全 文 :新 疆 农 业 大 学 学 报 2012,35(2):107~111
Journal of Xinjiang Agricultural University
文章编号:1007-8614(2012)02-0107-05
两种十字花科短命植物抗旱性分析及其指标研究
许春华,陈全家,郭忠军,高文伟,苏秀娟,曲延英
(新疆农业大学 农学院,乌鲁木齐 830052)
摘 要: 以两种十字花科类短命植物大蒜芥(Sisybrium altissimum L.)和线果芥(Conringia planisiliqua L.)为
材料,利用不同浓度的PEG-6000对二者种子和幼苗进行胁迫,统计种子的发芽率并测定苗期叶片相对含水量,从
而筛选出合适的PEG-6000胁迫浓度。测定幼苗胁迫后的7种生理生化指标,然后与拟南芥进行比较,综合评价其
抗旱性。结果发现,大蒜芥和线果芥幼苗具有较强的抗旱性;脯氨酸、MDA、SOD、POD等指标可作为大蒜芥抗旱
性研究的良好参数;脯氨酸、可溶性糖、MDA、SOD、CAT等指标可用来对线果芥进行抗旱性研究。
关键词: 短命植物;大蒜芥;线果芥;抗旱性;生理指标
中图分类号:Q949.748.3 文献标识码:A
A Study on the Drought-resistant Analysis and the Indexes of
Two Cruciferous Ephemeral Plants
XU Chun-hua,CHEN Quan-jia,GUO Zhong-jun,
GAO Wen-wei,SU Xiu-juan,QU Yan-ying
(Colege of Agronomy,Xinjiang Agricultural University,Urumqi 830052,China)
Abstract: In this study,the Sisybrium altissimumL.and Conringia planisiliqua L.of the two Crucifer-
ous ephemeral plants were used as test materials,whose seeds and seedlings were stressed by PEG-6000
with different concentrations and germination percentage of seeds were counted and the relative moisture
content of leaf in seedling period were tested,thus screening the concentration suitable for PEG-6000stress
and determining seven physiological and biochemical indexes after seedlings were stressed then compared
them with Arabidopsis thalianathus comprehensively assessing its drought-resistance.Finaly it was dis-
covered that the seedlings of Sisybrium altissimumL.and Conringia planisiliqua L.had stronger drought
resistance;The indexes of their proline,MDA,SOD,POD could be used as good parameters for drought re-
sistance research of Sisybrium altissimum L.;The indexes of proline,soluble sugar,MDA,SOD,CAT
could be used as drought-resistance research of Conringia planisiliqua L.
Key words: ephemeral plants;Sisybrium altissimumL.;Conringia planisiliqua L.;drought resistance;
physiological indices1
早春短命植物能利用早春雨水或雪水在夏季干
旱到来之前即可完成生长开花结果等,生活周期短。
目前对短命植物的研究大多集中在生态学[1]、植物
地理[2,3]、生殖生态学[4]等方面,而对短命植物抗旱
性研究报道较少。大蒜芥(Sisybrium altissimum
L.),属十字花科草本植物,生长在荒漠草原带的草
