全 文 ：·药剂与工艺·
HPLC-ELSD及紫外分光光度法测定三七中皂苷的含量
中国药科大学 (南京 210038)　　江英桥 　王　强　马世平　党学东
摘　要　采用反相高效液相色谱蒸发激光散射检测器测定三七中人参皂苷 Rg1的含量。色谱柱为 CLC-ODS ( 6. 0
mm× 150 mm) ,流动相为乙腈 -水 ( 30∶ 70) ,蒸发激光散射检测器。定量方法简单 ,准确。回收率为 100. 50% , R SD
为 1. 82%。 并用紫外分光光度法测定了三七中总皂苷的含量 ,结果和 HPLC法基本一致 ,说明该方法定量准确 ,回
收率为 101. 50% , R SD为 1. 44%。 结论认为两方法均可以控制三七的质量。
关键词　三七　 HPLC-ELSD　人参皂 Rg1　总皂苷　紫外分光光度法
Quantitative Determination of Saponins in the Root of Panax pseudo-ginseng var.
notoginseng by HPLC-ELSD and UV Spectrophotometry
　　China Pharmaceutical Univ er sity ( Nanjing 210038)　 Jiang Yingqia o, Wang Qiang , Ma Shiping and Dang Xuedong
Abstract　　 A reverse phase HPLC-ELSD method fo r the determination o f ginsenoside Rg1 in the roo t
o f Panax pseudo-ginseng va r. notoginseng ( Burkill ) Hoo et Tseng w as repo rted. Chroma tog raphic condi-
tions: Shim-pack CLC-ODS co lumn ( 6. 0 mm× 150 mm ); acetoni t rile-w ater ( 30∶ 70) as the mobi le
pha se; Shimadzu LC-6A with SEDEX-55 ELSD detector. The method was found to be simple and accurate
w ith recovery rate o f 100. 50% and RSD= 1. 82% . The established UV spect ropho tometric determination
o f total saponins in P. pseudo-ginseng va r. notoginseng was also t ried and gave an accura te result coinci-
dental w ith tha t o f the HPLC resul ts. The recovery rate w as 101. 50% , and RSD= 1. 44% . It seemed that
bo th methods can be used reliably fo r th e quali ty control of P. pseudo-ginseng var. notoginseng.
Key words　　 Panax pseudo-ginseng var. notoginseng ( Burki ll) Hoo et Tseng　 HPLC-ELSD　 gin-
senoside Rg1　 tota l saponins　 UV spectrophotometry
　　三七中皂苷类成分的含量测定可采用 HPLC-
UV
[2 ]及 HPLC-RI法 [ 3]。前者用紫外检测器λ= 203
nm检测 ,因三七中皂苷类成分紫外吸收较差 ,受试
剂影响很大 ,基线漂移大 ,使分析很难进行 ;后者用
示差检测器 ,则灵敏度低 ,稳定性和选择性均较差。
我们首次采用 HPLC-ELSD法对三七中主要皂苷
人参皂苷 Rg1进行了含量测定 ,并用紫外分光光度
法测定了总皂苷的含量。因 ELSD检测器为质量型
检测器 ,且不受外部环境的干扰 ,试剂在检测器中全
部蒸发 ,不干扰检测 ,灵敏度及稳定性均符合含量测
定的要求。
