全 文 ：丹参及复方丹参注射液质量分析研究
中国人民解放军“医院 开封 。。 末 璐 苏桂兰 胡冠时
摘要 对丹参及复方丹参注射液中有效成分进行紫外吸收度测定 、 薄层扫描测定 , 并建立 了儿茶
酚类物质总量侧定法 , 发现市售产品有效成分含量差异很大。 注射液中棘质对红细胞及血 浆蛋白
的相关性研究证实 , 市鲁产品 均含大量裸质 , 能使人红细胞 及血浆蛋白变性 , 会导致 毒副作用 。
关扭词 丹参 复方丹参注射液 含量 杂质 毒副作用
丹参及复方丹参注射液是 目前临床应用量较大的静脉给药中草药注射剂 。 但至今仍缺乏
可靠的含量测定方法 , 其它质控项 目亦有待进一步完善 。 本文建立 了丹参有效成分含量的可
见分光光度测定法 , 进行了化学成分 的薄层扫描 、 注射液紫外吸收值测定 、 揉质检查 、 对人
红细胞和血浆蛋白影响研究 。
实验材料
丹参及复方丹参注射液样品 上 海 厂 , 批 号 , 简 称 江苏 厂 , 批号
一 , 简称 , 江 苏 厂 , 批 号 一 , 简 称 , 江 苏 厂 , 批号 一 ,
简称 去揉质丹参及注射液试制品 , 本实验室 , 批号 , 简称 。
高效硅胶薄层层析板 , 中国军事医学科学院 定量点样管 , , 一 快速
薄层扫描仪 , 岛津 一 分光光度计 , 高倍显微镜 , , 日本
原儿茶醛 , 上海试剂公司 , 明胶 , 上海试剂公司 , 明胶试液 将 明胶 溶于 。。 蒸碱
水 中 其它所 用试剂均为分析纯 。
方法及 结果
有效成分的含量测定 丹参水溶性成分均为邻苯二经基类化合物〔, 〕, 所以 采 用邻苯
二经基化合物显色法进行可见分光光 度法测完〔〕。
标准曲线的制备 称取 , 一二经基苯甲醛适量 , 用水溶解 , 配成 一 协 的
系列浓度液 , 然后分别加入 , 试液 , 放置 后加 试
液 , 后 , 再加 试 液 , 放置 后 , 于入。 处
测 值 。 以 蒸馏水加显色刘为空白 , 测 值 得标准 曲线 侧日方程 为 二 一
, , 二 一 。
标 品测定 取 为 样 、 、 、 各 , 用蒸馏水稀释 一 倍 。 精取
稀释液 , 按标准 曲线法 于入。 。 二 二 处测 值 。 根据 回归方程计 算出各样 品
中有效成分含量 , 见表 。
样品的紫外吸收〔 , ‘〕 精取 、 、 、 各 。 稀释至 , 用 一 分
光光度计于 一 范围内进行扫描 , 得几。。 二 士 , 于 处测得 值 , 见表 。
薄层扫描 精取 、 、 、 各 , 分别加入 无水 乙醇 , 摇匀 , 为 点样
液 , 精取标准 曲线项下 , 一二经基苯甲醛液 , 加 无水 乙醇 , 摇 匀 , 为 对 照
液 , 简称 。 分别将上述样品液 , 点于 同一块高效薄层硅胶板上 , 用二 甲苯 一 乙酸 乙醋一 冰醋
酸 展开 , 结果见 图 。
对照 品斑点的 , 展开剂挥干后于 一 快速薄层扫描仪上 , 根据对照品 值 ,
于几 处锯齿形多通道扫描 , 得出薄层扫 描图 , 见图 。
各样品中相当 , 一 二经基苯甲醛色斑 的面积 , 见表 。
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《中草药 》 年第 卷第期
裹
厂家简称
各样品中有效成分浓度比较 各祥品的象外吸收度比较
浓度 相对
表
样品 只
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又
相对
公。
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各样品有效成分峰面积比较
峰面积 相对
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2 . 4 蹂质检查: 取S J、 J D 、 J C 、 J W 、 5 2
各lm l, 逐滴加入明胶试液 , 如有沉淀的记
为 ( 十 ) , 以倍倍稀释法稀释样品至无沉淀
记为 ( 一 ) , 测得揉质检查阳性结果的最大
稀释倍数见 表4 。
市售注射液中的含大量揉质 , 而经精制
的注射 液试制品未检查 出蹂质 。
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称层层析目.
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图2 薄层扫描讼(. 为3, 4 一 二经基苯 甲醛)
裹4 各样品的最大稀释倍致
2 .5 注射液对血浆蛋 白及红细胞的影响
2 .5.1 血浆蛋白及2% 红细胞生理盐水试液制
备: 取健康人新鲜血液 , 每1om l血液加入 1250
U 的肝素钠o.lm l, 离心 , s 0 0 0 r / m i n , 3 0
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。 倾取上清液 , 即为血浆蛋白试液 。取下层
红细胞 , 用生理盐水离心冲洗2~ 3次 , 至上清
样品 原液 1/2 1/4 1/5 1/16 1/32
液不呈红色为止 。 然后按红细胞的量用生理盐水配成2 % 的悬浮液。
2
.
5
.
2 对红细胞的影响: 取2 % 的红细胞悬浮液2.sm l于千燥试管 中 , 依次加入不同稀释度
的样品液 , 轻轻旋摇均匀 , 置37 ℃孵箱中 , 孵化必h 。置显微镜下观察细胞形态 。 如 细 胞 无变
形 , 边缘整齐 , 光滑 , 结果为 ( 一 ) ; 如细胞表面不光滑 , 但细胞量不少 , 结果为 ( + ) 如
细胞表面不光滑且边缘稍有不整齐 , 少量细胞破裂 , 致细胞间液微呈混 浊 , 结果为 ( + + );
如细胞表面不光滑 , 不整齐 , 有变形 , 细胞呈 絮凝沉淀 , 细胞数减少 , 结果为 ( + + + ) 。
实验结果表明 , 市售注射液在一定浓度下均能使细胞变性 , 但不含揉质的注射液试制品对红
. 30 0 .
