全 文 ：回春至宝口服液质量控制的研究
沈阳军区总医院药剂科 ( 1 1 0 015 )
沈阳军区药检所
郭 涛 * 史 国兵 迟 卫 国 马 燕 高声传
靳宝峰 杨 松
摘婆 采用薄层层析法对回春至宝 口服液中红参 、 鹿茸 、 淫羊霍的有效成分进行定性 , 以 H P L C
法对主要成分之一的淫羊霍的有效成分淫羊羞试进行含量测定 , 方法准确 、 灵敏 、 重现性好 , 回
收率达 9 8 . 0 7 % , R S D = 1 . 5 5写 。
关健词 回春至宝口服液 H P L C 含量测定 淫羊霍试 人参皂试 R e 甘氨酸
回春至宝 口服液 (简称回春液 )主要由红参 、 鹿茸 、 雄蚕娥 、 淫羊霍等数味天然药物组成
的纯中药制剂 , 具有温肾壮阳起萎 , 增强身体免疫力 、 抵抗力等功效 。 为保证回春液制剂质
量和药效均衡 , 我们采用薄层层析法对红参 、 鹿茸 、 淫羊蕾中有效成分进行鉴别 ; 采用 高效
液相色谱法 ( H P L C ) 对主要成分之一的淫羊蕾叶内的有效成分淫羊蕾贰进行含量测定 。 试
验证明 , 本鉴别和含量测定方法适合于多成分的回春液 , 可作为制剂质量控制 。
1 试药与仪器
1
.
1 试药均为分析纯 , 水为二 次蒸馏水 。 对照品 : 人参皂贰 R b l 、 R e 、 R g l , 甘氨酸 ,淫羊
茬俄均为中国药 品生物制品检定所提供 。 药品: 回春液 由本院制剂室提供 。 L C 一 4 A 高效 液
相色谱仪 、 s P D 一 ZA s紫外检测器 、 C一 R Z A不色谱数据处理机 , 日本岛 津 产 。 z F A 8 4一 17
型旋转蒸发器 , 上海 玻璃仪器二厂 。 硅胶 H一 C M C一 N a薄层层析板 , 自制 。
2 方法与结果
2
.
1 鉴别
2
.
1
.
1 取本品 6支 , 置水浴上浓缩至约 10 m l , 用正丁醇 30 m l分 3次萃取 。 合并萃取液 , 用
水 50 m l洗涤 , 萃取液置水浴上蒸干 。 残渣加甲醇适量溶解 , 定容为 s m l , 作 为 供 试 品 溶
液 。 另取人参皂贰 R b , 、 R 。 、 R g : , 分别加 甲醇使成 Zm g / m l的溶液 , 作为对照品溶液 。 照
薄层色谱法 ( 中国药典 90 年版一部附录 57 页 ) 试验 , 吸取上述 4种溶液各 5时 , 分别点 于 同
一含梭甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 H薄层板上 , 以氯仿一醋酸乙 醋一甲 醇一水 ( 15 : 4 0 : 7
2
: 1 0 ) 为展开剂 ,上行展开后 ,取出 , 晾干 , 喷以 10 %硫酸乙醇溶液 , 在 105 ℃烘数分钟 ,
分别置日光及紫外光灯 ( 入= 3 6 5 n m ) 下检视 。 供试 品在与对照品色谱相应位置上 , 日光下
显相同的 3个紫红色斑点 , 紫外光灯下显相 同的 l个黄色和 2个橙色荧光斑点 。
2
.
1
.
2 取甘氨酸对照品 , 加 70 % 乙醇使成 Z m g / m l的溶液 , 作为对照品溶液 。 照薄层色 i普
法试验 , 吸取 ( 2 . 1 . 1 ) 项下供试品溶液 5卜lIT l本对照品溶液 1时 , 分别点于同一含梭 甲 基纤
维素钠为粘合剂的硅胶 H薄层板上 , 以正丁醇一冰 乙酸一水 ( 3 : l : l ) 为展开剂 , 上 行 展开
后 , 取出 , 晾干 , 喷以 2%荀三酮丙酮溶液 , 10 5℃烘数分钟 , 供试 品在与对照品色 谱 相 应
的位置上显相同的桃红色斑点 。
2
.
1
.
3 取淫羊蕾贰对照品 , 加甲醇使成 0 s m g / m l溶液 , 作为对照品溶液 。 照薄层 色谱 法
试验 , 吸取 ( 2 . 1 . 1 ) 项下的供试品溶液 5时和本对照品溶液 10时 , 分别点于 同一含梭甲基纤
.
