全 文 ：天门冬对 D 一半乳糖衰老模型小鼠
红细胞膜 、 肝细胞膜 M D A 影响的实验研究 △
佳木斯大学医学院药学系 ( 1 5 4 0 0 2) 曲凤玉 . 毛金军 魏晓东 ’ ` 李士莉 “ 王 玉 民 “
摘 要 为探讨天门冬的抗衰老机制 , 采用 D 一半乳搪衰老模型小 鼠 , 19 天 门冬不同溶媒提取液 30
d
, 侧定 红细胞 和肝 细胞 膜 M D A 含量 。 实验结果表明 : 天门冬抓仿 、 乙醉和 水提 液均可显著降低衰
老模 型小 鼠肝细胞膜 M D A 水平 (尸 < 0 . 0 1 ) ; 天 门冬抓仿提 取液可 显著降低 红细胞膜 M D A 含量
(尸 < 0 . 0 1 ) , 而醇提液和水提液不能降低红细胞膜 M D A 含量 。
关健词 天门冬 肝细胞膜 红细胞膜 丙二醛 ( M D A ) 抗衰老
天 门 冬 A sP a ar g u s c o c h i n c h i n e n s i s
( L O盯 ) M er r . 为百合科多年生藤本植物 的
块根 ,始载于 《本经 》 , 自古即作为益寿延年之
上 品 。 《神农本草 》记载天 门冬 “ 久服轻身益
气 ,延年不饥 ” 。 现代药理研究表 明天 门冬能
延长家蚕的寿命 , 具有较强的清除超氧 自由
基 , 延缓衰老的作用川 。 但有关天 门冬不同溶
媒提取液对 D 一半乳糖衰老模 型小 鼠川红细
胞膜 、 肝细胞膜 M D A 的影响未见报道 。 为阐
明天门冬抗衰老作用机制 ,我们采用 D 一半乳
糖衰老模型小 鼠 , 给予天门冬氯仿 、 乙醇和水
提液 , 测定 比较 3 种不 同溶媒提取液对衰老
模型小鼠肝细胞膜和红细胞膜 自由基代谢产
物 M D A 的影响 。
l 材料
1
.
1 动物 : 昆 明种 健康雄 性小 鼠 , 3~ 4 月
龄 , 体 重 (2 o 士 2) 9 , 54 只 ( 由白求恩医 科大
学动物部提供 ) , 随机分成 5 组 , 正常对照组
( 1 2 只 ) , 衰 老模 型 组 ( 12 只 ) , 模型 给 药组
( 3 X I O只 ) 。
1
.
2 药材 : 天 门冬由佳木斯药材公司 提供 ,
由本 院生药教研室鉴定 。
1
.
3 试 剂和仪器 : D 一半 乳糖 由上海试 剂二
厂生 产 ; 三 经 甲基 氨基 甲烷 ( T ir s ) : A R 级 ,
由北京帮定提供 ; M D A 测试盒 , 蛋 白定量测
试盒均由南京建成生物工程研究所提供 。 上
海上皿 J A 一 2 0 0 3 型 电子天平 , 上海 7 2 2一 B 型
光度计 , 湖南 G L 一 20 A 低温高速离心机 , 江
苏 F Z Q 一 2 型 旋涡混匀器 。
2 实验方法
2
.
1 天门冬液的制备 : 将天 门冬用热空气烘
干 , 粉碎成粗粉 , 称取 75 9 , 用 3 75 m L 抓仿
回流提取 3 次 ,每次 l h ,合并提取液 , 回收抓
仿 ; 水浴 挥尽 氯仿 ; 将天 门冬 挥干 , 继 续用
9 5% 乙醇 3 75 m L 回流提取 3 次 , 合并提取
液 , 回 收乙醇 ,水浴挥尽乙醇 ;将天门冬挥干 ,
继续用蒸馏水回流提取 3 次 ,合并提取液 ; 将
3 种提取液分别稀释至生药浓度 .0 7 9 /m L ,
冷藏备用 。
2
.
