全 文 ：娱蚁药材中毒性成分组织胺的含量测定
湖北省中医药研究院 (武汉 43 0 0 7) 4方 红 介 邓 芳
摘 要 采用薄层色谱扫描法对中药少棘娱蛤s o cl oPe n dr au s bs 户i ni Pe s mu ti l as nL
.
Ko ch 和地方习
用品多棘娱蚁 5.mui l t de ns Ne w po r t .、 墨江娱蛤 5.m qji 口 , g i c a Z h a n g e t C h i 药材中的毒性成分组
织胺进行了薄层色谱分析和含量测定 ,方法简便 ,准确 , 回收率为 96 . 2 % 。 含量测定结果表明 ,各种
娱蛤药材中均存在毒性成分组织胺 ;组织胺主要存在于躯干部 ; 不同产地的少棘娱蛤组织胺含量
差异较大 ;红足少棘娱蛤和多棘娱蛤组织胺含量较高 。 该研究为中药娱蛤的毒性和安全用药提供
了科学依据 。
关键词 组织胺 少棘娱蛤 多棘蟆蛤 墨江蟆蚁
中药娱蛤即少棘娱蚁 cs ol oP en d ar su b -
sP i
n iP e , m u t i l a n s L
.
K o e h 的 干燥虫体 , 辛
温 ,有毒 。 娱蛤毒主要来自头部颗肢分泌物 ,
吴刚等曾对活体少棘娱蚁毒的化学组成和生
物活性进行研究 , 报道娱蚁毒主要 由蛋 白质
组成 ,含量为 8 6% ,含有 S E R 、 P R O 、 A R G 三
种游离氨基酸和多种微量元素 , 具有多种酶
活性 〔` , 。 G o m e s 从哈氏娱蚁 S c o l口P e n d ar d i -
h a a in B ar n dt 的颗毒液中分离出一种酸性热
不稳定的蛋 白质毒素 (t o ix n 一 S )和组胺样物
质 〔“ , 3〕 。 中药娱蚁毒除颗肢分泌物外是否还存
在其它毒性成分是研究娱蛤毒性所关注的问
题 。 娱蛤药材中是否存在组胺毒性成分还无
实验报道 ,为研究娱蛤的毒性 ,对少棘娱蛤药
材以及多棘娱蛤 、 墨江娱蛤 (地方习用品 )药
材的组织胺进行了薄层色谱分析 , 并用薄层
扫描法测定了各种药用娱蛤的组织胺含量 ,
为进一步研究娱蛤的毒性和安全用药提供科
学依据 。
1 实验方法与结果
1
.
1 仪器与试药 : 日本岛津 C S一 9 30 双波长
薄层扫描仪 ;定量毛细管 ( U S A ) ;硅胶 G (青
岛海洋化工厂 ) ;磷酸组胺对照 品 ( 中国药品
生物制品检定所 ) ; 实验用试剂均为分析纯 ;
各种娱蚁药材样 品分别于 60 ℃干燥 ,研成细
粉备用 。
1
.
2 测定方法
1
.
2
.
1 对照品溶液配制 : 取磷酸组胺适量 ,
精密称定 ,乘以 0 . 6 32 , 即换算出磷酸组胺中
组胺的含量川 , 用水溶解定容 , 配制成 0 . 1
m g /m L 组织胺对照品溶液 。
1
.
2
.
2 样品溶液制备 :取娱蛤粉末约 0 . 5 9 ,
精 密称定 (同时取适量测定水分 ) , 置 25 m L
具塞维形瓶中 ,精密加 20 m L 30 % 乙醇 ,超声
提取 3 0 m in ,静置 1 0 m i n ,将提取液离心 1 0
m i n ( 3 0 0 o r /m i n )
, 精密吸取上清液 2 0 m L ,
水浴上挥干 ,精密加 4 m L 水溶解定容 。
1
.
2
.
3 薄层层析条件 : 2 c0 m x 20 c m 硅胶 G
薄层板于 10 5℃活化 l h , 置干燥器中备用 。
以正丁醇一丙酮一氨水 (4 : 1 : 0 . 4) 为展开剂 ;
展距 8 C m ;试剂 I 〔5〕 (2 o %无水碳酸钠溶液 )
与试剂 I 〔 5 , (5 m L I%对氨基苯磺酸的 1 : 9
盐酸溶液 ,逐滴加入 1 m L Z%亚硝酸钠溶液 ,
临用前放置 3 m in) 临用前按 2 : 1 混合 , 喷
雾显色 ,组织胺呈桔红色斑点 , fR 值 0 . 58 。
1
.
2
.
4 薄层色谱扫描条件 : 测定波 长 5 10
n m
, 参比波 长 6 2 0 n m ;锯齿扫描 ; S x = 3 , △Y
一。 . 2 m m 。 组织胺斑点光谱扫描图及薄层色
谱图见图 1 、 2 。
丙犷一系万一污丽一丽了一不淤一一波长 久( n m )
组织胺斑点光谱图
0,l40图
·
A dd
r e s s : F a n g H o n g
,
H u b e i I n s t i t u t e o f T r a d it io n a l C h i n e s e M
e
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e i n e a n d P h a r m a e y
,
W
u h a n
△ 本文为国家中医管理 局八五科技攻关课题 “ 常用 中药材品种整理和质量研究娱蛤专题 ” 的部分研究内容 。
.