地、荒地及路边等,海拔600~1500m。线果芥
(Conringia planisiliqua L.),属十字花科草本植
物,生在山坡,海拔900~1000m。
目前有关植物抗旱鉴定的指标有很多,但是尚
未定论具体植物类群的具体抗旱指标。本研究以生
长在新疆的短命植物大蒜芥和线果芥为材料,结合
二者在抗旱胁迫下的形态变化和几种生理生化指标
的变化,分析这些生理生化指标与抗旱性的关系,从
收稿日期:2011-02-14
基金项目:国家转基因专项(2008ZX08005-004);国家自然科学基金项目(31060151)
通讯作者:曲延英,E-mail:xjyyq5322@126.com
新 疆 农 业 大 学 学 报 2012年
而明确这些指标在二者抗旱过程中的作用和意义,
为今后开展进一步抗旱机制研究提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材 料
线果芥种子采自新疆乌鲁木齐市烈士陵园荒
地。大蒜芥种子采自新疆阜康戈壁。采后置于4℃
保存。
1.2 方 法
1.2.1 种子的干旱胁迫
大蒜芥和线果芥种子经75%酒精处理,之后用
无菌水润洗数次,再播种于铺有两层滤纸的培养皿
中,每个培养皿播种50粒,滤纸先用0,5%,10%,
15%,20%PEG-6000水溶液完全浸润,然后置于光
照培养箱(白天25℃,16h;夜间18℃,8h光照强
度8 000lx)中培养。每天观察萌发状况及其表型,
统计相关数据。
1.2.2 幼苗的干旱胁迫
大蒜芥和线果芥种子播种于 KLASMANN公
司生产营养土+蛭石(1∶1)的混合土中,各播98
盆,每盆15株。其中28盆用于叶片相对含水量测
定,对生长4周的幼苗采用0%,5%,10%,20%,
25%,30%PEG-6000浇灌处理(每个处理4盆),胁
迫0,1,2,3,4d后,每个处理随机选择20株,每株
采取2片叶,共40片,测定叶片相对含水量[5],每次
3个重复。观察其生长状况,记录数据。对生长4
周的70盆幼苗用25%PEG-6000浇灌处理,胁迫0,
1,2,3,4d后用于生理生化指标的检测,3次重复。
1.2.3 测定方法
可溶性糖、脯氨酸、可溶性蛋白含量及超氧化物
歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性测定参照邹
奇方法[6];测丙二醛(MDA)含量参考赵世杰等的方
法[7];测过氧化物酶(POD)活性用愈创木酚法[8]。
1.2.4 数据处理
采用SPSS16.0统计软件对所测数据进行单因
子方差分析(One-way ANOVA)。
2 结果与分析
2.1 PEG-6000胁迫下大蒜芥和线果芥种子萌发
情况
不同浓度PEG-6000分别对大蒜芥和线果芥种
子发芽进行胁迫。结果表明,干旱胁迫对大蒜芥和
线果芥种子的萌发皆有抑制作用。二者在正常条件
下发芽率分别为92%和89%,PEG-6000浓度为
5%时,二者的发芽率基本不受影响。浓度为10%
时,发芽率分别降至78%和64%。浓度达到15%
时,大蒜芥和线果芥的萌发率分别降至52%和
48%,浓度达到20%时,二者发芽率皆降至0。15%
~20%的PEG-6000浓度为二者种子萌发期胁迫的
临界值。随着PEG-6000浓度的升高,大蒜芥和线
果芥根变短,子叶颜色由深绿变为淡绿色。
2.2 PEG-6000胁迫下大蒜芥和线果芥幼苗生长
情况
当PEG-6000浓度为5%时,胁迫处理2d后,
二者的生长状况与对照无表型上的差别。随着浓度
的升高,叶片开始发生不同程度的萎蔫,当浓度达到
25%时,大蒜芥叶片颜色变暗,大部分叶片萎蔫,而
线果芥叶片有部分萎蔫,还有部分发生卷曲。至浓
度达到30%时,大蒜芥和线果芥叶片严重失水。二
者苗期的PEG-6000致死浓度应为30%以上,对干
旱胁迫表现出一定的耐受性。
2.3 PEG-6000胁迫下大蒜芥和线果芥幼苗相对
含水量变化
随着PEG-6000浓度的增加,大蒜芥和线果芥
的叶片相对含水量均呈现下降趋势(图1、图2)。
图1 PEG-6000胁迫后大蒜芥叶片相对含水量的变化
Fig.1 Changes of leaf relative water content of Sisybrium al-
tissimumseedlings after drought stress(RWC)
图2 PEG-6000胁迫后线果芥叶片相对含水量的变化
Fig.2 Changes of leaf relative water content of Conringia
planisiliqua seedlings after drought stress(RWC)
801
第2期 许春华,等:两种十字花科短命植物抗旱性分析及其指标研究
