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eo x nt r e at ew i dt h 50 %m
et h ao n lw it ht h e ai do fu lt r aso ni ew ae v
.
S
am p le sfr o mf i e v dif fr e e nt mu n af e at u r r e s
w er e det r em i ne d
.
Th eirg e ni po si de eo nt e nt sr v ai ef dr o m0
.
3 56 mg/ T
ab
,
0
.
4 6 7 m g / T
a
b
,
0
.
9 5 7 m g / T
a
b
,
2
.
9 7 5 m g / T
a
b
a n d s
·
3 8 7 m g /T
a b
·
T h e a v e r a g e r e e o v e r y w a s 9 7
.
4 %
a n
d R S D = 1
.
6 1 %
.
K e y w o
r d s Q i
n g h u o Z h im a i t a b l e t s (Q Z M ) g
e n ip o s i d
e
R P
一
H P L C
用均匀设计法优选侧柏叶中棚皮昔的提取纯化工艺
中国药科大学 (南京 2 10 0 0 9) 曾 诊 沐 易登录 吴洪元 黄炳生 ` “
摘 要 用均匀设计法优选 了侧柏 叶中棚皮昔 的提取纯化 工艺 。 结 果表 明 : 乙醇浓 度 、 用 量 、 浸 泡
时 间以及 水的用量 、 萃取溶剂体积对棚皮昔 得率都有直接 的影 响 ;而 氛化钠及 p H 值对得率影 响不
大 。
关键 词 均匀设计法 侧柏 叶 懈皮昔 双波长薄 层扫描法
侧柏叶性 味苦 、 涩 , 微寒 , 有凉血止血作
用 。 据报道侧柏叶中的止血活性成分是棚皮
昔 〔` 〕 。 我们用均匀设计法研究懈皮昔提取纯
化工艺 〔2 , 3 〕 。 采用双波长薄层扫描法来测定侧
柏叶中各设计方案 中懈皮昔的含量 。 该研究
将使均匀设计法在对优化提取有效成分得率
上提供了一些参考数据 。
1 实验部分
1
.
1 药材 : 侧柏叶 1 9 97 年 4 月及 1 9 9 7 年 5
月分别采于中国药科大学校 园和南京市中山
陵 , 经 鉴 定 为 侧 柏 p l a t夕 c l a d u s o r i e n t a l i s
( L
.
) F ar
n c 。 的干燥枝梢及叶 。
懈皮 昔 q u e cr it ir n 对 照品 : 华西 医 科 大
学提供 。
其余试剂均为分析纯 。
1
.
2 仪器 : 岛津 C S 一 9 0 0 0 型 双波 长薄层 扫
描仪 , 十万 分之 一分 析天 平 ( R ZO OD , S a r t o -
r i u s r e s e a r e h )
,
U V
一 亚型三用紫外分析仪 (北
京凯星电讯设备研究所 ) 。
2 实验方法
2
.
1 优选提取纯化工艺
2
.
1
.
1 提取方法的选择 : 比较了水提与醇提
取侧柏叶中的懈皮昔的含量 , 以醇提含量高 。
又在生药量 、 醇的浓度 、 醇的体积及提取后的
纯化步骤完全相 同情 况下 , 比较了热回 流提
取法 、 索氏提取法 、 渗流法 、 室温浸渍法对有
效成分 的影响 。 实验结果 以渗辘法提取棚皮
昔含量较高 (表 1 ) , 且杂质少 , 确定 以渗流法
作为均匀设计的提取方法 。
表 1 不同提取方法对侧柏叶 中
彬皮昔含且的影响 (n 一 3)
提取方法 索氏提取 渗流 室温浸渍
榭皮昔 (% )
热回流
0 13 59 0
.
1 28 7 0
.
14 80 0
.
1 15 2
水提取
0
.
0 75 83
2
.
1
.
2 优选提取纯化工艺 : 经试验选用渗渡
法作 为均匀设计提取方法 , 以懈皮昔为检测
指标 , 设计侧柏叶的提取纯化工艺 。首先以乙
醇浓度 、 用量 、 浸 泡时 间考察侧柏 叶提取 工
艺 , 根据所得 的最优条件 ,选择 加水量 、 加氯
化钠 量 、 调 p H 值 及萃取溶剂体积 4 个 因素
再次运用均匀设计探讨这些 因素对纯化工艺
的影响 , 提取纯化 的因素水 平表见 表 2 。 U S
( 5
4
)试验及结果见表 3 。
2
.
