全 文 ：红 石 耳 多 糖 的 研 究
西安医科大学药学系
陕西教育学院生物系
丁 东宁 靳菊情 张鸣喜”
阎宝琦
摘要 红石耳用热水提取 、 乙醇沉淀 , 精制得 多糖 , 经 一 劝 柱 层析 证 明 为
均 一性 多 糖 。 糖的含量为 , 气相色谱检测由葡萄糖 、 甘露糖 。 葡萄糖
醛酸 组成 , 克分子比为 , 平均分子量为 峨 。 经高碘酸氧 化 , 降
解 , 红外光谱分析 , 多糖主要由 , , 试键聚合而戍的酸性杂多 糖 。
关键词 地衣 红石耳 多糖 。
红石耳 艺 夕 ￡。 是石耳科石耳属 自 一 下 也衣植物〔‘〕, 在 秦
巴山区亦有分布 , 陕西太 白县 , 眉县等地民间作为草药治病 己有很长历史 。 该 药 性 淡 、 微
苦 、 平 , 具有健胃 、 消食 、 刊水、 消胀 、 驱虫等功效 , 主治消化不 良 、 腹疼、 痢疾 、 小儿疮
积 、 妇女 白带异常等症 。 据报道〔 , 〕含有二聚体经基蕙醒化合物 , 三苔色酸 , 黑茶渍素 , 苔
色酸 , 松萝峻等化合物 。 研究衷明地衣多糖终仃强的坑癌活性 , 能增强机体的免疫能力 , 为
开发高效低毒副 作喇的抗癌新药 , 我们对红石耳 多糖 的化学成分进行了研究 。
材料 、 试剂和仪器
材料 工一。 购于陕西眉县 愧芽药材公司 , 经鉴定确认为红石耳 碗 ￡。。八。
宕儿仑 。
试剂 标准葡聚糖 。。。、 。。、 。、 。、 。
一 一 , 层析微晶纤维素 上海试剂 四厂 葡萄
糖 、 甘露糖 、 半乳糖 、 阿拉伯糖 、 葡萄糖醛酸均为分析纯 肌醇六 乙酸 酷 自制气相 色 谱
检测为单一峰 。 , 卵 西安医科大学刘次伯教授提供 。
仪器 日本岛津 一 气相色谱仪 一 数据处理机 红外光谱仪
自动指示旋光仪 卜分光光变计 仁海第三分析仪器 一 一型旋转蒸发器 上海玻
璃二厂 计算机 美国国际通 川机器厂 。
方法与结果
多糖的提取与纯化 称取风干粉碎的红石耳 , 川三抓甲烷抽提除去色素 , 将
药渣风千放入烧杯中 , 加蒸馏水机 诫搅拌 加热 , 温度控制在 ℃左右 , 提取 , 共 提
取 次 , 合并提取液 , 用旋转蒸发器浓缩至 左右 , 加乙醇沉淀 , 静置 , 抽 滤 , 用
无水乙醇洗 次 , 干燥 , 得 粗多糖 丁 。 将所得粗多糖再 , 」丙 喇抽提 , 进一步除去色
素。 取 用蒸馏水一乙 醇 重结品。 然后过 微品纤维素柱 门蒸馏水洗脱 。 浓缩洗脱 液 , 再
用乙醇沉淀 , 静置 , 抽滤 , 川无水乙醇洗 次 , 丙 阴洗 次 , 得 白色粉 末 状 多 糖
。
理化分析 多糖溶于水中 , 更易溶于碱性水溶液 中 , 不溶于三氧甲烷 , 乙 醇 等
有机溶剂 , 反应为阳性 , 荀三酮检测为阴性 , 碘一碘 化钾反应为阴性 , 元素分析 不
含氮 , 比旋光 度 〔 〕笼 。 , 一 , 水溶液 , 红外光谱
, , 一 ! ,
药学系 届毕业生
《中草药 》 年第 卷第 期 · ,
在 理 一 ’扫描有多糖的特征吸收 , 一 ’仃吸 ,父峰 , 说明含有 贰键 。
均一性测定 提取 精品 溶于 水中 , 上予先平衡好的 一
柱 , 用蒸馏水洗脱 , 每 收集一管 , 用硫酸酚法在 分光光度计上检 测 ,
结果为单一峰 , 说明 为均一性多糖 。
糖含量的测定 以葡萄糖为标准 , 用硫酸酚法测定标准曲线的回 归 方 程 二 一
, 相关系数 , 糖的含量为 。
组分的测定〔〕精密称取 多糖 , 于 安瓶瓶中 , 加lm ol/L 硫酸
3m l , 封 口在 10 ℃条件下水解6h 。 加碳酸钡 中和 , 过滤 , 水洗滤渣 , 将滤液浓缩至千 , 制成
糖猜乙酸醋的衍生物 , 进行气相色谱检测 。 色谱条件1.5% O V 一 17 玻璃填充柱(3n m x Zm ) ,
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一D M C S ) 5 0 0 一 10。目 , 气化室温度240℃ , 检测温变24 0℃ , 柱温190℃ ,
载气氮气 , 流速20 m l/ m in , 进样量 0. 5时 。 根据保留时间与标准糖对照定性 , 内标法定量 。
测定结果U M H 多糖由葡萄糖 , 甘露糖 , 葡萄糖醛酸聚合而成的酸性杂多糖 , 克 分 子 比 为
G le 一 M a n 一G l e A ( 4 5 , z : 9 ) 。
2
.