在PEG-6000浓度为5%时,二者的叶片相对含
水量出现极小幅度的下降,之后随着PEG-6000浓
度的增加二者的叶片含水量出现持续降低。大蒜芥
和线果芥的叶片相对含水量在PEG-6000浓度达到
25%时,下降速率增大。相较而言,线果芥较大蒜芥
下降速率缓慢。在PEG-6000浓度为0~20%时,大
蒜芥和线果芥的叶片相对含水量均无显著差异。选
择25%的PEG-6000浓度作为二者后期生理生化指
标检测的合适胁迫浓度。
2.4 PEG-6000对大蒜芥和线果芥幼苗渗透调节
物质含量的影响
由图3知,大蒜芥受胁迫1d后可溶性糖达到
最大值,比胁迫前高出65%(P <0.01),在随后
3d,随着胁迫时间的延长而降低。脯氨酸含量在胁
迫2d后达到最大值,为胁迫前的4倍,随后2d,脯
氨酸含量有小幅减少,但含量仍远高于胁迫前,说明
PEG-6000胁迫导致大蒜芥细胞内的脯氨酸含量出
现积累。可溶性蛋白含量在整个胁迫时间里含量变
化较小,即PEG-6000胁迫对大蒜芥可溶性蛋白含
量的影响不明显。
图3 25%PEG-6000胁迫对大蒜芥幼苗渗透调节物质含量
的影响
Fig.3 Effect of 25% PEG-6000 on the content of osmotic
adjustment substance of Sisybrium altissimumseed-
lings
由图4知,经过25%的PEG-6000胁迫之后,线
果芥的可溶性糖含量随着时间延长而增加。PEG-
6000胁迫后,随着时间的延长,线果芥的脯氨酸含
量呈现大幅增加的趋势,胁迫1d后脯氨酸含量增
加为胁迫前的6倍,胁迫2d后增至胁迫前的10倍,
胁迫3d后脯氨酸含量达最大值(P<0.01)。可溶
性蛋白含量在 PEG-6000胁迫后变化不大,PEG-
6000胁迫对其含量的影响不明显。
图4 25%PEG-6000胁迫对线果芥幼苗渗透调节物质含量
的影响
Fig.4 Effect of 25% PEG-6000 on the content of osmotic
adjustment substance of Conringia planisiliqua seed-
lings
2.5 PEG-6000胁迫对大蒜芥和线果芥幼苗 MDA
含量的变化
由图5知,在整个PEG-6000胁迫过程中,大蒜
芥 MDA 含量持续增加。在胁迫1d后,线果芥
MDA含量增至最大,显著高于胁迫前(P<0.05),
随后线果芥 MDA含量开始下降,胁迫4d后线果
芥 MDA含量低于胁迫前。
图5 25%PEG-6000胁迫对大蒜芥和线果芥幼苗 MDA含
量的影响
Fig.5 Effect of 25% PEG-6000 on the content of MDA of
Sisybrium altissimumseedlings and Conringia plani-
siliqua seedlings
2.6 PEG-6000对大蒜芥和线果芥幼苗 SOD、
POD、CAT活性的影响
由图6知,大蒜芥的SOD活性随着时间的延长
逐渐增加,至胁迫3d后达到最大(P<0.01),整个
胁迫过程中,SOD活性始终远高于胁迫前。胁迫
1d后线果芥的SOD活性达最大,约为胁迫前的两
倍(P<0.01),随着时间的延长,SOD活性呈下降
趋势,但整个胁迫过程中SOD活性均高于胁迫前。
901
新 疆 农 业 大 学 学 报 2012年
图6 25%PEG-6000胁迫对大蒜芥和线果芥幼苗SOD活
性的影响
Fig.6 Effect of 25%PEG-6000 on the activity of SOD of Si-
sybrium altissimumseedlings and Conringia planisil-
iqua seedlings
由图7知,在PEG-6000胁迫试验期的前3d,
大蒜芥POD活性随着时间的延长逐渐增加并达峰
值,为胁迫前的近3倍(P<0.01),此时POD活性
极显著高于胁迫前。在PEG-6000胁迫4d中,大
蒜芥的POD活性始终高于胁迫前。在PEG-6000
胁迫试验期的前2d,线果芥POD活性随时间延长
逐渐增加至最大值,此时POD活性显著高于胁迫前
(P<0.05)。在整个PEG-6000胁迫过程中,线果
芥POD活性皆高于胁迫前。
图7 25%PEG-6000胁迫对大蒜芥和线果芥幼苗POD活
性的影响
Fig.7 Effect of 25%PEG-6000 on the activity of POD of Si-
sybrium altissimumseedlings and Conringia planisil-
iqua seedlings
由图8知,在整个PEG-6000胁迫过程中,大蒜
芥的CAT活性出现先减小后增加又减小的变化趋
