全 文 ：表 l 样品含t 测定结果 (% )(n ~ 3)
采收期 (月 )成分
5 6 7 8 9 1 0 1 1
M
一
1 0
.
1 0 5 2 0
.
1 30 9 0
.
40 1 6 0
.
2 99 9 0
.
4 5 1 6 0
.
5 15 6 0
.
6 0 0 8
M
一 4 一 0 . 0 2 8 7 0 . 3 58 9 0 . 2 0 5 7 0 . 2 6 4 9 0 . 39 7 4 0 . 4 7 9 6
M
一5 0
.
3 7 7 9 1
.
17 0 2
.
6 4 5 2
,
2 72 2
.
6 9 4 2
.
5 7 6 3
.
3 9 4
6
.
5 展开剂 中的水分对分离具有关键的作
用 , 不加水 时斑点严重拖尾 , 影响分离 , 但水
量过大则展开剂变混浊 。
致谢 : 本 所植化 室林茂研究员提供 对照
品 , 表示 感谢 。
参 考 文 献
1 马天波 , 等 . 中草药 , 1 9 8 7 , 18 (3 ) : 10 5
林 茂 , 等 . 药学学报 , 19 9 3 , 2 8 (6 ) : 4 3 7
中国医学科学 院药物研究 所编著 . 中草药 现代研究 .
第三卷 . 北京 : 北京医 科大学 中国协和医科大学联 合出
版社 , 1 9 9 7 : 2 2 2
Ch e n g G F
, e t a l
.
Ph y to m e d iein e
, 1 9 9 4 , l
:
2 0 9
杨东旭 , 等 . 药学学报 , 19 9 5 , 3 0 (2 ) : 2 54
周 同惠 , 等 编著 . 纸色谱和薄 层色谱 . 北 京 : 科学出版
社 , 1 9 8 9 : 2 9 6
(1 9 9 8
一
1 2
一
1 4 收稿)
H P L C 法测定冬虫夏草中腺昔含l
福建省药 品检验 所 (福州 3 5 0 0 0 1) 吴春敏 ‘ 叶榕平”
摘 要 采用甲醇为溶剂 , 提取冬虫夏草及其虫体 、子座中的核昔 类成分 , 用 H P LC 法测定腺昔的
含量 ; 色谱条件 以 产Bo ti d a p a k C : 。(4 . 6 m m X 2 5 0 m m , 1 0 拌m )为色谱柱 , o . o l m o l/L 磷酸二氢钠 一磷
酸氢二钠缓 冲液 (pH 6 . 5》甲醇 (8 5 : 1 5) 为流动相 , 检测波长 U V 2 6o n m , ; = 0 . 9 9 99 , 线性范围 。. 2
一 l 拌g , 回收率 1 0 4 . 5 % 。
关健词 H P L C 冬虫夏 草 腺昔
D e te r m in a tio n o f A d e n o sin e in D o n g eh o n g x ia c h a o (Co
r
dy
e
eP
s sin e n sis) by H PL C
W
u C h u n m in a n d Y e R o n g p in g (F u ji
a n In s titu te o f D r u g C o n t r o l
,
Fu z ho u 3 5 0 0 0 1 )
A bs tr a e t A m e th o d ha s be e n d e v e lo p e d fo r t he d e t e r m in a tio n o f a d e n o sin e in Co
r
dy
c
eP
es sin e n sis
(Be
rk
.
) S a e c
.
b y H PL C
.
N u e le o s id e s in bo th w o r m b o d y a n d s t r o m a w e r e e x t r a ete d w ith M
e OH
.
A 产Bo n
-
d a p a k C , : e o lu m n w a s u s e d
,
w ith p h o s p h a te bu ffe r (0
.
0 1 m o l/ L
o f a m ix t u r e o f N a H ZPO ; a n d N a : H P O ‘ o f p H
6
·
5 )
一
M
e O H (8 5 , 1 5 ) a s th e m o b ile p ha se
, a n d d e te e te d a t a w a v e le n g th o f 2 6 0 n m
·
T h e lin e a r r a n g e w a s
0
·
2一 1 . 0 拌g , r = 0 . 9 9 9 9 . T he a v e r a g e r e e o v e ry w a , 1 0 4 . 5 % .
