全 文 ：松果有效成分的研究


红松果多糖中酸性糖的含量测定
沈阳药科大学


 


大庆市第三人民医院
‘ 李好枝

郭铁军
吕永俊 梁 卉

摘要 用硫酸一咔哇比色法测定了红松果多糖中酸性糖的含量 , 并考察了浓硫酸与咔哇的用量及
反应温度 、 时间等因素对显色反应的影响 , 最大吸收波长


, 测得酸 性糖 在






卜




浓度范围内与吸收度呈线性关系


。




,



, 平均回收率为



沁
”


,


 为













, 最低检测浓度为



协



。
关健词 红松果多糖 硫酸一咔哇法
松果多糖的生理活性很强 , 近年发现 , 其抗菌、抗癌活性有种的差异 , 在前报〔
〕测定了
红松果多糖的总糖含量基础 上 , 对抗癌活性更强的红松尸‘洲


 。玄。邢活






 “
松果多糖测定了其总糖含量 。 研究发现 , 松果多糖的抗癌活性 随其酸性增强而增 强 〔
〕。 因
此 , 对其总糖中的酸性糖定量具有特殊意义 。 现对红松松塔 及其松子 壳中多糖各流份的酸
性糖含量进行了探讨 。 酸性糖的测定方法有硫酸一咔哇法〔”、
〕、 脱竣法〔“〕等 。 我们采用硫酸
一咔哩法测定 , 并对影响显色反应的各因素进行了考察 。

实验部分



仪器与试药


 一



塑紫外可见分光光度于

 一
 。, 型紫外可见分 光光度计 ,


一
 旋涡混合器 。
葡萄糖醛酸、 浓硫酸、 无水乙醇均为分析纯 , 咔哇


、 松果多糖
自制
。



试剂配制




咔噢一无水乙醇溶液
称取。

 咔哇加无水乙醇溶解并稀释至


 ,
摇匀 。
葡萄糖醛酸标准溶液
精密称取

 ℃千燥至恒重的葡萄糖醛酸




, 加水 溶解 并
稀释至



, 摇匀 , 成



协



的标准溶液 。



预试验及最大吸收波长的选择
精密称取

 ℃干燥恒重的葡萄糖醛酸


, 置



容量瓶中 , 用水稀释至刻度 , 摇匀
浓度为
。卜




。 精密量取溶液


至


具 塞试管
中 , 加入浓硫酸


, 用旋涡混合器混匀 , 于沸水浴中加热


 冷至室温后加入



咔噢
一无水乙醇溶液




, 混匀 , 再于沸水浴中加热


 , 冷至室温后定量转移至


容 量
瓶中 , 并加浓硫酸至刻度 。 以


水同上操作制得空白液 , 用
 一

紫外可见分光光 度 计
在







波长范围内扫描 , 确定最大吸收波长为



。



实验条件的选择
对吸收度有影响的因素有
浓硫酸用量 , 咔哇用量 , 加酸后沸 水 溶
时间 , 加咔噢后水温温度及时间 。





浓硫酸用量考察
精密量取葡萄糖醛酸溶液
浓度为
。卜






, 浓硫酸用 量为







, 加酸后沸水浴加热



, 加咔哇




, 再于沸水浴加热



, 测得吸收度 ,












,















 纽












,
























,






二本校



年
 期药分专业毕业生
《中草 药 》

年第
 卷第
期





如表
所示 。 加入


 浓硫酸时吸收度最大。
表
硫酸 、 咔睦用 , 测得的吸收度



硫酸 用量
 !
吸收度



。



。


。

。


。



。




。


。

 。



咔哇用量


吸收度



。



。
 。


。


。

。








咔哇用量考察
加入浓硫酸


, 其它条件同前 ,



咔哇一无水乙醉溶 液 用量 为



卜




, 测得 吸收度如表
, 加入。



咔哇一乙醇溶液时吸收度最大 。





加酸后沸水浴加热时间考察
浓硫酸


, 咔哩




, 其它条件同上 , 沸水浴 加
热时间
一


 , 吸收度测定结果如表
, 加热


 可使反应完全 , 吸收度最大 。





加咔哩后水浴温度考 察
浓硫 酸
裹
加吐后不同沸水浴时间测得


, 咔吐,



, 加酸后沸水浴



, 加 的吸收度
几

咔哇后水浴 ‘。

 , 温度范围为 “
一 ‘。
℃ , 忑幕忑尸了下厂瓜厂瓜尸下一丽一测得吸收度如表
,

℃
、
吸收度最大 , 但考 吸收度

, 。





 !