A d d r e s s , G u o T a o
,
D e p a r t m e n 一 o f P h a r m a c e u t i e s S h e n y a n g M i l i t a r y R e s i o n G e n e r a l
H o s P i r a l
,
S h e n y a n g
·
6 7名 ·
维素钠为粘合剂的硅胶H 薄层板上 , 以醋酸 乙酷一丁酮一甲酸一水 ( 1 0 : l : 1 : )[ 为展开 剂 , 上
行展开后 , 取出 、 晾干 , 置日光下检视 , 供试品在与对照品色谱相应的位置上 , 显相 同的淡
黄色斑 , 喷三氯化铝试液 , 置紫外灯 (入 = 3 6 5 n m )下检视 , 显相同的橙红色斑点 。
2
.
2 淫羊蕾贰的含量测定 ( H P L C 法 )
2
.
2
.
1 色谱条件 : 色谱柱: Z or b a x 一 C 。 ( 4 . 6m m I D x 1 c5 m ) ,流动相 : 四氢吠喃一甲醇一水
( 13
: 2 3 : 6 4 )
, 流速 : 1 . o m l / m i n , 检测波长 : 2 7 o n m , 检测灵敏度 : o . o s A U F S , 柱温 :
室温 。 标准品及样品色谱图见图 。
表 样品中淫羊 I 伏含 , 浦定结果
批次 平均含量 R S D%
l e
,
012
IC
9 3 0 3 0 6 8 6
。
3 2
9 30 4 2 0 9 1
。
5 4
下 二 8 7 。 0 4
R S D 4
.
8 1
9 3 0 7 10
峰面积
1 4 0 8 4 6
1 5 0 2 1 8
1 4 5 5 3 2
1 5 7 0 6 5
玉5 4 4 4 6
1 5 19 5 7
1 4 0 4 2 6
14 0 6 3 4
1 40 5 3 0
8 3
。
2 6
图
a ·标准品
标准品及样品色进困
b
一样品 I C 一淫羊若贰
2
.
2
.
2 淫羊蕾贰峰面积与浓度线性关系的考
察 : 精取干燥恒重的淫羊霍贰对照 品 约 3 . 5
m g
, 置于 s m l容量瓶中 ,加入甲醇溶液后稀释
至刻度 , 分装至 1一 2 m l容量瓶中 ,密封后置冰箱中 ( 4℃ )备用 。 精取淫羊蕾贰标准液 2 0 、 4 0 、
和 、 8 0 、 1 0 川 , 分别置于 l m l容量瓶中 , 用流动相稀释至刻度 , 混匀后每次进样 6时 , 微机
计算出峰面积 , 绘制峰面积一浓度曲线 , 得 一 直线 , 其回归方程 : A = 一 2 2 6 . 9一 20 5 28 C
(协 g / m l ) , r = 0 . 9 9 9 9 。
2
.
2
.
3 样品的测定 : 精密量取 回春液 25 m l浓缩至 5m l左右 , 用正丁醇 30 m l分 3次萃取 , 萃
取液浓缩至 s m l , 过滤 、 蒸干 , 残渣用 甲醇洗涤 ,转入 5m l容量瓶中定容 ,进 6时 。 结果见表 。
2
.
2
.
4 回收率实验 : 加样回收率实验参照样品测定项下提 取后 , 进样测定 , 其平均回收率
为 9 5 . 9 7% , R S D = 1 . 5 3% 。
3 讨论
3
.
1 鉴别人参皂贰 3个成分 , 由于供试 品中其它物质的干扰 , 在紫外光灯下检视时 , 除人参
皂贰R e斑点清晰外 , R b :和 R g ;斑点被掩盖 。
3
.
2 鉴别鹿茸成分甘氨酸 R f 值略小于对照品 , 经追加对照品试验 , 确认甘氨酸无疑 。
3
.
3 含量测定的关键在于淫羊蕾贰的提取 。 经试验采用 甲醇虽提取较完全 , 但提取液进样
后杂质峰较多 , 且造成柱压上升 , 因此选用正丁醇萃取 , 萃取液蒸干后用 甲醇溶解 , 此法可
克服上述不足 , 并缩短提取时间 , 且对淫羊蕾贰的提取效果与甲醇提取的基本一致 。
3
.
