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不同甘蔗品种叶片气孔对水分胁迫的响应



全 文 :广 西 植 物 Guihaia Nov.2014,34(6):821-827           http://journal.gxzw.gxib.cn 
DOI:10.3969/j.issn.1000G3142.2014.06.016
张风娟,李健,杜成忠,等.不同甘蔗品种叶片气孔对水分胁迫的响应[J].广西植物,2014,34(6):821-827
ZhangFJ,LiJ,DuCZ,etal.Stomatalresponsetowaterstressinleavesofdiferentsugarcanecultivars[J].Guihaia,2014,34(6):821-827
不同甘蔗品种叶片气孔对水分胁迫的响应
张风娟1,李 健1,杜成忠1,杨丽涛1,2∗,李杨瑞1,2,邢永秀1,2
(1.广西大学 农学院/广西大学 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530004;2.中国农业科学院
甘蔗研究中心/广西农业科学院 甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西作物遗传
改良生物技术重点开放实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007)
摘 要:干旱是甘蔗面临最主要的环境胁迫之一,为了解不同甘蔗品种在干旱胁迫时的气孔响应,该研究以
F172、GT21、YT93/159和YL6四个抗旱性有显著差异的甘蔗品种为材料,采用桶栽,在伸长期进行四种不同
程度的干旱胁迫(不浇水)处理:土壤持水量在①65%~70%为轻度干旱;②45%~50%为中度干旱;③25%~
30%为重度干旱;④以土壤含水量为75%为对照(CK).检测不同品种不同处理甘蔗的叶片相对持水量变化,
并利用扫描电镜技术观察甘蔗叶片下表皮气孔特性.结果表明:在干旱胁迫下,四个甘蔗品种叶片气孔导度
急剧下降,重度干旱时耐旱性强的F172和GT21的气孔导度低于耐旱性弱的YT93/159和YL6的;复水后
3d,F172和GT21的气孔导度上升至82.07和88.85mmol􀅰mG2􀅰sG1,而YT93/159和YL6的仅有18.88和
33.08mmol􀅰mG2􀅰sG1.干旱还导致气孔下陷、闭合,气孔器的长、宽明显减小,且品种间气孔器长度变化差异
显著;干旱胁迫下气孔密度增大,尤以耐旱性最强的F172在重度干旱时达到显著差异.重度干旱时F172与
GT21的气孔闭合百分比是YT93/159和YL6近3~4倍.在水分胁迫下,叶片相对含水量降低,但F172和
GT21在重度干旱时仍可以保持相对较高的含水量,其它两个品种相对较低,尤以YT93/159的最低.在复水
后叶片含水量都有所恢复.这些研究结果表明不同甘蔗品种抗旱能力与叶片气孔特性和含水量密切相关.
关键词:甘蔗;气孔导度;气孔器;叶片相对含水量
中图分类号:Q945.78  文献标识码:A  文章编号:1000G3142(2014)06G0821G07
Stomatalresponsetowaterstressinleaves
ofdifferentsugarcanecultivars
ZHANGFengGJuan1,LIJian1,DUChengGZhong1,YANGLiGTao1,2∗,
LIYangGRui1,2,XINGYongGXiu1,2
(1.CollegeofAgriculture,GuangxiUniversity,StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropicalAgroG
Bioresources,Nanning530004,China;2.SugarcaneResearchCenter,ChineseAcademyofAgriculturalSciencesGGuangxi
AcademyofAgriculturalSciences,KeyLaboratoryofSugarcaneBiotechnologyandGeneticImprovement(Guangxi),
MinistryofAgriculture,GuangxiCropGeneticImprovementandBiotechnologyLaboratory,
GuangxiKeyLaboratoryofSugarcaneGeneticImprovement,Nanning530007,China)
Abstract:Droughtisoneofthemainenvironmentalstressesforsugarcane.InordertounderstandthestomatalreG
sponseofdroughtstressindiferentsugarcanecultivars,thepresentresearchwasconductedusingdifferentlydroughtG
收稿日期:2013G10G07  修回日期:2013G12G21
基金项目:国家“863”计划课题(2013AA102604);国家国际合作项目(2013DFA31600);广西八桂学者和特聘专家专项经费;广西自然科学基金
创新团队项目(2011GXNSFF018002);广西自然科学基金重点项目(2012GXNSFDA053011);广西科技攻关项目(桂科攻1222009G1B);广西农科
院团队项目(桂农科2011YT01);广西甘蔗遗传改良重点实验室项目(12GKG05G01).
