全 文 ：3 讨论
调节机体免疫功能的药物可能作用于机
体免疫反应的不同环节或不 同细胞 ,如影响
单核巨噬细胞系统的非特异性吞噬功能或影
响特异性体液免疫或细胞免疫过程 ,我们考
虑到这一特点 , 采用涉及免疫过程主要环节
的实验方法 ,初步观察蛇床子素对 小鼠免疫
系统的影响 ,结果表明 ,蛇床子素能显著增加
碳廓清指数及吞噬指数 , 显著增加脾指数 ,而
对迟发性超敏反应有明显的抑制作用 。 说明
蛇床子素可增加网状内皮细胞 的吞噬功能 ,
增强非特异性免疫功能 ,而且对免疫系统的
各个环节影响不一致 ,蛇床子素的抗变态反
应 , 延缓衰老 5[] 等作用可能与其对免疫系统
的作用密不可分 ,蛇床子素在免疫系统的作
用值得更深入的研究 。
参 考 文 献
1 江苏新医学院编 . 中药大辞典 . 上海 : 卜海人民出版社 ,
19 77 4 3 4 4
2 向仁德 ,等 . 天然产物与开发 , 19 93 , 5 ( 4 ) : 57
3 陈志春 , 等 . 药学学报 , 1 9 8 8 , 2 3 ( 2 ) : 9 6
4 陈志春 ,等 . 中药通报 , 1 9 8 6 , 1 1 ( 2 ) : 5 0
5 王 彬 ,等 . 中药药理与临床 , 1 9 8 4( l0 ) : 9
( 1 9 9 6
一 0 5一 1 3 收稿 )
E f f e e t s o f o s t h o l e o n Im m u n o P h a r m a c o l o g y i n M i e e
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.
心复康对体外培养乳鼠心肌细胞影响的实验研究△
天津中医学院病理教研室 ( 3 0 0 193) 范英 昌 裕 法 融 陆一竹 李稚琳
摘 要 心肌细胞内超氧化物歧化酶 (S O D )产生减少 ,过氧化脂质生成增多以及心肌细胞膜流动
性的异常与心肌梗塞的发生有着重要的关系 。 本实验通过对乳鼠心肌细胞的体外培养 ,观察到中
药心复康可明显提高缺氧性心肌细胞的 SO D 的活性 ,降低过氧化脂质含量并且提高心肌细胞膜
流动性 ,维持其正常功能 。 实验结果提示心复康可有效地增强心肌细胞抗缺氧性损伤的能力 。
关键词 心复康 心肌梗塞 过氧化损伤 膜流动性 益气养阴 活血化疲
目前国 内外学者对心肌梗塞的始发病 — 动脉粥样硬化的研究 已深入到遗传基因
. A d d r e s s : F a n y in g e h a n g
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范英昌 46 岁 ,病理学硕士学位研究生 。 现任天津 中医学院病心血管系统病理的研究 。 曾获国家教委霍英东教育蒸金教学类二
理教研室副教授 。 多年来一直从事以动脉粥样硬化为主等奖 ,获省部组科技进步二等奖 2 项 , 局级科技进步一等
1 项 。 主持或参加完成各级科研课题 7 项 , 鉴定结果均获 “ 国内领先 ” 以 上评价 。 在国内外正式刊物 上发表科研论文 30 余
,其中多篇被国外权威杂志摘录发表 。△ 天津市自然科学基 金资助课题
《中草药 》 1 9 9 7 年第 2 5 卷第 9 期 . 5 4 5 .
的奖篇
400
,10乙心自弓口
学 , 细胞生物学水平 ,而对心肌梗塞发生过程
中心肌细胞的生物学变化及修复机制尚缺乏
系统研究 。 同时对于心肌梗塞的治疗也仅限
于扩张冠状动脉 , 改善心肌供血 ,保护心肌细
胞的正常代谢等方法 。 我们认为如何提高心
肌细胞的抗缺氧性损伤的能力是防治心肌梗
塞的一条重要途径 , 这对于提供有效的、防治
措施具有重要意义 。 我们仅就心复康对培养
乳鼠心肌细胞缺氧损伤后抗过氧化损伤及保
护细胞膜的作用机制进行探讨 。
1 材料与方法
.1 1 心肌细胞培养 : 取出生 2一 3 d 的 S D 大
鼠乳鼠消毒 ,开胸剪取心脏 ,剔除心房 ,放入
盛有无菌 D 一 H an ks 溶液 的平皿中 , 反复冲
洗 ,剪碎心室 ,按常规心肌细胞培养技术进行
培养田 ,细胞计数调整密度至 1 x 10 , /m L , 每
4 m L 细胞悬液接种至培养瓶中 , 37 ℃静置培
养 。
1
.