K ey w o rd s Co
r
dy
c
eP
s sin e n sis a d e n o s in e
冬 虫 夏 草 co r dy c eP : s in e n s is (B e r k · )
S a c
. 是我国传统名贵 中药材之一 。 近年来 ,
人们对人工发酵虫草菌粉提出了质量评测方
法〔, 一 3〕, 而针对 天然虫草 的质量评 价方法却
显得相对匾乏 。 为 了有效地控制天然虫草的
质量 , 我们拟定以其有效成分之一的核昔类
化合 物腺昔 (a d e n o s in e )为检测指标 [‘, 4〕, 采
用 H PL C 法对 西藏和青海虫 草进行定量分
析 , 为冬虫夏草的质量评定提供了一种快捷 、
有效的检测方法 。
A d d r e s s
:
W u Ch u n m in
,
F u jia n In s t it u t e fo r D r u g C o n t r o l
,
F u z ho u
, ’ 为福建中医学 院 93 级 实习生
.
6 5 8
.
l 仪器与试药
1
.
1 仪器 : 高效液相色谱仪 (P E I 一 4 0 0 0 )
1
.
2 试剂 : 腺春(中科 院上海生化所东风生
化技术公司 , 层 析纯 ) ; 尿昔 (SI G MA ) 、腺 嚷
吟 (上海丽珠东风生物技术有限公 司 ) ; 尿 嗜
吮 (上海试剂二厂 ) , 甲醇 (G R ) , 超纯水 , 其余
均为分析纯 。
1
.
3 试验材料 : 青海虫草 (青海省药检所提
供 , 分别来 自玉 树州 、果洛州 、 海北州 ) , 西藏
虫草 (购 自西藏药材公司 ) 。
2 方法与结果
2
.
1 分析条件 : 色谱柱 : 拜B o n d a p a k C l。(4 · 6
m m x 2 5 0 m m
,
1 0 拌m ) ; 流动相 : 0 . 0 1 m o l/ IJ
磷酸二氢钠 一磷酸氢二钠缓冲液(p H 6 . 5 )一甲醇
(8 5
: 1 5 )
, 流速 1 . 0 m L / m in 。 理论板数按腺
昔峰计不低于 2 0 0 0 ;检测波长 : U V 2 6 0 n m 。
2
.
2 标准品色谱参数 : 精密称取尿嗜吮 、尿
昔 、腺嗓吟 、腺昔各 10 m g 于 l o m L 容 量瓶
中 , 加 50 % 乙醇近刻度 , 超声助溶后放 至室
温 , 定容 , 摇匀 。 精密移取上述溶液 l m L 于
1 0 m L 容量瓶中 , 50 % 乙醇定容 , 摇匀 。 将此
溶液在拟定条件下分析 , 腺昔与前一样 品峰
可达到完全分离 , 分离度 2 . 41 , 保 留时间 9 . 9
m in (见图 1 ) 。
3
,
4
,
s m L 分置于 10 m L 量瓶 中 , 用 同一溶
剂定容 , 在拟定色谱条件 下进样 20 拌L 测定
峰面积 。 以 峰面积 一浓度作 图 , 腺昔在 0 . 2一
1. 0 拜g 范围内呈 良好的线性关系 , 回归方程
为 Y = 1 9 1 6 9 4 6 7 . slX + 3 3 8 0 1 9 . 1 , 相关系数
r
= O
·
9 9 9 9
。
2
.
4 样品预处理 : 称取虫草样品适量 , 粉碎 ,
过 2 号筛 , 备用 。 精密称取虫草 0 . 5 9 于索氏
提取器中 , 加 甲醇 8 0 m L , 回流提取 4 . s h 。提
取液 蒸 干 , 50 写乙 醇定 容至 s m L , 经 0 . 45
拌m 微孔滤膜过滤 , 滤液即为供试液 。
2
.