2 动物处理 : 正常对照组 ,每 日 s c 生理盐
水 ,馆 温 开水 ; 衰老模型组 , 每 日 sc D 一半乳
糖 ( 7 m g /m L , 经 1 3 0 ℃灭菌 , l o o m g / k g 体
重 ) , 19 温开水 ; 模型给药组 , 每 日 s 。 D 一半乳
糖 ( 1 0 0 m g / k g 体重 ) , 同时分别 19 天门冬抓
仿 , 乙醇和 水提液 (2 g / k g 体重 ) 。 各组分笼
饲养 , 自由进食饮水 , 自然光照 ,饲养温度 18
C ~ 2 4
`
C
, 湿度 5 0 C 一 6 0 ` C , 连续 3 0 d 。
2
.
3 红细胞膜制备 : 小鼠眼眶取血 , 肝素抗
A d d r e
s s :
曲凤玉 女
n g y u , eD p
a r t m e n t o f P h a r m a e y
,
M e d i e a l C o lle g e o f J i a m u s i U n i v e r s i t y
,
J i
a m u s i
, 硕士 , 副教授 。 从 事衰老 的生化机制研究和抗
龙江省教委科技 进步奖一项 。
. ’ 本 院生化教研室
△黑龙江省 自然科学基金资助项 目 ( D 9 8 18 )
衰老 中药的筛选 , 已 在国家级 杂志发表 7 篇论文 , 获黑eF
岁U13Q,3
《中草药 》 19 9 9 年第 30 卷第 10 期 . 7 6 3 .
凝 , 2 50 o r /m in 离心 s m in ,用滴管吸出血浆
层 (包括 白细胞 层 ) , 用 5 0 m m o l ` F r i s 一 H C I一 1
m m ol E D T A 生理 盐水吹打 5 次 , 混匀后离
心 Z m in , 反复洗 3 次 。 按 1 : 2 0 的 比例加人
预冷的 1 0 m m o l T r i s 一 H C I , 轻摇 3 m i n 使其
充分溶血 。 I X 1 0 4 r /m i n 离心 ZO m i n , 去掉
含血红蛋 白的上清层 , 并去掉离心管底层的
硬层沉淀物 。 再用 1 0 m m o l T r i S 一 H C I 缓冲溶
液洗涤离心 2 0 m in ,反复 3 次 。 显微镜下观
察红细胞 ’ ` g h os t ’ ` , 即红细胞有无破 的影 子 。
加 5 0 m m o l T r is 一H C I 缓冲液 , 据标准曲线光
密度对应的浓度配成 1一 Z m g / m L 浓度 的膜
蛋白溶液 , 分 装于一 次性塑料管 中 , 放 一 4 0
C冰箱保存 ,整个过程在 O ` C 一 4 C下操作 。
2
.
4 肝细胞膜制备川 : 将小鼠断头处死 ,立即
取出肝脏 , 取部分称重 , 加人 4 倍体积冷生理
盐水匀浆 , 3 0 0 0 r /m i n 离心 I O m i n ,弃沉淀 ,
得去核上清 , 将此上清 l x 1o ` r /m i n 离心 1 0
m in 得去膜上清 ,沉淀为破碎细胞膜和线粒体
等 。 用 1 0 m m o l / L T r i s 缓冲液 ( p H = 7 . 4 )洗
2 次 , I X 10 4 r /m i n 离心 1 0 m i n 弃上清 , 沉淀
用 T ir s 缓 冲液悬浮 ,供膜 M D A 测定 。
2
.
5 指标 测定 : M D A 测定 采用 T B A 比色
法 , 蛋白测定采用双缩脉法 , 测定步骤按试剂
盒说明程序进行 。
2
.