2 分组及处理 :按上述接种乳鼠心肌细胞
7 4 瓶 ,每 3 d 换液 1 次 , 2 周后 , 细胞伸出伪
足 ,相互连接呈网状 ,并形成同步收缩 , 将其
随机分为正常对照组 (n 一 3 4) 、 中药组 (n ~
40 )
。 在中药组中按每 10 0 m L 正常培养液 30
拜L 的比例加入心复康中药无菌提取液 (合生
药 3 0 拌g /m L , 中药心复康制剂主要由西洋
参 、 白术 、 鹿衔草 、 构祀子 、女贞子 、功劳叶 、 土
鳖虫等药物组成 。 由天津中医学院第一附属
医院制剂室提供 。 )培养 3 d 后 , 从正常对照
组中抽取 20 瓶细胞标本换入缺氧缺糖培养
液 , 即成为缺氧缺糖对照组 ;从中药组中抽取
20 瓶换入加有心复康中药无菌提取液的缺
氧缺糖培养液 , 即成为缺氧缺糖中药组 。 此
时 , 得到正常对照组 14 瓶 ,缺氧缺糖对照组
2 0 瓶 ,缺氧缺糖中药组 20 瓶 ,中药对照组 20
瓶 。 将缺氧缺糖的对照组和缺氧缺糖中药组
开盖置于密闭式的 C O : 培养箱中 ,并迅速抽
吸箱中空气 , 置换 以高纯氮气 37 ℃密闭培
养 。 6 h 后 , 同时取出各组标本 , 制成细胞悬
液 ,分置于离心管中 , 离心 ,弃上清液 ,待测指
标 。
.
5 4 6
.
L 3 指标检测
1
.
3
.
1 细胞膜流动性的测定 : 取 2 x 1 0一 6 /
m
o l D P H 液 2 m L ( 6 d e p h e u g l l , 3 , 5一h e n -
a t r i e u e 美 国 S i g m a 公 司 提 供 ) 2 5 oC 温 育
3 om in
, 标记细胞膜脂质双层 ,离心 , 去除残
留标记液 , 用荧光偏振法 , 荧光分光光度计
( 日立一 850 型 ) ,荧光激发波长 3 62 n m 反射
波长 4 30 n m , 在 25 ℃下分别测定平行与垂直
时的荧光偏振光强度 I , 1 、 I , ,校正后输入计
算机 , 按公式计算荧光偏振度 (P ) 和细胞膜
流动性 (M F U ) 。
公式 : P ~ 1
1 1一
G 1
1
1 11 + G 1
1… … ( 1 )
P里旦圣一 1
M F u ~
一卫生- . . . … … ( 2)
P r
p r 为测得值 , p m a x 为极限值
1
.
3
.
2 细胞中超氧化物歧化酶 (s O D )测定 :
用邻苯三酚 自氧化法测定细胞内的 S O D 活
性 。
1
.
3
.
3 细胞中氧化脂质 ( L P O )测定 : 用硫化
巴比妥酸比色法测定细胞中 L P O 含量 。
1
.
4 统计学处理采用组间对照 t 检验 。
2 结果
2
.
1 心复康对体外培养乳鼠心肌细胞膜流
动性的影响 : 结果表明 , 缺氧缺糖对照组心肌
细胞膜流动性明显降低与正常对照组相比 ,
具有非常显著性差异 (尸 < 0 . 0 1 ) ;缺氧缺糖
中药组心肌细胞膜流动性虽较正常组低 ,但
与缺氧缺糖对照组相比 ,仍然明显升高 ,具有
非常显著性差异 (尸 < 0 . 01 ) 。 见表 1 。
农 1 各组间心肌细胞膜流动性的比较
组别
正常对照组
中药对照组
缺氧缺糖对照组
缺叙缺搪中药组
与正常对照组相比 二 p < 。 . 01
对照组相比△△ P < 。 . O1( 下同 )
膜流动性 (王士 s )
2
.
5 6士 0 . 2 4 7
2
.
4 7士 0 . 20 5
1
.
7 3 2士 0 . 2 3 4二
2
.
1 5 7士 0 . 20 9 . △ △
P < .0 0匀与缺氧缺搪
2
.
2 心复康对体外培养乳鼠心肌细胞抗脂
质过氧化损伤作用的影响 : 结果表明 ,细胞内
S O D 活性 , 缺氧缺糖对照组较正常对照组 ,
中药对照组均明显降低 。 缺氧缺糖中药组与
正常对照组 , 中药对照组相比 ,有显著或非常
显著性差异 (尸 < 0 . 05 或 P < 0 . 01 )与缺氧缺
糖对照组相 比 , 亦有 显著或非常显著性差异
( P < 0
.