4 近年虽有报道 H P L C法 测定淫羊蕾单味药 。 本文所采用 H P L C法应用于成分众多的回
春液取得比较满意结果 , 可作为口服液的质控 。 鉴于淫羊蕾产地 、 采集季节 、 浸提时间的不
同 , 各批次间含量差异较大 , 故暂订淫羊蕾贰含量为不低于 6 5协 g / 10 m l 。
( 1 9 9 4一 1 2一 2 9收稿 )
《中草药》 1 9 9 5年第罕.卷第1 1期
维素钠为粘合剂的硅胶 H薄层板上 , 以醋酸 乙酷一丁酮一甲酸一水 ( 1 0 : l : 1 : )[ 为展开 剂 , 上
行展开后 , 取出 、 晾干 , 置日光下检视 , 供试品在与对照品色谱相应的位置上 , 显相 同的淡
黄色斑 , 喷三氯化铝试液 , 置紫外灯 (入 = 3 6 5 n m )下检视 , 显相同的橙红色斑点 。
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2 淫羊蕾贰的含量测定 ( H P L C 法 )
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1 色谱条件 : 色谱柱: Z or b a x 一 C 。 ( 4 . 6m m I D x 1 c5 m ) ,流动相 : 四氢吠喃一甲醇一水
( 13
: 2 3 : 6 4 )
, 流速 : 1 . o m l / m i n , 检测波长 : 2 7 o n m , 检测灵敏度 : o . o s A U F S , 柱温 :
室温 。 标准品及样品色谱图见图 。
表 样品中淫羊 I 伏含 , 浦定结果
批次 平均含量 R S D%
l e
,
012
IC
9 3 0 3 0 6 8 6
。
3 2
9 30 4 2 0 9 1
。
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下 二 8 7 。 0 4
R S D 4
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8 1
9 3 0 7 10
峰面积
1 4 0 8 4 6
1 5 0 2 1 8
1 4 5 5 3 2
1 5 7 0 6 5
玉5 4 4 4 6
1 5 19 5 7
1 4 0 4 2 6
14 0 6 3 4
1 40 5 3 0
8 3
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图
a ·标准品
标准品及样品色进困
b
一样品 I C 一淫羊若贰
2
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2 淫羊蕾贰峰面积与浓度线性关系的考
察 : 精取干燥恒重的淫羊霍贰对照 品 约 3 . 5
m g
, 置于 s m l容量瓶中 ,加入甲醇溶液后稀释
至刻度 , 分装至 1一 2 m l容量瓶中 ,密封后置冰箱中 ( 4℃ )备用 。 精取淫羊蕾贰标准液 2 0 、 4 0 、
和 、 8 0 、 1 0 川 , 分别置于 l m l容量瓶中 , 用流动相稀释至刻度 , 混匀后每次进样 6时 , 微机
计算出峰面积 , 绘制峰面积一浓度曲线 , 得 一 直线 , 其回归方程 : A = 一 2 2 6 . 9一 20 5 28 C
(协 g / m l ) , r = 0 . 9 9 9 9 。
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3 样品的测定 : 精密量取 回春液 25 m l浓缩至 5m l左右 , 用正丁醇 30 m l分 3次萃取 , 萃
取液浓缩至 s m l , 过滤 、 蒸干 , 残渣用 甲醇洗涤 ,转入 5m l容量瓶中定容 ,进 6时 。 结果见表 。
2
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4 回收率实验 : 加样回收率实验参照样品测定项下提 取后 , 进样测定 , 其平均回收率
为 9 5 . 9 7% , R S D = 1 . 5 3% 。
3 讨论
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1 鉴别人参皂贰 3个成分 , 由于供试 品中其它物质的干扰 , 在紫外光灯下检视时 , 除人参
皂贰R e斑点清晰外 , R b :和 R g ;斑点被掩盖 。
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2 鉴别鹿茸成分甘氨酸 R f 值略小于对照品 , 经追加对照品试验 , 确认甘氨酸无疑 。
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3 含量测定的关键在于淫羊蕾贰的提取 。 经试验采用 甲醇虽提取较完全 , 但提取液进样
后杂质峰较多 , 且造成柱压上升 , 因此选用正丁醇萃取 , 萃取液蒸干后用 甲醇溶解 , 此法可
克服上述不足 , 并缩短提取时间 , 且对淫羊蕾贰的提取效果与甲醇提取的基本一致 。
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4 近年虽有报道 H P L C法 测定淫羊蕾单味药 。 本文所采用 H P L C法应用于成分众多的回
春液取得比较满意结果 , 可作为口服液的质控 。 鉴于淫羊蕾产地 、 采集季节 、 浸提时间的不
同 , 各批次间含量差异较大 , 故暂订淫羊蕾贰含量为不低于 6 5协 g / 10 m l 。
( 1 9 9 4一 1 2一 2 9收稿 )
《中草药》 1 9 9 5年第罕.卷第1 1期