6 统计学处理 : 各组数据 以 牙士 s 表示 , 采
用方差分析 q 检验 。
3 实验结果
与衰老模型组 比较 ,天门冬氯仿 、 乙醇和
水提液均可显著降低小 鼠肝细胞膜 M D A 的
含量 (尸 < 0 . 0 1 ) , 尤 以 水提液抑制 脂质过氧
化作用最佳 ; 天门冬脂溶性的氯仿提取液可
显著降低小 鼠红 细胞膜 M D A 的含量 ( P <
0
.
0 1 )
, 而醇提液和水提液不能降低红细胞膜
M D A 的含量 ,见表 1 。
4 讨论
机体衰老是一个复杂的过程 , 自 1 9 5 6 年
H a r m a n 提 出衰老 的 自由基学说 以 来 , 众多
的实验表明自由基及其诱导的脂质过氧化反
应是引起生物衰老的重要原因 。 脂质过氧化
.
7 6 4
·
表 1 对小暇红细胞膜 、肝细胞膜 M D A 含一的影 晌
MDA ( n m o l z饭 9 p r o r . )
r g /kg ) 红细胞膜 肝细胞膜
正常对照
衰老模型
天门冬盆仿提取液
天门冬乙醉提取液
天门冬水提液
{:
::
31
.
5 2士 3. 32
4 1
,
83土4 . 51△△
32
.
27士3 . 24 奋 .
39
.
09士5 . 09 份 .
40
.
67士4 . 57二
29
.
84士2 . 81
37
.
15土 2 . 88之公么
29
.
23士 4 . 46 . 香
29
.
14士4 . 09 份 .
24
.
44士3 . 80 哥 .
与正常对照组 比较 : △△尸 < 。 . 01
与衰老模型组 比较 : “ 尸 < 0 . 01
反应的最终产物 M D A 含量可代表机体
受 自由基损 伤的程度 , 大量研 究表 明 M D A
含量随增龄而增加 , 到 目前为止尚未 见到相
反的报道 , 所以用它作衰老指标是可靠的 。
许多学者认为细胞衰老是整体衰老的基
础 , 而细 胞水 平 的改变 主要 表现 在细胞 膜
上闭 , 因细胞膜系统上富含多不饱和脂肪酸 ,
使得细胞膜成为 自由基进攻的主要靶部位 。
自由基进攻细胞膜 , 诱发膜上不饱和脂肪酸
过氧化反应 , 引起膜脂间或脂质 与膜蛋白间
的交联 , 导致膜的结构和功能发生改变 。
祖国 医学应用补益药 ,从不 同方面增强
机体抗病机能 , 促进 体内生理生化反应向有
利于健康的方向发展 , 对脂质过氧化反应 的
抑制 就 是保 护机 体 免 于受 伤 害 的 方式 之
一 5[] 。 天门冬抗衰老机制可能是多方面的 ,对
脂质过氧化反应的抑制无疑是其抗衰老的机
制之一 。 天门冬不同溶媒提取液对肝细胞膜
M D A 影 响的差异可能是 由于抗氧化成分在
不 同溶媒中的溶 出率不同所致 ,其醉提液和
水提液可显著降低肝细胞膜 M D A 含量而对
红细胞膜无显著影响 , 可能是由于不 同的组
织其药物的生化机能不 同 , 对药物作用的反
应也不同 , 即药物作用的选择性所致闭 。
参 考 文 献
1 减望堂主编 . 传 统益 寿梢要 . 北 京 ; 世 界图书 出版公
司 , 1 9 9 2 : 2 6 2
2 龚国清 , 等 . 中国药科大学 学报 , 1 9 91 , 2 : 10 3
3 唐筑灵 , 等 . 老年学杂志 , 19 92 , 12 : 3 56
4 刘俊达 . 老年学杂志 , 19 9 2 , 12 : 3 7 7
5 裘 月 , 等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 6 ; 3 1 : 8 3
6 杨藻雇主编 . 医 用药理学 . 第 3 版 . 北京 : 人 民卫生 出
版社 , 1 9 9 7 : 4 9
( 1 9 9 9
一
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0 4 收稿 )