6 分 子量的测定〔5〕: 用凝胶过滤法测定多搪的分子量 。 将2.29 S eph adex G 一2 的 用 蒸
馏水溶胀72 h , 装拄 ( 1.5 x 400m ) 用 0.05 币ol / L 氯化钠溶液平衡 3d 。 然后将己知标准葡聚
糖 , T : 。。。、 T S 。。、 T 7 。、 T ‘。、 T , 。和兰色葡聚糖各5.om g , 分别相继上柱 , 用 o .05m o l广L 氯
化钠溶液洗脱 , 每3m l收集一管用硫酸一酚法测定洗脱体积V e , 兰色葡聚糖测 出柱外水体积
V 。 , 用V e/ V 。与 相 应 分子量的对数关系作图 , 得标准曲线。 称取U M H 4.gm g上柱 , 用 同
样的方法洗脱 , 洗脱体积为 26 .lm l , 由标准曲线求得U M H 多糖的平均分子量为40 x 104 。
2
.
7 高碘酸氧化与Sm ith降解〔“〕: 称取3 1.om g U M H 多糖 , 溶于 25m lo .osm o l/ L 高碘 酸
溶液中 , 放置暗处96 h氧化完全 。 用 0.0 9m ol / L N aO H 中和法 , 测得甲酸的放出 量 为 每
葡萄糖单位 0.97 m ol 。 用碘量法测得高碘酸钠的消耗 , 为每葡萄糖单位1.04 m ol 。 将氧化 完
全的U M H 多糖用硼氢化钠还原 , 加乙二醇透析24h , 将透析液浓缩至干 , 加 lm ol /L 硫酸 封
管水解sh , 用碳酸钡中和 , 滤液浓缩至糖稀状 。 进行纸层析鉴定 , 展开剂为乙酸乙醋一毗吮一
水 ( 10 : 4 : 3 ) , 显色剂为高碘酸钠一联苯胺 。 结果有丙三醇和赤鲜醇生成说明U M H 多糖
是由 ( 1 0 6 ) , ( 1 ” 4 ) 贰键聚合而成的杂多糖 。
3 细胞毒性的初步观察〔7〕
j月B rin e S h rim p ( 海暇 ) 致死性生物测定法 , 进行细胞毒性试验。 将B rin e Shrim P ·
卵在海水中培养48 h , 有幼虫浮动 , 生长正常 。 将U M H 多糖配 制 成浓 度 为 10 、 1 0 0 、 1 0 0 0
x 10
“ “ , 各取 5 m l , 每浓度组平行样 3 管 , 空白对照一组 。 分别加10 个幼虫 , 放置24h , 观 察
幼虫存活情况 , 计算出死亡百分率 , 用Fi n n ey C om p ut er 程序在IB M 计算机上算 出 U M H
多糖L C 。。> 1 0 0 0 , 说明U M H 多糖不具有细胞毒性 。
小结与讨论
4.1 红石耳经三 氧甲烷、丙酮相继脱色 , 用水一乙醇多次重结晶 ,通过微晶纤维素柱层析 , 所得
白色U M H 多糖为一组均一性多糖 , 由葡萄糖 、甘露糖 、葡萄糖醛酸组成 , 克分 子 比 为45 , 1 ’
9 , 通过a ( 1一 , 6 ) , ( 1 0 4 ) 贰键聚合成的酸性杂多糖 。平均分子量为 40 x l0 ‘ , 比 旋 光 度
4〔a〕嗯+ 33.3。 , 糖含量为90 .4 % 。 用B rin e s h rim p 生物测定U M H 多糖 不 具细胞毒性 。
4
.
2 在U M H 多糖的提取过程中 , 由于红石耳中含有较多的红色二聚体经墓葱酿等 有 色 物
( 下转第180页 )
葫 芦 茶 化 学 成 分 的 研 究 ( I )
广东医药学院 ( 广州 510224 ) 吕 华 冲 何蔚晰 杨其 孟 表惠忠.