总皂苷的含量测定方法有重量法 [4 ]、比色法 [ 5]
和紫外分光光度法 [6 ]。 重量法测定的总皂苷实际上
是正丁醇提取物 ,并不代表总皂苷 ;比色法因显色不
稳定 ,致使重现性较差 ;我们首次采用紫外分光光度
法测定三七中总皂苷的含量 ,经方法学验证 ,本法准
确 ,重现性良好。
1　仪器与试药
岛津 LC-6A高效液相色谱仪 ,法国 SEDEX55
型蒸发激光散射检测器 ( ELSD) ;杭州英谱 HS色谱
数据工作站 ;岛津 UV-2501 pc紫外分光光度计。试
剂均为色谱纯或分析纯。人参皂苷 Rg1由中国药品
生物制品检定所提供。
2　三七中人参皂苷 Rg1的含量测定
2. 1　色谱条件: 色谱柱为日本岛津 Shim-pack
CLC-ODS柱 ( 6. 0 mm× 150 mm);流动相乙腈 -水
( 30∶ 70) ;柱温 45℃ ;流速 0. 5 mL /min; ELSD检
测器漂移管温度 90℃ ;载气压力 0. 20 M Pa。在此条
件下 ,样品中人参皂苷 Rg1与其他相关峰均能达到
基线分离。
2. 2　对照品溶液制备:精密称取人参皂苷 Rg1对照
品适量 ,用甲醇溶解 ,制成 1 mg /mL的溶液。
·737·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2000年第 31卷第 10期
Address: Jiang Yingqiao, China Ph armaceu tical Univ ersi ty, Nanjing江英桥　男 , 1992年毕业于广州中医药大学 ,获硕士学位 , 1992年分配到中华人民共和国广州口岸药品检验所工作 , 1998年至今为中国药科大学生药学博士 ,参与了《中国药典中药薄层色谱彩色图集》的编著工作。 参与的《进口非药典天然药物制剂检验方法研究》获得国家科技进步三等奖、国家中医药管理局科技进步二等奖、省中医药管理局一等奖。 主要从事中药及其制剂的分析工作。
2. 3　供试品溶液制备:取 3. 1项下的供试品溶液作
为供试品溶液。
2. 4　标准曲线制备: 分别精密吸取对照品溶液 1,
2, 3, 4, 5, 6μL,按上述色谱条件测定峰面积 ,以峰面
积的自然对数为纵坐标 ,以浓度的自然对数为横坐
标 ,绘制标准曲线 ,其回归方程为 Y = 11. 322+
1. 503X , r = 0. 999 6。结果表明人参皂苷 Rg1在
1. 0～ 6. 0μg范围内呈良好的线性。
2. 5　精密度试验: 精密吸取对照品溶液 5μL,重复
进样 5次 ,结果 RSD为 1. 26% ,证明精密度良好。
2. 6　重现性试验:取同一样品 6份 ,分别按样品测
定条件测定 ,结果 RSD为 2. 78% ,表明重现性良
好。
2. 7　样品测定:分别精密吸取上述对照品溶液 2, 5
μL,供试品溶液 10μL,注入高效液相色谱仪 ,测定
峰面积 ,以外标两点法求出含量。结果见表 1。
表 1　样品中三七皂苷的含量测定
产　　地 人参皂苷 Rg1
(% )
R SD
(% )
总皂苷
(% )
RSD
(% )
云南文山 ( 40头 ) 3. 04 1. 66 7. 25 1. 57
云南文山 ( 90头 ) 2. 79 2. 60 6. 81 3. 02
云南文山 ( 270头 ) 2. 93 2. 21 6. 70 2. 70
广西靖西 ( 40头 ) 2. 47 1. 91 6. 44 2. 02
广西靖西 ( 60头 ) 2. 14 2. 08 5. 58 1. 81
西安 ( 60头 ) 3. 94 1. 89 9. 08 1. 34
杭州 ( 80头 ) 2. 34 2. 28 7. 80 2. 56
2. 8　回收率试验:取已知含量的样品 0. 25 g,精密
称定 ,分别加入对照品 ,按样品制备方法及测试条件
测定 ,结果回收率为 100. 50% , RSD= 1. 82% 。
2. 9　稳定性试验:精密吸取对照品溶液 5μL,隔 1
h进样 1次 ,共进样 8次 ,测得对照品峰面积积分
值 ,计算 RSD为 2. 35% ,证明人参皂苷 Rg1在 7 h
内稳定。
3　三七中总皂苷的含量测定
3. 1　供试品溶液的制备:取本品粉末约 0. 5 g ,精密
称定 ,置索氏提取器中 ,加乙醚 80 mL,水浴上提取