4 7 2
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…-一 ’ 口{ 户 。 9 9 。 。 。 。最i邀昌自昌·
t Z
,
4 5 6 7 8
对照品溶液 0 . 5 和 4 拌L 分别点于同一块 20
c
m 又 2 0 c m 硅胶 G 板上 ,层析展开 , 晾干 ,显
色 ,薄层扫描 ,用外标二点法计算含量 , 结果
见表 2 , 表 3 , 表 4 。
表 3 不同产地少棘娱蚁组织胺含里测定结果
序号
图 2 娱蚁组织胺薄层图
1
、
2
一少棘娱蛤 3 、 4一多棘娱蛤
5
、
6
一墨江娱蛤 7 、 8一组织胺
1
.
3 组织胺斑点稳定性试验 :取 0 . 1 “ g /m L
组织胺对照品溶液 4 拜L 点样 ,展开 , 显色后
每隔 l h 测定一次组织胺斑点峰 亩「积 , 结果
见表 1 。在 。 , 5一 5 , 。 h 内斑点峰面积较稳定 。
表 1 斑点稳定性试验结果
瞬耘漪捻糕潇 ,篇撬圳
1
.
4 标准曲线的绘制 : 分别取 。 . 1 m g /。 L
组织胺对照品溶液 0 . 5 、 i 、 2 、 4 、 5 、 s 拌xJ , 点于
同一块 20 c m x 20 c m 硅胶 G 板上 ,按以上
薄层层析条件层析 ,显色 ,扫描 。 以组织胺点
样量为横坐标 ,相应峰面积为纵坐标 ,绘制标
准曲线 , 其回归方程 为 Y 一 1 2 6 0 0l X + 1 8 。。
( r ~ 0
.
9 9 8 5 )
, 线性范围为 0 . 0 5一 0 . 8 拼g 。
1
.
5 回收试验 : 精密称取已知组织胺浓度的
少棘娱蛤细粉末约 0 . 5 9 , 一式 5 份 ,分别精
密加入组织胺标准溶液 ( 82 陀 /m l , )2 m L 。按
样品溶液制备项下操作 , 按以上 实验条件层
析 ,显色 ,扫描 , 用外标二点法计算 , 回收率结
果为 9 6 . 2% , R S D ~ 2 . 2% ( n 一 s ) 。
表 2 不同种娱蚁组织胺含且测定结果
产地 一与采捉时间
湖北宜昌 1 9 93 年
湖北京山 1 9 95 年
湖北应 lIJ 一, 9 3 年
湖北京山 1 9 9 4 年秋
湖北京山 1 9 9 4 年秋
浙江岱 ilJ 2 9 9 5 年
浙江岱山 1 9 9 5 年
组织胺含量 拌g / g “
4 8 8
.
2
1 0 6 8
.
2
3 7 9 5
2 8 6
.
2
9 4
.
4
2 4 3
.
4
1 9 0
。
5
备注
红足
红足
黄足
黄足
黄足
红足
黄足
种名
少棘娱蛤
多棘娱蛤
墨江娱蛤
产地及采捉时间
湖北应 111 1 9 9 3年
湖北京山 1 9 9 5年
广西都安 1 9 9 3年
广西都安 1 9 9 5年
云南墨江 1 9 9 3年
组织胺含量 拜g / g ’
3 7 9
.
5
9 6
.
0
2 3 2
.
0
5 0 2
.
0
1 7 0 4
` 为 3~ 6次测定平均值 , 下同
1
.
6 样 品测定 : 取 样品试液 10 拜L , 组织胺
表 4 少棘娱蚁不同部位组织胺含量
一瑕才少墨州
2 讨论
2
.
1 本实验结果证实少棘娱蚁体内含有毒
性成分组织胺 , 其含量为 94 一 1 0 6 8 绍 / g ,各
地采捉 的少棘娱蛤组织胺含量差异很大 ,红
足少棘娱蛤较黄足的高 。 其它种的娱蛤—多棘蟆蚁 、 墨江蝮蛤也均含有组织胺 , 其中多
棘娱蛤的含觉较高 。 该实验结果为进一步研
究娱蛤毒性和安全用药提供了科学依据 。
2
.
2 少棘娱蛤采捉时多将毒颗肢摘除 ,但也
有不摘除者 。 毒颗肢完整的头部与躯干部组
织胺含量 比较实验结果表明两部位均存在组
织胺 ,且躯干部较头部含量高约 7 倍 ,说明组
织胺存在部位主要在躯干部 。
2
.
3 娱蛤粉末的提取液经离心除蛋白和残
渣后 ,挥干溶剂 ,仍有少许絮状蛋白质析出 ,
用水溶解定容时 ,供试液呈乳浊状 , 薄层层析
中供试液中的蛋白质成分大多滞留在原点和
R f 值 0 . 1一 0 . 2 的位置 , 不影响组织胺的检
出 。
参 考 文 献
l 吴 刚 , 等 . 生物化学杂志 , 1 9 9 2 , 8 ( 2 ) : 1 4 4
2 G o m e s A
, e t a l
.
In d i a n J E
x P B i o l
,
19 8 3
,
2 1 ( 4 )
:
2 0 3
3 G o m e s A
, e t a l
.
In d i a n J M e d R e s
,
1 9 8 2
,
7 6 ( D e e
.
)
:
88 8
4 王 瑛 , 等 . 药物分析杂志 , 1 9 9 4 , 1 4 ( 5 ) : 5 8
5 胡乃 钊主编 . 新编毒物分析化学 . 北京 : 群众出版社 ,
19 8 6
.
5 5 7
( 1 9 9 6
一
1 0
一
0 3 收稿 )
《中草药 》 1 9 9 7 年第 2 5 卷第 8 期 . 4 7 3 .