全 文 ：120μL置于分液漏斗中 ,挥干甲醇 ,然后按照 2. 4
中最佳实验条件操作 ,即分别加入 pH值为 3. 44的
磷酸氢二钠 -柠檬酸缓冲溶液 2. 2 m L,再加入 0. 4
m L溴酚蓝酸性染料溶液 ,摇匀 ,加入 7. 0 m L氯仿
溶液萃取 ,在 90 min时终止反应 ,将氯仿层放出 ,在
406 nm处测定吸光值 ,以对照品用量为横坐标 ,以
吸光值为纵坐标 ,进行线性回归 ,得到以下线性方
程: Y= 0. 118 4+ 8. 98× 10- 3X , r= 0. 999 4。此结果
表明当标准品用量在 19. 56～ 58. 68μg范围内 ,吸
光值与对照品用量呈现良好的线性关系。
2. 6　样品含量测定:精密称取待测样品 3份 ,每份
5 mg ,置于 10 mL容量瓶中 ,加入甲醇定容 ,作为样
品溶液 ,分别吸取 50μL置于分液漏斗中 ,挥干甲
醇 ,然后分别按照 2. 4中最佳实验条件操作 ,在 406
nm处测定吸光值 ,并依据 2. 5中线性方程计算生
物碱的含量。结果见表 4,骆驼蓬种子所含总生物碱
约 5% 。
表 4　样品含量测定结果
样品浓度
( mg /m L)
加入样品量
(μg)
平均吸
光值
含量
(% )
折合生药含量
(% )
0. 534 26. 70 0. 304 77. 4 5. 1
0. 520 26. 00 0. 280 69. 2 4. 5
0. 485 24. 25 0. 278 73. 5 4. 8
2. 7　加样回收率实验: 精密称取 harmine对照品
4. 89 mg ,置于 10 mL容量瓶中 ,加入甲醇至刻度 ,
摇匀 ,作为对照品溶液。精密吸取样品溶液 ( 0. 534
mg /mL) 3份 ,每份 50μL,置于分液漏斗中 ,分别加
入对照品溶液 30, 40, 50μL,挥干甲醇 ,然后按照
2. 4中最佳实验条件操作 ,在 406 nm处测定吸光
值 ,并计算加样回收率 ,结果为 91. 9% (n= 3)。
3　讨论
关于骆驼蓬种子总生物碱的含量测定 ,有双波
长薄层扫描法、紫外分光光度法、以及非水滴定法等
多种方法 ,但是均不十分理想。非水滴定法测定总碱
含量所需标准品量过多 ,且样品溶解于醋酸后颜色
太深 ,致使结晶紫终点变化不明显 ;双波长薄层扫描
法由于不同薄层板间差异较大 ,所以重现性欠佳。我
们对酸性染料比色法进行了比较详细的研究 ,确定
了最佳测试条件 ,建立了利用酸性染料比色法测定
骆驼蓬种子总生物碱含量的方法。
参 考 文 献
1　江苏新医学院编 . 中药大辞典 . 下册 . 上海:上海人民出版社 ,
1977: 1757
2　李春杰 ,刘德玺 ,马　特 ,等 . 新疆医学院学报 , 1987, 10( 1): 27
3　杨小平 ,潘启超 ,李春杰 ,等 . 癌症 , 1991, 10( 6): 463
( 1999-12-30收稿 )
大叶钩藤中表儿茶素含量的测定△
上海中医药大学中药研究所 ( 200032)　　杨　君 　宋纯清　陈　明　王海燕　胡之璧
摘　要　目的: 充分利用中药钩藤的植物资源 ,测定并比较大叶钩藤 Uncaria macrophylla Wall.的叶和钩茎中的表
儿茶素含量。方法: 利用 RP-HPLC测定。结果:钩藤钩茎中含表儿茶素 0. 38% ,叶中含 0. 82%。结论:大叶钩藤中
含有较多的表儿茶素 ,叶中含量大于钩茎中含量。
关键词　大叶钩藤　表儿茶素　 RP-HPLC
Determination of Epicatechin Content inUncaria macrophylla by HPLC
　　 Institute o f Chinese Ma teria Medica , Shanghai Univ ersity of TCM ( Shanghai 200032)　 Yang Jun, Song Chunqing ,
Chen Ming , Wang Haiyan and Hu Zhibi
Abstract　　 Epicatechin content in Uncaria macrophyl la Wall. w as determined by RP-HPLC. As a
resul t, the epicatechin contents w ere 0. 38% in the hook and stem , and 0. 82% in the leaf. Thus i t seemed
to be mo re wo rthw hi le to produce epica techin f rom the leaf ra ther than from the hook and stem.