2 h,取出 ,弃去乙醚液 ,再加甲醇 80 mL提取 4 h,
甲醇提取液蒸干 ,残渣加水 15 mL使溶解 ,水溶液
置分液漏斗中 ,用水饱和的正丁醇萃取 5次 ,每次
15 m L,正丁醇提取液用正丁醇饱和的水洗涤 5次 ,
每次 15 mL,正丁醇液蒸干 ,残渣加甲醇溶解 ,置 50
m L量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为供试品
溶液。
人参皂苷 Rg1对照品溶液的制备:精密称取人
参皂苷 Rg1对照品 5 mg ,置 100 mL量瓶中 ,加甲醇
溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。
3. 2　紫外吸收光谱:取供试品溶液 1 m L,标准品溶
液 3 mL,按照样品含量测定项下操作 ,在紫外分光
光度计上扫描 ,得紫外吸收光谱。
结果表明 ,供试品紫外吸收曲线及最大吸收波
长 268 nm与人参皂苷 Rg1标准品完全一致 ,可直
接采用紫外分光光度法测定供试品中总皂苷的含
量。
3. 3　标准曲线制备: 分别精密吸取对照品溶液
0. 0, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 m L置 10 mL量瓶中 ,
置水浴中挥尽溶剂 ,取出 ,加浓硫酸 0. 6 mL,摇匀 ,
置 80℃水浴中加热 1 h ,取出 ,置冰浴中加 95%乙
醇至刻度 ,摇匀 ,照分光光度法 (中国药典 1995年版
一部附录 31页 ) ,以第 1管为空白 ,在 268 nm波长
处测定吸光度。 以吸光度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,
绘制标准曲线。 经回归统计 ,得标准曲线方程: A=
39. 685 6C+ 0. 014 8, r= 0. 999 6。 浓度在 5. 04～
25. 20μg /mL范围内 ,与吸光度呈线性关系。
3. 4　回收率试验: 取已知含量的样品 5份 ,精密称
定 ,分别加入一定量的人参皂苷 Rg1对照品 ,按照标
准曲线制备项下操作 ,结果回收率为 101. 15% ,
RSD= 1. 44% (n= 5)。
3. 5　稳定性试验:精密吸取供试品溶液 1. 0 mL,按
照标准曲线制备项下操作 ,每隔 30 min测定 1次 ,
共测定 7次 ,计算 RSD为 1. 35% ,证明总皂苷在
3 h内稳定。
3. 6　精密度试验:精密吸取人参皂苷 Rg1对照品溶
液 3. 0 m L,共 5份 ,按标准曲线制备项下操作。分别
测定吸光度 ,结果 RSD为 1. 23% (n= 5)。
3. 7　重现性试验:取同一样品 5份 ,分别按样品测
试条件测定 ,结果 RSD为 2. 56% ,表明重现性良
好。
3. 8　样品的含量测定: 精密吸取供试品溶液 1. 0
mL,按照标准曲线制备项下操作 ,在 268 nm波长处
测定吸光度。从标准曲线上读出供试品溶液相当于
标准品溶液的浓度 ,计算 ,即得。结果见表 1。
4　讨论
4. 1　 ELSD是一种通用型检测器 ,流动相由热气流
使之热气化喷雾 ,再进入加热管 ,溶剂在此挥发。 所
得分析检测的物质颗粒通过一狭窄光束散射光 ,由
光电倍增管收集。 ELSD的响应取决于被分析物质
颗粒的数量和大小。由于 ELSD仅对不挥发被分析
物质产生响应 ,即使是在梯度洗脱时也能提供平衡
的基线。 ELSD已成功用于皂苷、生物碱、萜类内酯、
氨基酸和糖类等分析 ,是分析无紫外吸收及紫外吸
·738· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2000年第 31卷第 10期
收弱成分的有力工具。
4. 2　利用苷的糖基糠醛生成反应 ,在紫外区有最大
吸收 [7 ] ,可用紫外分光光度法测定总皂苷的含量 ,该
法较比色法及重量法操作简单 ,重现性良好 ,灵敏度
较高。
参 考 文 献
1　真田修一 . 药学杂志 , 1978, 98: 1048
2　粟晓黎 ,王宝琴 . 中成药 , 1990, 12( 3): 10
3　邸　峰 ,孙毅坤 . 中国中药杂志 , 1996, 21( 11) : 672
4　卫生部药政管理局编 . 进口传统药及天然药物制剂质量标准 .