豆科植物葫芦茶D eso od ivo triguetr。。(L . )
D C .药用全草 。 味苦涩 , 性凉 , 有清热解毒 , 消食
利湿 , 除烦止呕 , 杀虫防腐的功效〔1 , 幻 。 用于治疗
感冒发热 , 咽喉肿痛 , 肝炎 , 肾炎 ,肠炎以及菌痢 ,
妊娠呕吐等 。
前报〔3 〕曾报道从葫芦茶的脂溶性部位 分 得 木
栓酮 , 表木栓醇和豆留 醇 。 本 文报道从该植物的
水溶性提取物中新分得的2个结晶性成分经化 学 方
法及波谱分析鉴定为水杨酸 ( I )和原儿茶酸( l ) 。
均为首次从该属植品中分得 。 药理实验表明 , 原儿
茶酸具有较强的抗菌作用〔4〕, 而水杨酸通 常 被 用
作防腐剂和抗真菌剂 , 提示这2种或分 可能为 葫芦
茶杀虫防腐抑菌的活性成分 。
1 提取和分离
葫芦茶枝叶粗粉10k g , 用水煮提3次 , 过滤 ,
滤液浓缩至稠膏状 , 加人70 % 的乙醇 , 放置过夜。
离心 , 取上清液回收乙醇至无醇味; 依 次 用 石 油
醚、 氯仿 、 乙酸乙醋提取 , 浓缩后 , 分别得石油醚
部分 , 氯仿部分和乙酸乙醋部分 。
取乙酸乙醋部分 , 进行硅胶柱层析 , 以环己烷
一乙酸乙醋作洗脱剂 ( 洗脱剂中加入1写的甲酸) , 进
行梯度洗脱 , 韭经反复柱层析得晶 I和晶 亚。
2 鉴定
晶 I : 无色针状结晶 ( 氯仿 ) , m p 1 5 7 一 159
c , F e C I 反应阳性 , 示有酚经基; 紫外灯下 显 紫
参 考
1 全国中草药汇编编写组 . 全 国中草药汇编 。上册 .
北京: 人民卫主出版社 , l , 7 5 . 8 31
2 南京药学院 《中草药 》级 写组 . f{, 草药丫 . ,补册 .
南京 : 1一工苏 人民出版 住 , 1 9 7 6 . 4 6 7
色荧光。 u v 广 ao: 。 m : 9 8
. 9 ,
23
2
.
8
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I R 皓宾em 一 ’ ; 3 2 3 9 ( O H ) , 3 0 0 9 ~ 2 5 9 5 ( 叛 酸 中羚
基的伸缩振动 ) , 1 6 6 1 ( 形成分子内氢键的C = O )
1614 , 1 5 8 0 , 1 4 5 4
( 芳环 , 骨呆振动 ) , 2 4 遵s , 1 2 嫂s
( 酚经基 ) , 1 56 , 7 5 9 ( 芳环邻二取代 ) , 提示
结晶 I 为1 , 2 一二取代的芳香族化合物 。其 ‘ H N M R ,
M S
,
I R 及薄层层析与标准品水杨酸相同 , 鉴定为
水杨酸 。
晶1 : 白色片状结晶 ( 环 己 烷一乙酸乙醋 ) ,
m p i o s 一 Z 0 0 0 C 。 F e C I 。反应阳性 , 示有酚狂 基。
在硅胶T L C上展开后 , 置空气中斑点易氧化 , 氨
薰则呈黄色斑点。 u v 入二翼H nm : 253.6, 2 0 0 . 4 。
x R v您登二。m 一 , : 3 2 5 5 ( o H ) , 3 0 0 。一 25 0 0 ( 数
酸中独基的伸缩振动 ) , 1 6 7 5 ( 共辘 C 二 O )
1 6 1 5 , 1 6 0 0 , 1 5 3 0 , 1 4 6 7
( 芳环骨架振动 ) , 1 4 2 3 ,
1 2 2 6
( 酚经基 ) , 1 1 5 0 , 8 2 4 ( 芳环上邻二氢 ) , 5 5 7
( 芳环上孤立芳氢 ) , 表明结晶 I 为1 , 3 , 4 一三取
代的芳香化合物 , ‘ H N M R 各P P m (C D 。 C O C D : ) :
7
.
4 4 ( I H
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。
I R 及薄层层析与标谁
品原儿茶酸相同 , 鉴定为原儿茶酸。
文 献
3 杨其落 , 等 。 植物学报 , L g a g , 3 1 ( 2 ) : 1 2 .
4 南京药学院四季青科研组. 中草药通讯 , 1 9 71
(
3
)
:
3 3
(
1 9 0 3
一0 9 一 1 1 收稿 )
( 上接 第276页 )
质 , 经三氛 甲烷清除色素后所得 的粗多糖颜色较深 。 再经丙酮抽提后 , 经重结晶 , 过微晶纤
维素柱等处理 , 刁‘得到白色U M H 多糖 。 其抗癌洁
今 考 文
1 李世 全 , 等. 来巴山 大然约 泌志 . 西安 : 陕西科
学技术出版社 , 1 9 5 7 . 7 7 a
2 张振杰 , 等. 植物宇 通报 , 1 9 8 4 , l : 3 8
3 李 波 , 等 . ‘飞工兰几二、汤。 1 3 9 2 , 2 3 戈3 ) : 120
4 丁东宁 , 等. 酉北药学分 t 一 , 1 9 6 2 . 7 ( 3 、: 13
率本院93 履实习生
性与免疫活性正在研 究 中 , 另 行 报道 。
献
方积年 , 等. 生物化学与生物物理学报 , 1 9 8 4 ,
1 6 ( 3 )
:
2 2 2
丁东宁 , 等. 天然产 物研究与开发 , 1 9 9 2 , 4
(
4 )
:
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1 9 9 4
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《中草药 》1 9 9 5年弟26 售第 4 ;幻 ·
2 2 3
·