作者简介:张风娟(1987G),女,河南濮阳县人,硕士研究生,(EGmail)306zfj2006@163.com.
∗通讯作者:杨丽涛,教授,主要从事植物生理和蛋白质组学研究,(EGmail)liyr@gxu.edu.cn.
resistantsugarcanecultivarsF172,GT21,YT93/159andYL6asplantmaterials,whichweregrowninpotsinthe
greenhouseatGuangxiUniversityin2012.Atelongationstage,theplantsweretreatedwithvarieddegreesofdrought
stress:① milddrought,65%-70%ofthesoilwatercapacity;② moderatedrought,45%-50%ofthesoilwater
content;③severedroughtwith25%-30%ofsoilwatercapacityand;④controlwith75%ofsoilwatercapacity.
Therelativewatercontentinplantleafwasdetected,andthestomatalcharacteristicsinlowerepidermisoftheplant
leafwereobservedwithscanningelectronmicroscopy.Theresultsshowedthatthestomatalconductanceunderwater
stressdeclinedsharplyin4cultivars.ThestomatalconductanceinthedroughtGtolerantF172andGT21waslower
thanthatinthedroughtGsusceptibleYT93/159andYL6underseveredroughtstress.AfterreGwateringin3days,the
stomatalconductanceinF172andGT21wereincreasedto82.07and88.85mmol􀅰mG2􀅰sG1,whilethatinYT93/159
andYL6wasonly18.88and33.08mmol􀅰mG2􀅰sG1,respectively.ThewaterstressresultedinsunkenandclosedstoG
mata,andreductioninstomatalengthandwidth,whichshowedsignificantdiferencesindiferentcultivars.ThedenG
sityofstomatawasincreasedsignificantlyinmostdroughtGtolerantF172underseveredroughtstress.Theratioof
stomataclosurewasnearly3-4timesinF172andGT21asmuchasthatinYT93/159andYL6.Underdrought
stress,theleafrelativewatercontentwasreduced.However,thedroughtGtolerantcultivarsF172andGT21
maintainedhigherleafrelativewatercontentunderseveredroughtstressthantheothertwo,andYT93/159showed
thelowest,andthewatercontentcouldberestoredafterreGwatering.TheresultsindicatedthatthedroughtGresistance
ofsugarcanecultivarswascloselyrelatedtothestomatalcharacteristicsandwatercontentinleaf.
Keywords:sugarcane;stomatalconductance;stomatalapparatus;leafrelativewatercontent
  甘蔗(Saccharumofficinarum)盛产于热带及
亚热带,是世界乃至我国最为重要的糖料作物,我国
目前的甘蔗糖产量占全国食糖产量的90%(李杨瑞
等,2009).我国蔗区大多数分布在丘陵旱地的面积
较大,广西有90%以上的蔗区分布在耕作层浅薄且
缺乏灌溉条件的丘陵旱坡地,旱害是广西甘蔗生产
发展的主要制约因素之一,旱害造成甘蔗产量下降,
严重时可导致绝产(李杨瑞,2010;Li,2006).这些
地区土壤保水力差,不能充分利用自然降水.加强
对甘蔗抗旱机理的研究已成为亟待解决的问题.
植物叶片表皮气孔器与蒸腾、光合、呼吸和生理
活动等密切相关.在甘蔗(陈严平等,2000)、玉米
(陈倩倩等,2011)、水稻(赵姝丽等,2010)、小麦
(Yangetal.,2001)等作物上已有报道.Yaoetal.
(2013)发现干旱胁迫能诱导玉米叶片副卫细胞中
H2O2的积累,通过信号的级联放大引起气孔关闭.