Key words　　Uncaria macrophylla Wall.　 epica techin　 RP-HPLC
·662· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期
Address: Yang Jun, Insti tute of Chines e Materia M edica, Shanghai University of TCM, Sh anghai杨　君　 1988年毕业于吉林大学物理化学专业 ,获硕士学位 ; 1988～ 1998年在沈阳药科大学任教 ,副教授 ; 1998年在沈阳药科大学天然药物化学专业获博士学位 ;现在上海中医药大学做博士后。 先后从事天然药物化学、微生物学及物理化学方面的研究工作 ,参加多项国家和辽宁省课题研究 ,已发表 10多篇论文。△“九· 五”国家重点科技攻关资助项目 ( No. 969030203)
　　大叶钩藤 Uncaria macrophy lla Wall. 为常用
中药 ,用于治疗头晕目眩、惊痫抽搐、全身麻木等心
脑血管和神经系统疾病。化学、药理及应用研究 [1 ]绝
大部分只是针对生物碱部分。为了充分利用我国珍
贵的中药材资源 ,我们对钩藤的非生物碱部分进行
了研究 ,发现含有较多的表儿茶素。儿茶素类化合物
具有明显的清除体内自由基、阻断 N -亚硝基化合物
形成、抑制脂氧化酶活性和质脂过氧化物作用 ,并有
防突变、防癌等药理活性。我们通过建立钩藤中表儿
茶素的提取方法和 HPLC含量测定方法 ,并对钩藤
不同部位中表儿茶素的含量进行比较 ,为钩藤中表
儿茶素的开发利用提供了依据。
1　仪器与实验材料
HP1100型高效液相色谱仪 (惠普公司 ) ;二极
管阵列检测器 ( DAD) ; ODS Hypersil色谱柱 ( 5μm,
250 mm× 4 mm)。
对照品表儿茶素由本室自制 ,经 MP、 UV、 IR、
1 HNM R、 13 CNM R、 1 H-13 CCO SY、 1H-1 HCO SY、
HMBC及 MS鉴定核实。 水为双重蒸水 ;甲醇为分
析纯经重蒸 ;其余试剂均为分析纯。
大叶钩藤 Uncaria macrophylla购自广西 ,由浙
江省中药研究所孙昌高高级工程师鉴定。
2　实验方法与结果
2. 1　样品制备: 精密称取样品 (钩藤叶、钩茎 ) 1 g
置 100 mL具塞三角瓶中 ,加入 50 mL 50%的甲醇 ,
密闭 ,冷浸过夜 ,超声 15 min后滤过 ,减压浓缩除甲
醇 ,浓缩液用水稀释至 50 mL,滴加 HCl酸化至 pH
= 3,过滤除沉淀后 ,用 EtO Ac 50 mL萃取 3次 ,合
并萃取液 ,减压回收溶剂至干 ,用甲醇溶解 ,滤过到
5 mL量瓶中用少量甲醇洗涤并稀释至刻度 ,低温、
避光贮存备用。
2. 2　液相色谱条件: 流动相为乙腈 -甲醇 -水-冰乙
酸 ( 18∶ 2∶ 79. 5∶ 0. 5) ;柱温 25℃ ;检测波长 234
nm;流速 0. 5 mL /min。
2. 3　标准曲线的制备: 精密称取对照品表儿茶素
2. 516 mg,置于 5 mL容量瓶中 ,加甲醇溶解、稀释
至刻度 ,配成 0. 503 mg /mL的对照品溶液。自动进
样器分别进样 1. 0, 2. 5, 5. 0, 10. 0, 25. 0和 50. 0μL
进行分析测定。由 HP1100化学工作站数据处理系
统给出峰面积值 ,以对照品的浓度为横坐标 ,峰面积
为纵坐标做图 ,得到标准曲线 ,线性关系良好 ,回归
方程为 Y= 1 499X+ 4 302, r= 0. 999 9,线性范围
1. 26～ 25. 15μg。
2. 4　精密度实验:取浓度为 0. 503 mg /m L的对照
品溶液 ,进样 6次 ,每次进样 10μL, RSD为 3. 2%。
2. 5　重现性实验: 精密称取同一样品 5份 ,分别制
成样品溶液 ,测定表儿茶素的含量 , RSD为 5. 0% 。
2. 6　加样回收实验:精密称取 5份样品各 1 g,其中
3份分别精确加入表儿茶素对照品适量 ,按样品制
备和测定项下所述方法 ,进行表儿茶素的含量测定 ,
平均回收率为 98% ,RSD为 1. 0%。
2. 7　样品测定:精密量取样品贮备液 ,自动进样 ,按
上述条件进行含量测定。结果表明 ,钩茎中平均含儿
茶素 0. 38% ,叶中含 0. 82% , RSD分别为 1. 1%和
3. 7% 。
3　结果讨论
3. 1　由于所测化合物极性较大 ,所以采用甲醇、乙
醇、水作为提取溶剂 ,比较了单一溶剂和混合溶剂 ,
最后选定 50%甲醇水溶液作为最佳提取液。
由于儿茶素类经长时间加热易氧化 ,因此宜采
用短时间加热、冷浸、超声波等提取方法。结果表明 ,
热回流提取的提取液中表儿茶素很少。据文献报道 ,
可能是在高温下表儿茶素异化成儿茶素 [2 ] ,所以最
终选定冷浸过夜 ,超声 15 min提取的方法。 因钩藤
中含有较多的生物碱 ,为避免干扰 ,先酸化除去生物
碱及酸化合的沉淀物。
3. 2　钩藤入药都是用其钩茎 ,叶作为无用部分而丢
弃 ,造成了药材资源的浪费。从本实验的结果可以看
出 ,钩藤叶中含有较多的表儿茶素 ,完全可以作为表
儿茶素的来源之一而加以利用。
参 考 文 献
1　刘　贵 ,冯孝章 . 中国药学杂志 , 1991, 26( 10) : 583
2　米松伸一 ,久延羲弘 ,西乡英昭 . 日本食品工业协会志 , 1992, 39
( 2): 178
( 1999-12-14收稿 )
《中草药》杂志被确定为中国医学类核心期刊并被编入
《中文核心期刊要目总览》 2000年版 (第三版 )
　　最近接到《中文核心期刊要目总览》 2000年版 (第三版 )编委会通知:依据文献计量法的原理和方法 ,经过研究人员对相关
文献的检索、计算和分析 ,并请学科专家鉴定 ,《中草药》杂志被确定为中国医学类的核心期刊 ,并被编入《中文核心期刊要目
总览》 2000年版 (第三版 )。
(聂荣海 )
·663·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 9期