全 文 ：· 药理实验与临床观察 ·
高效液相色谱法测定狗皮巴布膏中肉桂的体外透皮吸收
北京医科大学药学院生化药理室 (l 0 0 0 83) 郝美荣 ‘ 李长龄
摘 要 应用高效液相色谱法 (H PL C )观察了狗皮巴布膏体外经皮渗透性 , 采用两室扩散模型对
脱毛小鼠皮进行了实验观察 。 结果表明狗皮膏巴布剂透皮吸收的可行性 , 其透皮量随着药物浓度
的增加和时间的延长而增多 , 低浓度 12 . 5 m g 生药 / m L 在 180 m in 时的累积透皮量 已不再增加 。
此结果为狗皮膏巴布剂的临床应用提供了实验基础 。
关镇词 透皮吸收 H PL C 肉桂酸
近几年来 , 随着 医用高分子材料的不断
开发和生物药剂 学的发展 , 药物经皮 吸收成
为一个迅速发展的研究领域 , 它可以避免 一
些别的给药途径所带来的间题 [lj , 因此 , 研制
适合于皮肤外用的新剂型 , 将有可能为临床
医生和患者带来方便 , 降低全身用药带来的
不 良反应 。 狗皮膏巴布剂是采用多种中草药
经提炼而成的 , 具有抗炎 、镇痛作用 〔2〕 。 我们
对其透皮吸收情况进行了观察 , 为狗皮膏 巴
布剂的临床应用提供了实验依据 。
1 材料
1
.
1 动物 : 昆 明种小鼠 , 雌雄兼用 , 18 一 2
g
, 北京医科大学实验动物部提供 。
1
.
2 药物 : 狗皮膏巴布剂 (用时制成混悬液 ,
0
.
1 9 生药/ m L ) , 北京同仁堂制药厂提供 。 桂
皮酸化学对照品 , 中国药品生物制品检定所
提供 。 地塞米松 、盐酸 、 甲醇 、 乙酸 乙醋均为
A R 级 。
1
.
3 仪器 : 高效液相色谱仪 (H PL C )包括 :
Y S B
一
2 型平流泵 , 中科院上海分院仪器厂 ;
2 6 0 0 紫外分光检 测 器 , 上 海分析 仪器厂 ;
SPS
一 1 色谱数据处理机 , 上海华光仪器仪表
厂 ; 7 2 2 5 进样阀 , R he o d yn e ; 色谱柱 3 0 0 m m
X 4
.
6 m m
,
YW G C
ls
H
3 7 ,
1 0 拼m 。
2 方法
2
.
1 标准曲线的绘制 : 精确称取桂皮酸化学
对照品 , 配制成 0 . 0 5 、 0 . 1 0 、 0 . 2 0 、 0 . 4 0 、 0 . 8 0
拼g / m L 标准溶液 , 以生理盐水为空白对 照 ,
用 H PL C 测定 , 标准曲线回归方程为 :
C 肉佳酸 = 1 . 4 1 H 肉桂酸 / H is + 0
.
o o s r = 0
.
9 9 9 6
, n 一 3
2
.
2 离体 鼠皮的制备 : 将小鼠处脱颈椎死
后 , 立即剥取背部皮肤 , 去毛 , 用蒸馏水洗净 ,
浸于生理盐水待用 仁3] 。
2
.
3 实验装 置 及 使用 : 实验装置参照 文
献川 , 按简单小室制作 , 释放池 内为内径 3 Cm
的特制玻璃管 , 下 口用橡皮筋密封处理好的
鼠皮 (表面朝上 ) 。 释放池 内加入不同浓度的
供试液 , 接受池 为 10 0 m L 的烧杯 , 加入 50
m L 生理盐水作为接受液 , 接受液 保 温 37
℃ , 并不断以磁力给予搅拌 , 于样品池下 口浸
入接受液后 , 1 0 、 3 0 、 6 0 、 9 0 、 1 2 0 、 1 5 0 m in 分别
取接受液 2 . 5 m L , 随即在接受池 内补充相 当
量的生理盐水 , 使接受液始终保持 50 m L 。
2
.
4 样品中肉桂酸的 H P L C 测定
2
.
4
.