Liuetal.(2012)研究证实光敏色素B突变的水稻
气孔密度降低,导致单位叶面积蒸腾作用降低,水分
损失减少,从而增加对干旱胁迫的抵抗能力.吕金
印等(2003)的研究表明,在小麦开花灌浆期,严重干
旱对光合与蒸腾的影响过程中,气孔的限制因素可
能占到主要地位.吴志海等(2001)的研究发现,蒸
腾速率与气孔导度呈正相关.Pouetal.(2008)发
现抗旱性较强的葡萄品种RichterG110在干旱胁迫
和复水时,能够通过气孔的变化来调节水分利用率
响应干旱的胁迫,随着基质中可利用水分含量的降
低,气孔导度不断下降.但干旱和复水时气孔导度
的调节机制是不同的.当植物受到干旱胁迫时,可
能是由于植物的根部感受到了干旱的信号,产生一
些化学物质并通过蒸腾流向地上运输,诱导气孔关
闭,减少了水分的散失(Daviesetal.,1991;Tardieu
etal.,1992),这时保卫细胞中胞质Ca2+浓度的变
化也是细胞内干旱信号传导过程中一个重要的环节
(王凤茹等,2000).作物对水分胁迫G复水这样的变
水条件的响应方式是,在胁迫解除后存在快速生长,
以部分弥补胁迫造成的损失,并认为这是对环境变
化的一种适应,适应的结果体现在植物高度、叶面
积、生物量、恢复生长的速率等方面的变化上.水分
胁迫解除后作物形态和生长速率的变化并不是马上
发生的,而是在1周左右才能显著观察出来,即干旱
对作物生长有滞后作用,复水后的生长表现是滞后
事件的恢复或补偿(陈晓远等,2001).
在不同甘蔗品种抗旱性机理探讨方面已有一些
关于形态以及生理生化方面的报道(Srivastavaet
al.,2009;李杨瑞等,2009;朱理环等,2010),但对不
同抗旱性品种间的气孔的闭合调节差异了解不多.
本研究采用不同抗旱性的甘蔗品种,进行桶栽,在甘
蔗伸长期进行不同程度的干旱胁迫的处理,通过观
察气孔的变化来研究干旱胁迫及复水后对不同耐旱
性甘蔗品种的影响,以期为探讨甘蔗品种抗旱的生
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理机制提供参考依据.
1 材料与方法
1.1材料
供试蔗种为台糖172(F172,耐旱性特强),桂糖
21号(GT21,耐旱性强),粤糖93/159(YT93/159,
不耐旱),园林6号(YL6,不耐旱).
1.2实验设计
实验设在广西大学农学院智能温室内,2012年
4月21日采用单芽蔗茎种植.采用桶栽,桶的规格
为高34.4cm、上径49.3cm、下径34.5cm,每桶3
芽,每处理20桶.桶中装入栽培土壤(大田表土∶
河沙∶牛粪=5∶4∶1),每个桶的底部都钻3~5个
直径为0.4cm的圆孔,每桶装2/3体积土壤.在伸
长期对四个甘蔗品种进行不同程度的干旱胁迫(不
浇水):土壤含水量在65%~70%为轻度干旱(3d),
45%~50%为中度干旱(5d),25%~30%(7d)为
重度干旱;以正常浇水为对照(CK):土壤持水量为
75%.干旱胁迫后复水.于伸长期不同干旱胁迫处
理及复水后1、3d取样分析.
1.3测定项目及方法
1.3.1气孔导度 用美国Decagon公司生产的SCG1
气孔导度仪测定.