 ‘


 
虑沸水浴较易控制 , 故选 川

℃ 。 —表
加咔哇后不 同水浴沮度测褥的吸收度


水浴温度
。

吸收度






。 2 2 6 0 . 2 5 1 0 。 2 8 8 7 0。 3 3 6 0 。 3 6 4 9 0。 3 7 8 0 。 3 6 71 . 4 . 5 加咔哩后沸水浴加热时间的考察: 加咔陛后在沸水浴中加热 , 加热时间为5~ 20 m in其它条件同上 , 测得吸收度如表4 , 沸水浴加热10 m in 后 吸收度趋于稳定 。因此 , 选择最佳反应条件 为 : 浓 硫 酸sm l, 加酸后沸水浴加热 25m in , 加0.1 %咔哩 一 无水乙醇溶液o.Zm l, 加咔l坐后 沸 水浴加热 lom in 。1 . 5 标准曲线的制备 : 精密量取葡萄 糖 醛 表4 加咔哇后不同沸水浴时间测得的吸收度 ( A )时间 ( m in )吸收度 (A ) 10 15 20344 0 。 3 4 2 0 。 3 4 2 0 。 3 4 2酸标准溶液 0. 1、 0 . 2 、 0 . 3 、 0 . 4 、 0 . 5 、 0 . 6 、 o . 7 m l 置lom l具塞试管中 , 分别加水使 成
lm l , 再分别加入浓硫酸sm l , 置旋涡混合器」几混匀 , 于沸水浴加热25 m in , 取出后立 即 冷
至室温 , 加0. , % 咔哇一无水乙醇洛液 0.2 m l , 混匀 , 再于沸水浴中加热10 m in , 冷至室温 , 定量
转移至10 m l容量瓶中 , 加浓硫酸至刻度 , 摇匀 。 另取 lm l水同上操作制得空白液 , 在520n m 波
长处测定吸收 度 。 求得标准曲线的回归 勺程 为 : A = 。. 07 。:C + 0 . 0 0 14 2 9 ( r = 0 .9 9 0 9 ,
n = 7
)
。
1
.
6 回收率实 验: 川标准添加法 ( 以样品 1测得 的酸性多糖结果为本底值 ) , 按 “标 准 曲
线的制备 ” 项下操作 , 测得 回收率为9 % , R S D 为 1.3 % ( n = 6 ) 。
1
.
7 稳定性实验: 取样品 1 s m g置50 m l容量瓶中 , 加水溶解并稀释至刻度 , 超声10 m in ,
过滤 。 取滤液 lm l按标准曲线项下操作 , 放置一定时间测定吸收i尘, 结果14h 内吸收度不变 ,
具较好 的稳定性 。
1
.
8 样品含量测定: 精密称取样.异, 】、 2 各5m l, 样品3、 4 各7m g , 分别置”m l容量瓶 中 , 按
“稳定性实验” 项下操 作 , 测定结呆 如表5 。
、}、 戈: 含、 一 卫荃护p· l。()% (下转 第350页)
348
最佳配 比 , 芍药戒峰 与相邻峰的分离度为 1.65 ‘R ) 1.5 ) , 图2 。
4
.
2 通过实验所得峰面积 与峰 ,苛吐的故据 , 经回归分析 , 峰面积的R S D 为 。.9 % , 故 定量
选用峰而积值计算 。
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1勺
0 侣石-一.)J. 代一飞一亨一叮了一 4 8 12 16 4 8 12 16i农度 (ug ) 时间(m in)
图1 标准曲线 图2 白芍总试 H P LC 谱
1 ·对照品 2 一 供试品 a 一 芍药试峰
参 考 文 献
1 原 田正敏 , 编集 . 繁用生药的成分定量. 日本:
广川书店 , 平成元2 王宝琴主编 . 中成药质量标准与标准物质研究.
北京: 甲国 医药科技出版社 , 1 9 9 这
( 1 9 9 4 一 1 2 一0 6 收稿 )
(_匕接第348页)
式中C 为样品葡萄塘醛酸浓度 ( 协g / m l ) V 为取样量 ( m l ) D 为稀释倍数50 o w 为样品重量
表5 样品含量测定
样品号 巾 测得吸收度( A ) 含量( % ) 平均含量( % )
16
23 .9
功Jd, 几”dtt丹l
:…几b九lrJ介Qod,工,二19曰,‘叮山
2 讨论与小结
本法测定原理为酸性多糖在强酸作用下
水解成糖醛酸 , 在硫酸存在下与咔哇反应生
成含淡基的紫红色产物 , 在适当波长下测定
其含量 。 本法简便易行 , 灵敏度高 , 最低 险
出浓度为0.05件g / m l 。
2
.
2 生成的紫红色产 物遇水不稳定 , 因此
在显色反应后 的定量转移过程 ‘{ ,应 保 持 无
水操作 。
2
.
3 葡萄糖醛酸标准溶液应置冰 箱保 存 ,
可 在一周内使用 , 或 者临时配制 。
2
.
4 样品来源不同 , 其酸性糖含量也不同 。
红松塔多糖中酸性糖高于红松子壳多糖中的
酸性糖含量 。
参 考
1 李好枝 , 等. 中草药 , 1 9 9 4 , 2 5 ( 4 ) : 1 8 5
2 S
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J P n J C a n e e r R e s
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一 1 9 6 2
( 4 )
: 3 3 0
4 李向高 , 等 . 中药通报 , 1 9 8 7 , 2 2 ( 6 ) : 一。
0 。 1 2 0
0
。
1 2 2
0
。
1 2 6
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1 7 3
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1 7 5
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0 4 3
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0 5 0
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3 6
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1 3
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样品卜红松塔多糖 E
3一 红松子壳多糖 1
2 ·红松塔 多塘 工 ,
4
一红 哄子壳多糖 工
张岩洪 , 等 . 中成药 , z g s a ( 1 0 ) : 3 4
瞿永信 , 等. 现代食品分析手册. 北京:北京
大学出版社 , 1 9 8 8 .
(
1 9 9 4
一0 8 一 2 3收稿 )
献56文
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卜g / m l a c i d p o l y s a c c h a ri d e s ( r = 0 .0 9 9 , , n = 7 ) . A n a l y t i c a l r e c o v o r y w a s , 耳.0 % ~ 9 9 . 5 % . R D S
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《中草药 》1 9 9 5年弟26卷第了期 . 3 9 1 ·