1 样品的预处 理 : 精密量取 1 . 0 m L
的样品液 , 置于 s m L 样品管中 , 加 一滴浓
H C I
, 加 1 . 0 m L 乙酸 乙醋 , 旋摇振荡 2 m in ,
离心 , 上清液转移至一个 5 m L 离心管中 , 氮
耘彝d rzs, 瓮;翠覃显孚襄纂黑竺缪翼薪藩花攀馨袱撇攀翼擎黔攀釜碧居覆器{婿戛雀冬的教学与科研工作 。 主要的研究工作有 :药物在体 内及体外对血栓和血小板活化因子的影响作用 、药物对血癖大鼠血液流变学指标的影响 、药物对慢性肾炎的治疗作用及药物对肾炎病理状态下动物血栓的影响 。 现任职于北京医科大学药学院药理教研室讲师 。
《中草药》1 9 9 8 年第 29 卷第 1 期
气流下吹干 , 加入溶媒 30 拜L , 取 20 拜L 进样 。
2
.
4
.
2 色谱条件 : 根据肉桂酸的溶解特性 ,
并参照文献圈 , 选择流动相为甲醇一水一乙酸 ,
流速为 1 . 0 m L / m in , 样 品的测定采用 内标
法 , 以地塞米松为内标物 , 肉桂酸在所选流动
相中紫外吸收峰在 2 7 2n m , 此处 内标也有吸
收 , 其保留时间分别为 5 . 2 及 9 . 0 m in , 并且 ,
肉桂酸和地塞米松与杂质较好地分离 。
2
.
4
.
3 样品测定 : 将不同时间取出的接受液
样品于 H P LC 上测定峰高 H , 将测得的 H 值
代入标准曲线方程 , 计算各时 间接受液的浓
度 C恤g / m L )和累积透皮吸收量 N 年g ) 。
3 结果
释放池 内分别加入 1 0 0 、 5 0 、 2 5 、 1 2 . 5 m g
生药 / m L 的供试液 , 测量不同时间接受液浓
度 , 并计算药物的累积透过量 。 由表 1 中可以
看出 , 狗皮巴布膏可以透皮吸收 , 且透过量随
着药物浓度的增加和时间的延长而增多 , 低
浓度 1 2 . 5 m g 生药 / m L 在 18 0 m in 时的累积
透过量 已 不再增加而趋于均值 , 显示了较好
的透过性 。
表 1 不同浓度的狗皮巴布膏的透皮吸收累积
t N (拜g ) (牙士 : n = 4 )
思悬 供试液浓度(m g 生药/ m L )50 25
10 1
.
0 5士 1 . 5 0 0 . 7 15士 0 88 0 0
30 2
.
1 0士 1 . 5 5 1 . 5 75士 1 . 6 5 0 . 8 15士 0 . 80 0
60 7
.
9 0士 1 . 5 5 3 . 55士 0 . 2 0 3 . 02士 1 . 4 5 1 . 0士 0 . 4 5
90 1 3
.
05士 1 . 6 5 6 . 0 5士 0 . 7 5 4 . 0 6士 1 . 6 2 2 . 55士0 . 70
12 0 16
.
90士 3 . 3 5 6 . 30士 2 . 2 0 4 . 9 9士 1 . 5 5 3 . 5 5士 1 . 0
15 0 2 0
.
90士 4 . 7 0 9 . 6 5士 2 . 1 0 5 . 6 5士 1 . 9 5 4 . 15士0 . 55
18 0 2 5
.