势,变化幅度较小。受PEG-6000胁迫之后,线果芥
CAT活性呈现波浪式变化趋势,但在胁迫试验期的
后3d,线果芥CAT活性皆高于胁迫前水平。
图8 25%PEG-6000胁迫对大蒜芥和线果芥幼苗CAT活
性的影响
Fig.8 Effect of 25%PEG-6000 on the activity of CAT of Si-
sybrium altissimumseedlings and Conringia planisil-
iqua seedlings
3 讨 论
在本研究中,PEG-6000胁迫之后大蒜芥和线
果芥均表现出一定抗旱性,二者萌发时的 PEG-
6000胁迫临界浓度值在15%~20%。刘海龙等在
研究拟南芥的抗旱性时指出拟南芥种子萌发时
PEG胁迫的临界浓度值为25%[9],与拟南芥相比,
在种子萌发阶段大蒜芥和线果芥的抗旱性可能小于
拟南芥。从表型观察初步判断,大蒜芥和线果芥苗
期PEG-6000胁迫的致死浓度为30%以上,而拟南
芥幼苗的致死浓度为25%[9],可能大蒜芥和线果芥
在幼苗期具有高于拟南芥的抗旱性。
干旱逆境下,植物叶片含水量会下降,一般情况
下抗旱性强的植物较抗旱性弱的植物叶片含水量下
降速度慢[10]。本研究中,PEG-6000浓度为25%
时,线果芥叶片的萎蔫程度小于大蒜芥,其叶片相对
含水量的下降速率也较大蒜芥缓慢,由表型和叶片
含水量结果综合分析知,线果芥幼苗的抗旱性强于
大蒜芥幼苗,与之前刘海龙的研究结果相比较,可以
看出线果芥和大蒜芥的抗旱能力强于拟南芥。大蒜
芥和线果芥苗期的抗旱性强于种子萌发期,研究幼
苗阶段的抗旱性更具意义。
在干旱胁迫条件下,植物生长受到抑制,植物组
织可以通过降低细胞的渗透势适应外界环境,这一
现象称为渗透调节[11]。可溶性糖在逆境下通过降
低细胞的渗透势来维持细胞膨压,其含量越高,细胞
失水的可能性越小,成活的可能性就越大,也就是抗
性得到提高[12]。植物体内的可溶性蛋白大多数是
参与各种代谢的酶类,具有多种生物功能。本研究
011
第2期 许春华,等:两种十字花科短命植物抗旱性分析及其指标研究
中,干旱胁迫后大蒜芥脯氨酸大量积累,表明大蒜芥
可通过增加脯氨酸抵御干旱伤害。干旱胁迫后线果
芥脯氨酸与可溶性糖大量积累,表明线果芥通过增
加二者来维持渗透压,从而保护其免受干旱带来的
损害。干旱胁迫之后大蒜芥和线果芥幼苗的可溶性
蛋白含量出现不规则的增减现象,并且整个过程中
可溶性蛋白含量偏低,说明可溶性蛋白与二者抗旱
性关系不明显,不宜作为二者抗旱性的鉴定指标。
植物器官在逆境下遭受伤害,往往会发生膜脂
过氧化作用,MDA是膜脂过氧化的最终分解产物,
MDA积累的多少在一定程度上反映了植物细胞受
损情况[13]。试验结果表明,在整个PEG-6000胁迫
过程中大蒜芥 MDA含量持续增加,说明大蒜芥在
胁迫后细胞膜系统持续发生过氧化作用。胁迫起
初,线果芥 MDA含量急剧增加,此时PEG-6000胁
迫导致线果芥幼苗发生质膜过氧化作用,说明胁迫
对其细胞膜造成了伤害。
在逆境条件下,体内抗氧化系统清除活性氧能
力下降,这种平衡被打破[14]。在环境胁迫下,植物
细胞内将大量产生并累积活性氧自由基[15]。POD、
SOD、CAT是植物体受到外界逆境胁迫时的保护
酶。植物细胞内抗氧化保护酶在清除活性氧、保护
细胞免遭逆境伤害方面负有重要功能[13]。大蒜芥
的SOD、POD活性先出现上升,然后缓慢下降并始
终保持较高的酶活性,同时其CAT活性先降低然
后升高,最后维持胁迫前水平。而线果芥SOD和
POD活性起初迅速上升而后逐渐降低,CAT活性
起初下降随后呈不规则升降变化,但CAT始终维
持一个较高的活性。表明在一定范围内,大蒜芥和
线果芥的抗氧化系统在抵御干旱胁迫时发挥着更重
要的作用。
4 小 结
PEG-6000模拟干旱胁迫对大蒜芥和线果芥幼
苗各种生理指标的影响有差异,脯氨酸、MDA、
SOD、POD等指标可作为大蒜芥抗旱性研究的参
数;脯氨酸、可溶性糖、MDA、SOD、CAT等指标可
用来对线果芥进行抗旱性分析研究。同时,试验表
明在PEG-6000胁迫下,大蒜芥和线果芥在一定程
度上表现出渗透调节物质协同抗氧化系统来抵御干
旱胁迫。
大蒜芥和线果芥在适应生境的同时产生了独特
的抗逆机制。短命植物对生境水分、养分条件的改
善和防风固沙有重要作用[16]。所以对其展开研究
并进行种质资源的开发,对改善生态环境有很大的
作用。
由于植物的抗旱性受多种因素的调控和影响,
机制较为复杂,本研究只是对两种典型的十字花科
类短命植物进行了抗旱性的初探,对其进行全面系
统的抗旱性评价还需要进一步的研究和证实。
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