0 5 或 P < 0 . 0 1 ) 。 见表 2 、 3 。
表 2 各组间 S O D 活性的比较 ( u / m只蛋白 )
组别
正常对照组
中药对照组
缺氧缺糖对照组
缺氧缺糖中药组
n
l 0
l 5
1 5
1 5
s o n 活性 (于士 s )
3 8
.
4 6士 3 . 9 9
4 4
.
3 2士 5 . 4 3 .
2 5
.
2 8士 5 . 3 2 苦 份 凸△
3 4
.
1 4士 5 . 4 7 . 饭 △△ 谬矛#
与中药对照组相比 # # 尸 < 0 . 01 , ” 尸 < 。 . 0 5 ( 下同 )
表 3 各组间细胞内 L (P ) 含量的比较
(m m o l / m g H b )
组别
正常对照组
一 中药对照组
一 缺氧缺糖对照组
一 缺氧缺糖中药组
3 讨论
1 0
l 5
1 5
1 5
L p O 含量 (牙士 、 )
0
.
2 0 5 1 0
.
0 2 9
0
.
2 3 2士 0 0 3 7
0
.
8 4 3士 0 . 0 4 5 解 璐 △△
0 5 32士 0 . 0 5 1 0 . 么△ #
现代医学认为 ,心肌缺氧时 , 自由基产生
增多而细胞 内自由基清除剂 SO D 活性降低
不能清除过多的 O F R , 由于 O F R 化学活性
很高 , 与细胞膜上的不饱和脂肪酸反应 ,形成
超氧脂质基团 ,再进一步与其他脂肪酸上的
氢原子反应 ,生成超氧化合物和新的脂基团 ,
这一系列反应可反复进行 , 其结果可导致脂
肪链断裂 .2[ ` l ; 作为 L P O 分解的终产物丙二
醛 (M D A ) 可使细胞膜蛋 白的一 S H 和 磷脂 -
N H 交联 , 使维持离子平衡的葡萄糖 一 6一磷酸
酶 , N ` / K 于三磷酸腺普酶活性降低 , 致胞膜
刚性增强 ,流动性和通透性发生变化 l[] ; L P o
还可使缺氧 区补体被激活 , 产生 C 。 等片段 ,
并且激活细胞膜上的磷脂酶促进花生四烯酸
代谢 ,使 白三烯生成增 多 , C 3 等与白三烯能
吸引中性粒细胞进入缺氧 区在 N A D P H 氧
化酶的作用下 , 中性粒细胞可产生大量 0 2一 ,
从而再形成大量 L P O ,发生脂质过氧化 。 如
此恶性循环 , 影响细胞的完整性及其正常功
能 ,造成细胞的损伤 ,甚至导致细胞的死亡 。
祖国医 学认为心肌梗塞属 于 中医 “ 胸
痹” 、 “ 真心痛 ” 范畴 。 从 《内经 》的“ 邪在心 ” 到
《金匾 》的 “ 阳微阴弦 ” 较完整 , 而扼要地指出
“ 胸痹心痛 ” 的病机 , “ 阳微 ” 即本虚 , 以气阴两
虚为多 , 标实者 , 系气滞 、血淤 、 痰浊 、寒凝 、热
结等病理因素 ,阻竭胸阳 , 使心气痹阻 。 已虚
之体加诸诱因合而 为患 , 闭阻心络 , 不通而
痛仁5」。 根据其病机特点 , 我们用西洋参 、 白术
益气养阴为君 ;拘祀子 、 女贞子 、 功劳叶益肝
肾之阴虚 , 以清热生血为臣 ; 土鳖虫活血化
癖 , 鹿衔草健脾益肾为佐使者 。 全方“ 益气养
阴 , 活血化察 ” 对心肌梗塞进行防治 ,从 而达
到扶正祛邪 ,补不留邪 ,攻不伤正 。
本实验结果显示 , 心复康可明显增强缺
氧状态下心肌细胞自由基清除系统的功能 ,
抑制脂质过氧化反应 ,提高细胞膜流动性 , 维
持其正常能力 , 对于缺氧性心肌细胞具有保
护作用 。
参 考 文 献
1 苏 志 . 国外 医学 一生理病理学临床分册 , 1 9 90 , 1。 ( 1 ) :
1 l
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c a n j o u r n a l o f M e d i e in 七
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19 9 1 , 9 1 : 3 e
3 李连达 , 等 . 中西医结合杂志 , 1 986 , 6( 4) : 2 46
4 Sh a r o n I W
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d i c a l C lin i
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, 一9 8 8 ,
7 2
:
2 2 7
5 谭保平 . 中国中医急症 , 1 9 9 5 , 4 ( 4 ) : 17 4
( 1 9 9 6
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0 9
一
3 0 收稿 )
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《中草药》 1 9 9 7年第 2 5 卷第 9 期 . 5 4 7 .