5 回收率试验 : 采用加样回收法 。 精密称
取虫草粉 0 . 25 9 于索氏提取套筒 中 , 精密量
取 1 0 0 拜g / m IJ 腺昔标准液 1 m L 于盛有虫草
粉的纸筒内 , 使虫草粉均匀润湿 。将加样后的
虫草 粉连同索氏提取套筒移人恒温 干燥 箱
中 , 于 6 0 ‘C烘烤 Z h , 按 2 . 4 所述方法处理 ,
以此法平行操作 5 份样 品 , 进样 20 拜L 后 测
得 腺 昔 峰 面 积 , 求 出 平 均 回 收 率 为
1 0 4
.
5 6 %
,
R S D = 2
.
3 3 %
。
2
.
6 精密度试验 : 取经预处理的样 品 (以海
北州虫草为例 )在拟定的色谱条件下连续进
样 5 次 , 得峰面积 , R S D 一 0 . 91 % 。
2
.
7 重现性试验 : 以拟定提取方法平行提取
5 份样 品 (以西藏虫草为例 ) , 在拟定 色谱条
件下分别测定腺昔含量 , R S D 一 4 . 21 % 。
2
.
8 样品分析 : 依拟定方法分别测定 4 种虫
草样品 , 进样量 2 0 拌L , 按外标法以峰面积计
算腺昔含量 。 结果见表 1 , 色谱图见图 1 。
衰 1 样品刹定结果
样品 虫体 子座
(m g / g )
,†幽bo甘二八」己,翻njQ†亡J,八j几」
.⋯00CUC时 间 r (皿n ) 西藏虫草青海 海北虫草玉树虫草
果洛虫草
( m g / g )
0
.
3 6 2
0
.
1 1 2
1
一混合标准品 2 一西藏虫草
A
一腺昔 E 腺嗦吟 C 一尿 昔 + 尿 啥陡
图 1 虫草色谱 圈
2
.
3 标准 曲线 制备 : 精密称 取腺昔 2 5 m g
于 2 5 m L 量瓶中 , 加 5 0 %乙 醇近刻度 , 超声
助溶后放至室温 , 定容 , 摇匀 。 准确量取 1 , 2 ,
0
。
1 4 1
0
.
1 6 6
全体
( m g / g )
0
.
3 8 5
0
。
2 0 1
0
.
1 9 2
0
.
2 4 0
《中草药》1 99 9 年第 30 卷第 9 期
3 讨论
3
.
1 样品预处理是天然虫草运用 H PL C 法测
定腺昔含量的关键之一 。经试验 , 我们用甲醇索
氏回流提取 , 可完全杜绝蛋白质的溶出 , 从而保
护了色谱柱 。 经方法学各项试验 , 结果令人满
.
6 5 9
.
意 。 提取时间以 4一 s h 为宜 (见表 2) 。 样品于 时间偏长 。 最终选定二者配比为 85 : 15 , 虽然
2 ℃ ~ 4 ℃储存 , 36 h 内腺昔含量稳定 。 尿啥陡与尿昔无法分离 , 但均可作为杂质并人
3
.
2 流动相中磷 酸盐缓 冲液与 甲醇配 比为 杂质峰中 , 样品中腺昔仍可与杂质峰完全分
90
,
10 时 , 标准品各峰分离 良好 , 但腺昔保 留 离 , 保留时间较为适宜 , 有利于快速分析 。
表 2 西藏虫草提取时间比较
提取时 间 (h )
腺昔含址 (m g / g ) 0 . 2 0 1 0 . 2 3 3 0 . 3 7 9 0 . 3 9 0 0 . 3 9 1 0 . 3 7 8 0 . 3 6 0
3
.
