常组有明显提高 ,提高率达 42. 7% ;而同时服
用绞股蓝总苷的老化小鼠 ,其脑中 MAO活力较模
型组有明显降低 ,分别降低 16. 4%和 26. 0% ( P <
0. 01)。
表 1　绞股蓝总苷对老化小鼠脑组织 MAO活力的
影响 (n= 10, x± s )
组别 剂量
(mg /kg)
M AO活力
( nmol /mg· h)
变化
(% )
正常对照　 - 　　　　 235. 8± 17. 9
老化模型　 - 336. 5± 40. 7
绞股蓝总苷 75 281. 4± 51. 3* * - 16. 4
150 248. 9± 42. 8* * - 26. 0
　　与老化模型组比较: * * P < 0. 01
3. 2　绞股蓝总苷对老化小鼠脑组织 Na /K-ATP酶
活力的影响:见表 2。老化模型小鼠脑中 Na /K-A TP
酶活力较正常组有明显降低 ,达 27% ,而同时服用
绞股蓝总苷的老化小鼠 ,其脑中该酶活力有不同程
度的恢复 ,分别提高 7. 0%和 11. 2% ,且高剂量组结
果有显著性差异 (P < 0. 05)。
表 2　绞股蓝总苷对老化小鼠脑组织 Na/K-ATP酶
活力的影响 (n= 10, x± s )
组别 剂量
( mg /kg )
Na /K-AT P活力
( nmol /mg. h )
变化
(% )
正常对照　 - 　　　　 8. 83± 1. 46
老化模型　 - 6. 43± 0. 78
绞股蓝总苷 75 6. 88± 0. 84 7. 0
150 7. 15± 0. 67* 11. 2
　　与老化模型组比较: * P < 0. 05
4　讨论
　　早先研究发现人脑组织内氧化儿茶酚胺等单胺
类递质的 MAO活性在 45岁以后随年龄增长而急
剧增加 [6 ] ,也证实下丘脑存在一个衰老钟 ,儿茶酚胺
的水平影响其正常 ,并与 MAO活性有很大关系 [7 ];
而作为参与机体能量供应的主要酶 Na /K-AT P酶 ,
在生命的新陈代谢活动中有着重要地位 [8 ] ,它与老
化也存在着某种关系 ,有人发现老龄大鼠组织中 ,它
的活力比正常年轻鼠为低 ,其中脑中降低 20% [9 ]。
这二种酶活力变化在我们的老化模型鼠中也得到验
证。 在制作老化模型小鼠的同时 , ig给予绞股蓝总
苷后 ,这二种酶活性均得到了逆转 ,它不仅从整体上
改善了衰老症状 ,而且从酶学角度为其阐明抗衰老
作用提供药理依据。
参考文献:
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