1.3.2气孔特征变化 在土壤含水量达到轻度干旱、
中度干旱、重度干旱及复水1、3d进行取样,每个品
种随机选取3株甘蔗,取其+1叶,在+1叶15~20
cm处取样,避开主脉,在中脉至叶缘1/2处取
0.5cm×5cm大小叶片,并切成5mm×5mm的
小块,投入到2.5%戊二醛固定液中,抽气30min,
固定48h后换一次固定液.在4℃条件下完成固
定.SEM样品的制备参照徐柏森等(2008)的方法,
略有改动:为防止叶片变形,采用六甲基二硅胺烷
(HMDS)作干燥剂,在室温中,将样品放在通风厨
内进行空气干燥60min,干燥后的样品用导电胶贴
在样品台上(李向党,1998).用 H5型离子溅射仪
镀膜5min,然后用日立SG3400N扫描电镜拍照,每
个处理观察10个样品,每张扫描5个视野.并对气
孔大小、气孔密度、气孔的闭合等情况进行统计、
分析.
1.3.3叶片相对含水量 叶片相对含水量采用烘干
称重法测定(李合生,2000).甘蔗叶片相对含水量
(RWC)采用重量法进行测定,RWC=(叶片鲜重-
干重)/(吸胀后饱和重-干重)×100%.
1.4统计分析
数据采用Excel2003作图和SPSS15.0软件对
数据进行单因素方差分析(OneGwayANOVA).
2 结果与分析
2.1干旱胁迫对气孔导度的影响
从图1看出,随着干旱胁迫加剧,四个甘蔗品种
的气孔导度随之下降,在复水后又上升.正常生长
条件下四个品种的气孔导度差异不显著.在重度干
旱时两个抗旱品种F172和GT21的气孔导度分别
为8.00和8.67mmol􀅰mG2􀅰sG1,两个不抗旱品种
93/159和YL6分别为10.68和12.67mmol􀅰mG2
􀅰sG1.在复水后3d,F172和GT21的气孔导度分
别上升为 82.07 和 88.85 mmol􀅰mG2􀅰sG1,而
YT93/159和YL6分别为18.88和33.08mmol􀅰
mG2􀅰sG1.气孔导度表示的是叶片气孔张开的程度,
主要影响植物与环境的气体交换,包括水蒸气、氧气
和二氧化碳.这些气体在植物体内的变化对光合作
用、呼吸作用及蒸腾作用等代谢活动有明显的影响.
图1 不同程度干旱胁迫下不同甘蔗品种叶片的气孔导度
Fig.1 Stomatalconductanceindiferentsugarcane
cultivarsunderdiferentdroughtstresses
2.2干旱胁迫对气孔特征的影响
2.2.1气孔表面特征的影响 图2表明,F172随着
水分胁迫的加剧,气孔逐渐闭合,下陷,气孔周围的
小刚毛变长,变浓,并相互连接成片状,沿着气孔长
的刚毛向对边生长,相互交叉层叠,将整个气孔器完
全包合起来.在复水后,包合在一起的刚毛又逐渐
裂开,长的刚毛慢慢地老化,退去,气孔的四周又重
新长出新的刚毛.GT21气孔的变化与F172相似,
3286期         张风娟等:不同甘蔗品种叶片气孔对水分胁迫的响应
图2 水分胁迫下四个甘蔗品种叶片下表皮的扫描电镜图(2000×) A、E、I、M、Q、U.分别为台糖172对照、轻度干旱、中度
干旱、重度干旱、复水后1d和复水后3d的气孔形态;B、F、J、N、R、V.分别为桂糖21号对照气、轻度干旱、中度干旱、重度干旱、复水后1d
和复水后3d的气孔形态;C、G、K、O、S、M.分别为粤糖93/159对照、轻度干旱、中度干旱、重度干旱、复水后1d和复水后3d的气孔形态;
D、H、L、P、T、X.分别为园林6号对照、轻度干旱、中度干旱、重度干旱、复水后1d和复水后3d的气孔形态.
Fig.2 SEMpicturesoflowerepidermisinleavesoffoursugarcanecultivarsunderdroughtstress(2000×) A,E,I,M,Q,U.
arestomatalapparatusofF172incontrol,milddrought,moderatedrought,severedrought,1dayafterreGwateringand3dayafterreGwatering,respecG
tively;B,F,J,N,R,V.arestomatalapparatusofGT21incontrol,milddrought,moderatedrought,severedrought,1dayafterreGwateringand3day
afterreGwatering,respectively;C,G,K,O,S,M.arestomatalapparatusofYT93/159incontrol,milddrought,moderatedrought,severedrought,1day
afterreGwateringand3dayafterreGwatering,respectively;D,H,L,P,T,X.arestomatalapparatusofYL6incontrol,milddrought,moderatedrought,
severedrought,1dayafterreGwateringand3dayafterreGwatering,respectively.