细胞无影响 。 见表5 。
2
.
5
.
3 对血浆蛋白的影响: 取lm l血浆蛋白试液于试管 中 , 分别加入用蒸馏水稀释成不同浓
度的样品 , 若生成絮状沉淀或产生沉淀或产生浑浊者为阳性 , 记为 ( + ) , 若实验液澄明 ,
无反应者为阴性 , 记为 ( 一 ) , 市售丹参或复方丹参注射液在一定浓度下均能与血浆蛋白产
生沉淀 , 而无揉质的丹参注射液试制品则对血浆蛋白无影响 , , 见表6 。
衰5 样品对红细饱的影晌 裹6 样品对血桨蛋白的影晌
试管号
二% 红细胞(m l)
供试药液(m D
生理盆水 (m l)
2 。5 2 。 5 2 。 5 2 。 5 2 。 5
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试管号 1 2 3 4 5
血浆蛋白(m l) 1 1 1 1 1
供试药液 (m l) 0 .1 0 .2 0 .3 0 .4 0 .5
蒸馏水(m l) 0 .9 0。 8 0 。 7 0 。 6 0 。 5
S J 一 一 + + +
J D 一 一 一 十 +
J C 一 一 一 + +
J W 一 + + + +
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3 讨论
丹参和复方丹参注射液的有效成分主要是丹参的水溶性物质 , 这些物质是原儿茶醛 、 原
儿茶酸、 丹参素、 丹参酸丙 ( 二分子丹参素缩合物) 、 丹参酸 乙 ( 三分子丹参素和一分子咖啡
酸的缩合物 ) 、 丹参酸 乙的同系物 、 丹参迷迭香酸 、 丹参酸 A 、 3 , 4 一二经基 桂 皮酸等9种
〔1〕, 均为邻苯二经基类化合物 。 本文采用了可见分光光度法 直接测定邻苯二经 基 类有 效成
分的含量 , 用紫外分光光度计测定281 士3n m 处的吸收度 , 并且用薄层扫描法来比较 注射 液
中 3 , 4 一二经基类甲醛单个有效成分的峰面积 。 表 1、 2 、 3 为3组实验数据 , 均 证 实 市 售四
厂家注射液质量相差甚大 。 有效成分含量相差4 一3 倍 , 紫外吸收度相差2 .64 倍 , 3 , 4 一 二经
基苯甲醛的峰面积相差2 .”倍 。 这势必影响临床疗效。 从3组数据比 较 , 可 以 看 出 , 采用可
见分光光度法能直接测定注射液中有效成分的含量 , 测定操作的干扰因素少 , 方法简单 , 精
密度较高 。 建议丹参及复方丹参注射液质量标准应增设含量测定项 目。
近年来 , 丹参及复方丹参注射液临床广为应用, , 但不良反应也时有发生 。 静脉滴注时 ,
可引起室性心律失常〔“〕、 过敏性休克〔“〕、 肢体剧痛〔7〕、 静脉炎〔“〕、 肝脏损 害〔, 〕等 毒 副 反
应 。 本文的实验数据 , 证实4种市售注射液均含大量裸质 , 能使血浆蛋白沉淀 , 能使红细胞变
形 , 破裂 , 细胞量减少 。 而本实验室制得不含揉质的丹参注射液则不使血浆蛋白发生沉淀 ,
也不使红细胞变性。 由此可知 , 丹参及复方丹参注射液的不 良反应主要是 由揉质引起的 , 蹂
质为多经基芳香酸组成的化学性质活泼的大分子物质 , 进入机体后 , 可作为半抗原与血浆蛋
白的氨基缔合成更大分子的复合物 , 引起机体变态反应 , 导致过敏性休克 ; 进入静脉 , 粘附
于血管壁 , 可致静脉炎 , 小血管栓塞 , 引起肢体剧痛; 进入静脉的药液回流入心脏 , 一旦 和
心肌细胞结合就有可能引起心律失常 ; 进入肝脏 , 大量揉质 与肝细胞作用的结果势必引起炎
症甚至坏死 。 故建议丹参注射液的质量标准应增加蹂质检查项目 。
今 考 文 献
1 胡 冠时 . 河南药讯 , 1 9 9 。, 4 : 5 6 周 孜 。 中西 医结合杂志 , 1 9 9 。, 10 ( 4 ) : 2 42
2 胡冠时 . 药 学通报 , 2 0 5 0 , 2 5 ( 5 ) : 2 9 4 7 何鉴祥 。 贵州医药 , 1 9 5 , , 1 3 ( 2 ) : 1 2 5
8 中 国人民解放军药品制剂规范. 1985 . 19 8 张 宋 。 中华护理杂志, 19 曲 , 23 ( 2 ) : 1 “
4 上海市药品标准 . 207连. 5 0 5 。 冯世杰 。 中草药 , 2 0 5 3 , 2 4 ( 5 ) : 2 2 5
。 昊明夏 , 等 . 河南医科大学学报 , 2 0 5 , , 2 3 ( ‘) : 3 5 6 ( 1 9 9 3 一0 3 一0 4 收稿 )
镶中草药》19 94 年第25 卷第6期 , 冬0 1 .
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《中草药 》 1 9 9 4年第25 卷第6期 一 3 3 5 -