55士 6 . 8 一 一 4 . 20士0 . 5 5
4 讨论
狗皮膏 巴布剂中的主要组分之 一是肉
桂 , 其有效成分为肉桂酸 , 文献报道 [6] 它具有
镇痛杀菌的作用 。 用 H P L C 测定接受液中肉
桂酸之含量 , 可较好地了解狗皮膏 巴布剂 的
透皮吸收情况 。 本法简便 、快速 , 肉桂酸的保
留时间仅为 5 . 2 m in , 且灵敏度较好 , 方法重
现性也好 , 并且与杂质较好地分离 。 文献资料
表明比 “〕, 就整个皮肤各层而言 , 角质层是药
物透皮吸收的限速层 , 皮肤水合后 , 狗皮膏 巴
布剂的透皮吸收量有明显增加 , 低浓度 12 . 5
m g 生药 / m L 在水合 60 m in 时才检测到肉桂
酸 。但随着水合时间的延长 , 皮肤水合化程度
趋于饱和 , 皮肤肿胀 , 其透皮率并未能成正 比
例地增大 。 1 2 . 5 m g 生药 / m L 供试液在水合
1 80 m in 时 , 其透过量不再增加 。
虽然研究药物体外透皮吸收最理想的模
型是人体 , 但由于人的皮肤并不像动物皮肤
那样易得 , 而且由于每个皮肤样本之间在年
龄 、性别 、种族及捐献者的健康状况等方面的
云异川以及人体皮肤的制备所要求的技术等
等 , 使动物皮肤在此方面有独特的优势 。 无毛
小 鼠皮 肤 在某些方面 与人体皮 肤极 为相
似仁7] , 且制备简单方便 , 常常用于药物体外透
皮吸收研究 , 但是寻求更好的 、与人体完整皮
肤更相近的皮肤标本将会更好地 了解药物的
透皮性 。
参 考 文 献
一 杨 丽 , 等 . 药学学报 , 1 9 9 0 , 2 5 (1 2 ) : 9 1 6
2 吴恩融 , 等 . 中草药 , 1 9 9 7 , 2 8 (1 1 ) : 6 7 5
3 李玉珍 , 等 . 中国药学杂志 , 1 9 3 , 2 8 (1 ) : 23
4 张泽威 , 等 . 中国医院药学杂志 , 19 90 , 10 (2 ) : 54
5 宋建平 , 等 . 药物分析杂志 , 1 9 9 2 , 1 2 (2 ) : 1 5 2
6 M a r n z z e lla J C
,
et a l
.
J A m e r Ph a r m A s s sc i E d
,
1 95 8
,
4 7
:
2 9 4
7 徐益众 , 等 . 药学学报 , 19 92 , 2 7 (6 ) : 4 67
8 B a
r r y B W
.
JC o n t r o lle d R e le a s e
,
1 9 8 7
,
6
:
8 5
9 H u g o D u r r h eim
, e t a l
.
J Ph a r m se i
,
1 9 8 0
,
6 9 (7 )
:
7 8
(1 9 9 6
一
0 4
一
1 9 收稿 )
S tu d ies o n T r a n sd e r m a l A b so rPtio n o f G o u Pib a b u Plas te r in vitro U sin g H PL C
H a o M
e ir o n g
,
L i C h a n g lin g (De p
a r tn le n t o f B io e h e m ist ry
,
C o lle g e o fP h a r m a e y
,
B e ijin g M
e diea l U n iv e r s i
-
t y
,
B e ijin g 1 0 0 0 8 3 )
A b str a e t P e re u ta n e o u s a b s o r p tio n o f G o u p ib a b u P la s te r w a s s t u d ie d
.
u sin g H PLC
, a d o p t in g s im p le
diffu
sio n e e ll m o d e l to o b s e r v e its p e rm e a tio n t h r o u g h h a irle s s m o u s e s k in
.
T h e re s u lt s h o w e d th a t G o u p iba bu
pla s te r e a n e v id e n t ly p e r m e a te t h r o u g h t h e s k in
, a n d th e a m o u n t a bs o rb e d in e r e a s e d e x p o n e n t ia lly w ith eo n
-
。
2 4
。
te n t a n d tim e
.
K ey W o
rd s T r a n s d e r m a l A b so r p tio n H PL C G o u p ib a b u Pla s te r
冠心病患者用冠心+ 二汤治疗前后的血液流变学变化
佳木斯医学院病生教研室 ( 1 5 4 0 0 2)
伊春市金山屯医院
赵锦程 来 张建华 张 明远 邢凤友
张 跃
摘 要 观察了冠心病心绞痛患者用中药冠心十二汤治疗前后及正常人循环血中红细胞变形性
(R CD )
、红细胞膜脂质流动性 (L FU )及红细胞膜电学 (m e m br a n e e le c tr ie ity )变化 。 结果表明 , 患者
高切变率下全血粘度 (加h) 和红细胞刚性指数 (E Rl )在治疗前较正常组明显升高 , 红细胞膜 L FU 、
红细胞电泳率 (EPM )也较正常人明显降低 。 患者治疗后 加h 和 E R I较治疗前明显降低 , 红细胞膜
L FU 和红细胞 E PM 较治疗前显著提高 。
关键词 冠心病 红细胞 冠心十二汤
我们自 1 9 9 4 年始采用中药冠心十二汤
治疗冠心病心绞痛患者 , 取得一定的临床疗
效 。 有资料表明心肌缺血者的红细胞变形能
力 明显下降 , 是加重心肌缺血性损伤的重要
因素仁‘」, 因此 , 本实验主要观察了中药治疗前
后 患者循环血与红细胞变形性 (red Cel de -
fo r m a b ility
,
R C D )变化有关的几个 因素 , 并
探讨其变化的意义 。
1 材料和方法
1
.