刚毛把气孔完全包合,成蛹状.YT93/159在轻度
干旱时,气孔已开始下陷,气孔周围的小刚毛也开始
变长,但速度较慢;中度干旱时,刚毛较轻度干旱时
无明显变化,重度干旱时刚毛反而变少.复水后
428 广 西 植 物                  34卷
1d,刚毛变得浓密;复水后3d,老的刚毛脱落,长出
新的小刚毛.轻度干旱时YL6气孔周围的小刚毛
生长迅速,随着干旱的加剧,刚毛的变化不明显,气
孔器表皮位置有一定程度的下陷;重度干旱时,刚毛
相互连接成片状,但较短;复水后,老的刚毛脱落,长
出新的刚毛.可见,耐旱性强的甘蔗品种在受到干
旱胁迫时,气孔关闭的同时周围的刚毛相互重叠覆
盖于气孔上,以降低水分通过气孔的散失.
2.2.2对气孔大小的影响 由图3和图4看出,四个
甘蔗品种在重度干旱时,气孔器的长度和宽度变化
均达差异显著水平;F172与GT21随着水分胁迫的
加剧气孔器的长度和宽度逐渐缩小,重度干旱时最
小,在复水后又变大.YT93/159在随着干旱胁迫
的加剧气孔器变宽,在重度干旱以及复水后又变窄.
而YL6的气孔器宽度在复水后1d最小.图5表
明,四个甘蔗品种的气孔密度都随着水分的胁迫而
增加,在复水后又有所降低,但只有F172的在重度
干旱时的差异达到显著,其他三个品种差异不显著.
2.2.3对气孔关闭百分比的影响 由图6可知,在正
常生长条件下四个甘蔗品种的气孔大多数呈开放状
态,当干旱胁迫加剧时气孔逐渐关闭.在重度干旱
时,F172 与 GT21 的 气 孔 闭 合 百 分 比 分 别 是
85.29%和78.65%,而 YT93/159和 YL6分别是
22.45% 和18.62%,差异达到显著水平.复水后,
气孔逐渐张开.复水3d时气孔的闭合百分比差异
不显著.由此看出,耐旱性强的甘蔗品种避旱能力
较强,在受到干旱胁迫时气孔迅速闭合,以减少叶片
中水分的散失,从而维持叶片较高的含水量.
图3 干旱胁迫下四个甘蔗品种叶片下
表皮气孔器的长度差异
Fig.3 Lengthdiferencesoflowerepidermisstomatain
leavesoffoursugarcanecultivarsunderdroughtstress
图4 干旱胁迫下四个甘蔗品种叶片下
表皮气孔器的宽度差异
Fig.4 Widthdiferencesoflowerepidermisstomatain
leavesoffoursugarcanecultivarsunderdroughtstress
图5 干旱胁迫下四个甘蔗品种叶片下
表皮气孔密度(个/视野)的差异
Fig.5 Stomataldensity(numbers/visualfield)
differencesoflowerepidermisinfourleavesof
sugarcanecultivarsunderdroughtstress
图6 干旱胁迫下甘蔗叶片的气孔关闭百分比
Fig.6 Percentageofstomatalclosureinsugarcane
leavesunderdroughtstress
5286期         张风娟等:不同甘蔗品种叶片气孔对水分胁迫的响应
图7 干旱胁迫下不同甘蔗品种叶片的相对含水量
Fig.7 Relativewatercontentinleavesofdiferent
sugarcanecultivarsunderdroughtstress
2.3干旱胁迫对甘蔗叶片相对含水量的影响
图7显示,F172和GT21受到干旱胁迫时,叶
片相对含水量呈先下降后上升再下降的变化,在复
水1d后F172的叶片含水量几乎和正常生长的甘
蔗相同,在复水后3d叶片的含水量又有所下降.