北京:人民卫生出版社 , 1990: 1
5　周志华 ,章观德 ,王菊芬 . 药学学报 , 1981, 16( 7): 535
6　金　斌 ,汪海孙 ,郑　军 . 中成药 , 1994, 16(6) : 40
7　北京医学院 .中草药成分化学 . 北京:人民卫生出版社 , 1980:
185
( 2000-03-26收稿 )
射干及其鸢尾属代用品中芒果苷的定量分析
南京中医药大学 ( 210029)　　　刘训红 　潘金火
江苏苏宁医药科技有限公司　　王玉玺
摘　要　以活性成分芒果苷 ( mangiferin)作为质控指标 ,用 RP-HPLC法对 7个野生或栽培的射干、 1个射干的茎
叶和 3个射干的代用品 ,共 11个样品进行了分析。 结果表明: 射干中的芒果苷含量明显高于其代用品:川射干 (鸢
尾 I ris tectrnum )和白射干 (野鸢尾 I . d ichotoma)。不同产地的射干也有一定的含量差异 (P < 0. 05)。但野生和栽培
的射干 ,以及根茎和茎叶之间的芒果苷含量则无显著性差异 (P> 0. 05)。本法快速简便 ,重现性好 ,测定数据可作为
射干质量控制和品质评价的可靠依据。
关键词　射干　川射干　白射干　芒果苷　 RP-HPLC　定量分析
Quantitative Determination of Mangiferin inRhizoma Belamcandae and
Its Substitute of Iris L.
　　Nanjing Univ e rsity of TCM ( Nanjing 210029)　 Liu Xunhong and Pan Jinhuo
　　 To tal Hospital in Nanjing Militar y Reg ion　Wang Yuxi
Abstract　　 Mangiferin, one of the activ e consti tuents of Rhizoma Belamcandae, in samples o f Be-
lamcanda chinensis ( L. ) DC. or i ts substi tute w as determined quanti tativ ely by RP-HPLC. The 11 sam-
ples collected f rom di fferent localities for analy sis w ere: 7 rhizomes of w ildly g row n or cultiv ated B. chi-
nensis , 1 of i ts leaf and stem, and 3 substitutes ( a wi ldly g row n and ano ther commercially available Iris
tectorum Maxim. and a I . dichotoma Pall. ) . Resul ts o f the analysis show ed tha t the contents of mangi ferin
in Rhizoma Belamcandae were signi ficant ly higher than tha t o f i ts substi tutes I. tectorum and I. di-
chotoma. There w ere also certain significant dif ferences betw een samples from di fferent localities ( P <
0. 05) , but w ith no stati stically significant di fference between the rhizome o r leaf and stem, nei ther be-
tw een cul tivated and wi ldly g row n samples, ( P> 0. 05) . The method w as proved to be quick, simple and
reproducible, and may prov ide a reliable basis for the quality cont rol and evalua tion o f B . chinensis .
Key words　　 Belamcanda chinensis ( L. ) DC.　 Iris tectorum Maxim.　 Iris dichotoma Pall. 　
mangi ferin　 RP-HPLC　 quantitativ e analy sis
　　中药射干为鸢尾科射干属植物射干 Belamcan-
da chinensis ( L. ) DC. 的干燥根茎 ,系中国药典
( 1995年版一部 )收载的品种。具有清热解毒、消炎
利咽的功能。 由于地区用药习惯不同 ,加之市场紧
俏 ,大量栽培 ,造成商品药材品种混乱 ,质量不一 ,市
售商品除射干外 ,还有鸢尾属 ( Iris )植物的根茎在不
同地区代射干使用 ,西南地区用川射干 (鸢尾 I . tec-
torum Maxim. ) ,陕西等地用白射干 (野鸢尾 I . di-
chotoma Pall. ) ,两广一带用射干的茎叶作射干药
用。 对射干中射干苷、鸢尾苷的含量分析已有报
道 [1～ 3 ]。 本文 以 射 干 另 一有 效 成 分 芒 果 苷
( mangiferin)作为质控指标 ,用 RP-HPLC法对射干
·739·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2000年第 31卷第 10期
Address: Liu Xunhong, Nanjing University of TCM, Nanjing刘训红　男 , 1986年于南京中医学院中药鉴定专业研究生毕业 ,硕士学位 ,现为南京中医药大学副教授 ,《中华本草》药材专业副主任委员。主要从事中药材品质鉴定研究。主持或参加了“江苏地产药材太子参的活性成分研究”、“中华本草”等 6个省级以上科研课题。公开发表学术论文 40余篇。 编写出版了《中药材薄层色谱鉴别》、《中华本草》、《中药学百科辞典》等 6本专著。