1 实验分组 : 正常对照组 24 例 , 年龄 37 一
5 6 岁 , 平均年龄 50 . 2 岁 ;患者组 37 例 , 年龄
3 6 ~ 6 8 岁 , 平均年龄 57 . 6 岁 , 诊断标准按
W H O 标准 , 且询 问病史 、体检及辅助检查无
其它疾病 。 所采血液均为肘静脉血 , 正常对照
组均于晨起空腹时采血 ; 患者组分别于 治疗
前和治疗 30 d 时晨起空腹采血 。
1
.
2 实验仪器 : 成都 N X E 一 1 型锥板式血液
粘度计 , 江苏 S D Z 一 1 型 细胞 电泳仪 , F 一4 0 0 0
型 日立荧光分光光度计 , 上海 7 2 1 一分光光度
计 。
1
.
3 观察指标 : 血液标本置于 4 ℃冰箱保
存 , 于采血后 4 h 内进行检测 。 a) 红细胞压积
(h e m a t o e r it
,
H C T )
: 离心力 1 5 0 0 0 9 , 微量毛
细管压积法 ; b) 高切变率 (2 3 0 5 一 ’)下全血粘
度 切b h ) ; e )高切变率 (2 3 0 5 一 ‘)下血浆粘度
(刀p ) ; d )红细胞刚性指数 (e r y th r o ey te r ig id i-
ty in d e x
,
E R I)
: 按公式 E R I= (刀b h 一 刀p ) / 刀p
x l /H C T 计算 ; e )红细胞膜脂质流动性 (e ry -
thr o e y t e m e m b r a n lip o id flu id ity
,
L FU )
: 荧
光 偏振法 , 激发波长 3 0 n m , 发射波长 4 24
n m
, 按公式 p = (Iv 一 Ih ) / (Iv + Ih )求偏振度
(p ) ;按公式 : 亏一 ZP/ (0 . 46 一 P )计算微粘度
(亏) ;按公式 L FU 一 (0 . 5/ p 一 1 ) / p 计算脂质
流动性 (LF U ) ; f)红细胞电泳率 (e r yth r o e yt e
e le e t r o p h o r e t ie m o b ility
,
E PM )
: 电压 3 8 V ,
电流 1 . 5 m A , 10 %N a CI 琼脂盐桥 , 电泳介质
为 自身血浆 , 将红细胞稀释至 1 0 0 0 0 / m m 3 ,
45 0 倍镜下计数 20 个红细胞来回运动 3 拼m
所 需 时间 (s ) ; g )红 细 胞 膜唾 液 酸 (s ia lie
a e id s
,
N A N A )含量 : 按秦德安等 B io ls e he 试
剂直接法测定川 。
1
.
4 数据处理 : 实验数据均用‘士 : )表示 ,
并采用组间 t 检验 。
2 结果
药论砒才.基学沙院篇公学多.医等
A d d r e
s s :
Zh a o Jin e h e n g
,
D e p a r t m e n t o f p a th o p hy s io lo g y
,
Jia m u s iM e d i
e a lC o lle g e
,
J
, a 乎u s i _ _ _ 、 一赵锦程 男 , 1 9 6 4 年生 , 1 9就 年毕业于佳木斯医学院 , 获学 上学位 , 19 9 7 年获医学硕士学位 。 现任佳木斯理教研室副主任 、讲师 。 近年来发表了“马桑内酷对大鼠大脑皮层突触体和脑片谷氨酸摄取 、 释放功能的影响 ”文 。 现主要从事中药药理研究 。
《中草药 》19 9 8 年策 29 卷第 1 期