YT93/159和YL6随着水分胁迫加剧,叶片含水量
也随之下降,在重度干旱时,差异达到显著;复水后,
叶片含水量上升,但低于正常生长的含水量.
品种间相比,四个品种正常生长的叶片相对含
水量在70%~80%.在受到重度水分胁迫后,F172
和GT21还可以保持较高的叶片相对含水量,而其
它两个品种较低,尤以YT93/159的最低.F172和
GT21的叶片含水量恢复较快,复水3d时,几乎达
到正常生长的叶片相对含水量,而YT93/159恢复
较慢,YL6最慢,复水3d时,叶片相对含水量还低
于中度干旱时的含水量.显然,F172和GT21的代
谢活性和抗旱性高于YT93/159和YL6.
3 讨论与结论
气孔调节是植物适应环境条件、抵御干旱胁迫
的重要调节机制之一,而环境水分条件是影响气孔
发育的重要因素.在本研究中,4个甘蔗品种经干
旱胁迫处理后气孔导度急剧下降,而在复水后迅速
上升,并且抗旱品种F172和GT21的变化速度要高
于不抗旱的 YL6和 YT93/159.干旱胁迫加剧引
起气孔导度急剧下降这一变化与在水稻(杨建昌等,
1995)、玉米(陈倩倩等,2011)、大丽花(范苏鲁等,
2011)上的研究结果一致.吕金印等(2003)的研究
表明,在小麦开花灌浆期,在严重干旱对光合与蒸腾
的影响过程中,气孔的限制因素可能占到主要地位.
吴志海等(2001)的研究表明,蒸腾速率与气孔导度
呈正相关.由此认为耐旱性强的品种可通过降低气
孔导度而降低蒸腾作用,从而有利于植物体保持水
分,以维持正常的生理代谢.
植物叶片对干旱胁迫的起初响应可能通过气孔
导度的调节来达到(李智元等,2009).但严重的干
旱胁迫必定会引起甘蔗叶片微形态的变化.Evans
(1935)指出气孔下陷、刚毛多而长等是甘蔗抗旱品
种的特征.本研究中,在水分胁迫下,4个甘蔗品种
气孔下陷、闭合,同时气孔周围小的刚毛逐渐变长,
抗旱甘蔗品种F172和 GT21与不抗旱的 YT93/
159和YL6相比,差异显著.另干旱胁迫时气孔器
长度、宽度明显减小(陈倩倩等,2011;Yangetal.,
2001);气孔密度随着干旱胁迫的加强,逐渐增大
(Yangetal.,2001;孟雷等,1999),复水后又有所恢
复;干旱处理后,气孔的开度降低,气孔器逐渐闭合,
并随着胁迫的加剧,气孔器的闭合速率加快(杨惠敏
等,2004;高秀萍等,2001,2007).本研究中F172
和 GT21的气孔闭合速度要快于 YT93/159和
YL6,重度干旱时F172与GT21的气孔闭合百分比
是YT93/159和YL6近3~4倍,可见抗旱性强的
品种有更强的气孔开度的调节能力,因此在干旱胁
迫条件下能够更有效地阻止植物体内水分的散失.
相对含水量是植物组织的饱和含水量与实际含
水量之差占饱和含水量的百分比.甘蔗叶片在干旱
胁迫下由于水分供应减少,不能满足其蒸腾作用所
需水分,导致叶片相对含水量下降(廖洁等,2012).
抗旱的F172和GT21在重度干旱时还可保持较高
的叶片相对含水量,而不抗旱的两个品种则较低;在
复水后F172和GT21的叶片含水量恢复较快,不耐
旱的品种则恢复较慢.这表明抗旱性强的甘蔗品种
通过调节气孔的闭合以降低蒸腾作用,从而保持自
身的水分平衡,并在复水后恢复较快;抗旱性弱的品
种气孔调节反应迟缓,导致叶片相对含水量较低,体
内水分失衡,且复水后的恢复速度较慢.
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