3 试验中 , 我们分别测定了冬虫夏草 2 个
主产省区 的 4 个样品中腺昔的含量 。 结果表
明 , 青海 3 个产地 的虫草 中腺昔含量基本相
同 ,但较西藏虫草明显偏低 。 比较两省区的虫
草样品外观 , 青海产虫草的虫体显著大于西
藏虫草 。经腺昔含量 比较试验却发现 , 西藏虫
草的虫体 与子座 中腺昔 含量均 高于青海虫
草 。同时 , 各虫草子座 中腺昔的单位含量均高
于虫体 , 这与文献报道相吻合阁 。 以上结果对
冬虫夏草以虫体大小决定质量优劣的外观评
定方法提出置疑 。
参 考 文 献
l 姜丽厦 , 等 . 中成药 , 1 9 9 3 , 1 5 (5 ) : 3 3
2 潘锡强 , 等 . 中成药 , 1 9 9 4 , 1 6 (1 0 ) : 1 2
3 李来生 . 色谱 , 1 9 9 5 , 1 33 (4 ) : 3 0 5
4 毛丽珍 , 等 . 中草药 , 1 9 9 3 , 2 4 (9 ) : 4 6 7
5 杨世海 , 等 . 中草药 , 1 99 4 , 2 5 (9 ) : 4 8 8
(1 9 9 9
一
0 2
一
0 6 收稿)
刺五加提取物中丁香昔的 H PL C 法测定
中国医药研究 开发中心 (北京 1 0 2 2 0 6) 张世伟 ‘ 赵咏丽 鲁学照
摘 要 以 Cl 。柱 , 甲醇 一水 一醋酸 (150 : 8 50 : 15) 为流 动相 , 检测波长 为 2 7 0 n m , 建立 了刺五加提
取物中主要 有效成分 丁香昔的 H PL C 法测定 。 结果 表明 :本法快速 、灵敏 、简便 、准确 。
关健词 刺 五加 丁香昔 H P LC
刺 五 加 提 取 物 是 从 刺 五 加 A ca n -
thOP
a n a x se n tic os u s ( R u p r
.
e t M a x im
.
)
H ar m s 的干燥 根及根茎 中提取有 效部位后
喷雾干燥而成 。其 中主要含有丁香昔 、异秦皮
定 、总黄酮等成分 。 为 了更好地控制产 品质
量 , 我们探讨并建立 了采用 H PL C 法测定该
提取物的主要有效成分丁香昔含量的方法 。
1 仪器与试药
仪器 : W a t e r s 高效液相 色谱 仪 , 5 0 1 泵 ,
49 0 多波长检测器 , 74 0 数据处理机 。对照品 :
丁香昔由本室 自制 。 样品 : 刺五加提取物 (吉
林 白山正茂药业 公司生产 , 批号 为 9 21 12 0 ,
9 3 0 3 1 9
,
9 5 1 2 0 9
,
9 6 0 1 4 2
,
9 7 0 3 5 1 )
。 甲 醇 、 醋
酸 , 均为分析纯 。
2 色谱条件
色谱柱 : YW Q 一C l: 4 . 6 m m 沐 2 5 0 m m 。流
动相 : 甲醉 一水 一醋酸 (1 5 0 : 8 5 0 , 15 ) ; 流速 :
1
.
0 m o L / m in
。 检测波长 : 2 7 0 n m ; 柱温 : 室
温 ; 在此 条件 下丁 香昔 的保 留时间为 18 . 3
m in
, 丁香昔能与其它成分很好分开 (见图 1 ) 。
3 实验方法
3
.
1 对照品溶液的制备 : 称取 丁香昔 2 . 0
m g 置于 5 0 m L 容量瓶中 , 加 95 % 乙 醇溶解
并稀释至刻度 , 摇匀 。再从 中精密吸取 l m L ,
A d d r e s s
:
Z ha n g Shiw e i
,
N a t io n a l In s tit u t e o f Pha r m a e e u tie al R e s e a r eh 乙 De v e lo p m e n t , Be ijin g张世伟 男 , 1 9 8 6 年 7 月毕业于华东理工大学生 化工 程系 , 获学士学位 .毕 业后一直在 中国 医药研究开发 中心工作 , 翻研究员 ; 目前主要从事 中药的研 究开发工作 。
.
6 6 0
.