2 侧柏叶中懈皮昔的测定
2
.
2
.
1 标 准 曲线 的绘制 : 精密称取棚 皮昔
1
·
8 6 m g
, 配成 1 · 86 m g /m L 的醇液 ,精密吸
取 1 . 0 、 2 . 0 、 4 . 0 、 5 . 0 、 6 . 0 、 8 . 0 、 1 0 . 0 拜L 点于
薄 层板 上 , 以 乙 酸乙 醋 一丙酮 一甲酸一水 ( 80 :
1 5 , 5 , 5 )为展开剂 , 展开 , 晾干 , 紫外灯 2 54
A d d e r s s
:
Z e n g Q
u a n , C h in a P h a r m a e e u t i e a l U n i v e r s i t y
,
N a n ji n g
, 二 本校 97 届毕业生
《中草药 》 1 9 9 8 年第 2 9 卷第 1 2 期 · 8 0 5 ·
n m下 定 位 , 薄 层 扫 描 仪 上 扫 描 , 入S 一 3 35
n m 林R = 2 0 0 n m , 得回归方程 :
Y = 4 6 0 3
.
1 9 2 4 7 7 X + 1 0 3 4 5
.
3 9 3 9 7
,
X
为点样量 年g ) , Y 为吸收度 , r 一 .0 9 9 7 9 ,懈皮
昔在 1 . 8 6 拜g 至 1 4 . 8 8 拜g 呈线性 。
表 2 侧柏叶 中根皮昔的提取纯化 因素水平
据 随行对照品量采用外标二点法计算含量 ,
结果见表 3 、 图 1 。
0 0 0 0 0 万
绿ù黄一0八乙000000只à00
因素
0 0
贾
0 0 货
OOOOOOO
s : 凡 I 乞 3 名 5
lS
一 2 拜 L 斟皮昔 5 2一 5 拜 L 懈皮昔 1~ 5一不 同浓度醇提液
图 1 侧柏叶不 同实验薄层图
数据处理 : 将实验结果进行多元线性 回
归 统 计 处 理 , 回 归 方 程 Y 一 0 . 1 4 1 0 4 +
0
.
0 0 0 3 5 2X
I
+ 0
.
0 O0 2 X
: 一 0 . 0 0 0 1 9X 3 , 方 差
分析见表 4 。
表 4 方差分析
变差来源 平方和 自由度 均方 F
回归 0 . 0 0 0 7 2 9 3 0 . 0 0 0 2 4 3 1 2 1 . 5
剩余 0 . 0 0 0 0 0 0 2 1 0 . 0 0 0 0 0 5
总和 0 . 0 0 0 7 3 1 4
因为 F 一 1 2 1 . 5 > F Z犷1 ) 一 53 . 6 , 回归方
程在 a 一 0 . 10 的水平上有意义 。 在所考察的
实验条件范围内 , 使懈皮昔含量最高的实验
条件 为乙醇浓度是 70 % , 浸泡时 间是 28 h ,
乙 醇 用 量 为 80 m I J 。 含 量 最 优 值 为 Y -
0
.
1 5 6 0 4%
。
上述回 归方程有意义 , 但在 a 一 0 . 0 5 水
平上不显著 , 因此进行多元非线性回归 , 得回
归 方 程 Y = 一 0 . 4 1 9 1 5 + 0 . 0 1 3 6 7 2 X I +
0
.
OO 2 5 O ZX
:
+ 0
.
OO 1 0 9 3X
: 一 6 . g x 1 o一 S X {一
4
.
8 X 1 0
一 S
X ; + 1
.
4 9 X 1 0一 S X ; 一 4 . 6 X 1 0 一 5
X
,
X
: ,通过用求多元 函数的最大值的方法得
在所考察的实验条件范围内 , 使懈皮昔含量
最高的实验条件为乙醇浓度是 73 % , 浸泡时
间 2 6 h , 乙醇用量 7 m L 。 含量最优值为 Y -
O
·
1 5 8 %
。
2
.
2
.
3 纯 化样 品液 的制备 、 测定 与数据处
理 : 精密称取侧柏叶粗粉 10 9 ,按已优化的提
9048160603
2970肠140528沁邓1204023
6 0 7 2
30即1012灿轮1028。硼3
试验
提取
纯化
乙醇浓度 (% )
浸泡时间 ( h)
乙醇用量 ( m l )
加水体积 ( m L )
加 N a CI 量 (g ) `
p H 值“
萃取溶剂体积 (m L )
` 加氯化钠的量 , 以加水的体积来计算 ’ “ 不调的 pH 值约为 4 . 5
表 3 侧柏叶中懈皮普的提取纯化 U S ( 5 4 )
试验设计及 结果 (n 一 3)
试验 因素 1 2 3 4 5 优化条件
提取 乙醇浓度(%) 10 30 50 70 90 7 3
浸泡时间 (h ) 20 36 12 28 今8 26
乙醇用量 ( m L ) 140 120 100 80 160 77
栅皮昔含量 (写) 。. 12 0 . 14 0 . 14 0 . 16 0 . 16 预测值 实测值
0
.
158 0
,
152
纯化 加水体积( m L ) 20 30 40 50 60 20
加 N a CI(g ) 2 · 4 8 · 4 0 10 21 · 6 不加
pH 值 3 不调 2 . 5 3 . 85 2 不同
萃取溶剂( m L ) 72 60 42 30 90 30
根皮昔含量 (% ) 0 . 2 0 . 19 0 . 19 0 . 19 0 . 1 预测值 实测值
0
.
252 0
.
224
薄层扫描其他方法学考察 : 精密度 R S D
为 2 . 7 % ( n 一 5 ) , 稳 定 性 R S D 一 2 . 5% , 在
1
.
s h 内 稳 定 , 加 样 回 收 平 均 回 收 率 为
9 6
.
3 3 %
,
R S D = 1
.
2%
2
.
2
.
2 提取样 品液制备与测定 : 制 备 : 精称
侧柏叶粗粉 10 9 , 按表 3 的提取设计方案渗
流 , 回收醇 至干 , 加水 8 0 m L 溶 解 , 过 滤 , 以
乙酸乙酷萃取 6 次 ,每次 10 m L , 萃取液用少
量水洗涤 , 水洗液用少量乙酸 乙醋萃取 ,合并
萃取液 , 加少量无水硫酸钠脱水 , 过滤 ,无水
硫酸钠用少量 乙酸乙酷洗涤 , 回收至干 , 用乙
醇定容 1 0 m L ( n = 3 ) 。
测定 : 精密 吸取各试验设计 中样 品液 4
拼L 分别点于薄层板上 , 同时精密吸棚皮昔标
准液 2 . 5 拼L 分别点于 同一薄层板上 ,按标准
曲线项下展开 , 紫外灯下定位 , 扫描测定 , 根
.
8 0 6
.
取工艺 即用3 7 %乙醇 , 浸泡 26 h , 乙醇用量
7 m L 渗流提 取 , 回收 乙 醇至干 , 按 表 3 U 5
( 5
4
)试 验表纯化工艺进行实验 , 其步骤及样
品液测定按提取侧柏叶中榭皮昔样品液制备
项下操作 。
数据处理 : 将 实验结 果进行 多元线性 回
归 , 得 回 归 方程 Y 一 。 . 3 5 8 8 一 o . o o 2 5 7 X I +
0
.
0 0 0 4 3 2X
: 一 0 . OO 5 3 3X 3一 0 . 0 0 1 0 5X 4 , 通过
方差分析知 回归方程无显著意义 。 再进行逐
步 回归 (去掉氯化钠 因素 ) 得回归方程为 Y -
0
.
3 4 8 9 8 1 一 0 . OO2 3 8X I 一 0 . 0 0 4 9 5 X 3 一
0
.
0 0 0 9 7 X
; , 方 差分析 为 F = 9 . 5 5 < F Z、{1 ) =
53
.
6
,故 回归方程仍无显著意义 。 通过计算标
准 回 归系数知 p H 值对 含量影 响不大 , 第 3
次 回 归 , 得 回 归 方 程 Y 一 0 . 3 2 3 5 4 1 一
O
·
OO 2 2 3 6 X
I一 0 . 0 0 0 8 9 6X 4 。 方差分析知 F =
2 2
.
59 > 裂龚 )一 1 9 , 回归方程有显著意义 。
回归方程知 , 在所考察的实验条件内 ,减
少用水量和减少萃取溶剂的用量能使懈皮昔
含量增加 。 若提取物加水 2 0 m L 溶解 , 用乙
酸 乙醋萃取 6 次 , 每次 s m L , 可使懈皮昔含
量达到 0 . 2 5 1 9% 。
3 讨论
3
.
1 经二次均匀设计共 10 次实验 , 找到 了
从 侧柏叶 中提 取纯化懈 皮昔 的最 佳试验条
件 ,并发现在纯化工艺中 ,氯化钠及 p H 值对
试验结果影响不大 , 此进一步证明均匀设计
法可 以经方程分析各 因素对试验影 响 , 而删
去不重要 因素 。
3
.
2 实验结果表明 ,从侧柏叶提取纯化榭皮
昔的工艺为 73 % 乙 醇渗挽提取 , 渗流前浸泡
2 6 h
, 乙醇用量为 7 m L , 回收醇 至干 , 加水
2 0 m L
, 用乙酸 乙醋萃取 6 次 ,每次 5 m L , 可
达到含量的最大值 。 此结果进一步证明了均
匀设计法在中草药有效成分提取分离上的应
用 , 可用此方法预测提取及初步分离方法 。
参 考 文 献
1 孙文基 , 等 , 药学学报 , 1 9 8 7 ; 2 2 ( 5 ) : 3 8 5
2 王 鹏 , 等 . 沈 阳药学院学报 , 1 9 8 8 ; 4 1 ( 4 ) : 2 9 7
3 李卫民 , 等 . 中药材 , 1 9 9 3 ; 1 6 ( 6 ) : 3 0
( 1 9 9 8
一
0 4
一
0 8 收稿 )
O P t i m i z i n g t h e E x t r a c t i o n a n d P u r i f i e a t i o n P r o e e s s e s o f Q u e r e i t r i n f r o m L e a v e s o f
C h i n e s e A r b o r v i t a e ( lP a yt c l a d u s o ir e n t a l i s ) b y H o m o g e n e o u s D e s i g n
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Y i D e n g l u
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( C h i n a P h a r m a e e u t ie a l U n iv e r s i t y
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a n ii n g 2 1 0 0 0 9 )
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15 ( L
.
) F r a n e o w e r e e x p l o r e d b y t h e u s e o f h o m o g e n e o u s d e s i g n
.
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.
K e y w o
r d s P l a t夕 c l a d u s o r i e n t a li s q u e r e i t r i n T L C s e a n n in g h o m o g e n e o u s d e s i g n
1 9 9 9 年 《中国药学文摘 》刊物及光盘征订启事
《 中国药学文献 》是我 国唯一 的药 学科技文献综合 性大型 检索刊物 。 共设十二个栏 目 : 药学理论 、 一般性
药学综述 和历史 文献 , 生药学和 中药材 , 药物化学 , 药物生产 技术 , 药剂学和制剂技术 , 药理学和毒理学 , 生物
药剂学 , 药物分析 , 临床试验与药物评价 , 药品生产管理和质量 管理 , 制药设备和 工厂设计 , 药品介绍与药 品综
述 。 并附有主题词和外文药名两套索引 ;每篇 文献 同时还标有 《中国图书资料分类 法 》的分类号 。 8 5 、 9 5 年被 国
家科委评为科 技文献检索 刊物 一等奖 ; 96 年被评为国家优秀科技信息成果二等奖 。
《 中国药 学文献数 据库 》是国 内唯一的 中西药 学文献大 型数据库 。 该库 自 1 9 8 1 年今 已拥有 近 20 万条数
据 。 提供 2 万多条数据 , 并提供微机检索软件和光盘 。 本库 84 年通过部级 鉴定 , 1 9 8 5 年被评为 国家科技进 步
三等奖 。
《中草药 》 1 9 9 8 年第 29 卷第 12 期 . 8 0 7 ,