全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Jan．２０１４,３４(１):４－９　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．３９６９/j．issn．１０００Ｇ３１４２．２０１４．０１．００２
周俊辉,王燕平,陈勤,等．用AFLP分析广东省鲜食橄榄品种资源遗传多样性[J]．广西植物,２０１４,３４(１):４－９
ZhouJH,WangYP,ChenQ,etal．GeneticdiversityanalysiswithAFLPonfreshChineseolivecultivarsresourcesinGuangdongProvince[J]．Guihaia,
２０１４,３４(１):４－９
用AFLP分析广东省鲜食橄榄品种资源遗传多样性
周俊辉１∗,王燕平１,３,陈　勤２,周志钦３
(１．仲恺农业工程学院 园艺园林学院,广州５１０２２５;２．广东省潮洲市茶叶科学
研究中心,广东 潮州５１５７２６;３．西南大学 园艺园林学院,重庆４００７１６)
摘　要:从６４对引物组合中筛选出６对谱带清晰、多态性高的引物组合,对６３个橄榄品种扩增,共扩增出
４１７条多态性电泳谱带,多态性比率达１００％,揭示了橄榄品种的遗传多样性.利用UPGMA对供试橄榄品种
聚类,建立AFLP聚类图.结果表明:６３份材料之间的遗传相似性系数为０．０６０６~０．７６１９,相似系数为０．３１２
时,可将供试材料分为７个品种群,其中第１群包括４５个品种,以‘潮阳甜榄’为代表,还可细分成３个组;第２
群包括５个品种,以‘大纳甜’为代表;第３群包括４个品种,以‘潮阳三棱’为代表;第４群包括‘土甜’、‘文祠
三棱’和‘早花三棱’３个品种;第５群包括‘铁条’和‘细粒’两个品种;第６群包括‘广太甜种’、‘西土’、‘鸡心’
和‘车酸１号’４个品种;第７群只有‘凤湖橄榄’１个品种,与其他品种群亲缘关系较远,可能发生变异.
关键词:AFLP;橄榄;遗传多样性;亲缘关系
中图分类号:Q９４９　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１４)０１Ｇ０００４Ｇ０６
GeneticdiversityanalysiswithAFLPonfreshChinese
olivecultivarsresourcesinGuangdongProvince
ZHOUJunＧHui１∗,WANGYanＧPing１,３,CHENQin２,ZHOUZhiＧQin３
(１．CollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture,ZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineering,
Guangzhou５１０２２５,China;２．ChaozhouInstituteCenterofTea,Chaozhou５１５７２６,China;３．Collegeof
HorticultureandLandscapeArchitecture,SouthwestUniversity,Chongqing４００７１６,China)
Abstract:Screenedfrom６４pairsoftheAFLPprimer,sixpairs(E/AACＧM/CAT,E/AACＧM/CTT,E/ACAＧM/
CAA,E/AGGＧM/CAA,E/ACCＧM/CAA,E/ACTＧM/CAT),whichproducedclearandreliablepolymorphicbands,
wereselectedforanalysisgeneticrelationshipandgeneticdiversityamongthe６３Chineseolivecultivars．４１７amplifiＧ
cationbandswereproducedwith１００％polymorphicrate．ItwasindicatedthattherewasrichgeneticdiversityinChiＧ
neseolivecultivargermplasm．Thegeneticrelationshipofthe６３Chineseolivecultivarswasanalyzedwithsoftware
NTSYSpcＧ２．１０a,andaUPGMAtreewasestablished．Accordingtothistree,theChineseolivecultivarsinthisstudＧ
iedcouldbedividedinto７cultivargroupswithasimilarcoeficient０．３１２,theGroup１delegatedby‘Chaoyangsweet
olive’including４５cultivars,couldbedividedinto３types,theGroup２delegatedby‘Danatian’including５cultivars,
theGroup３delegatedby‘Chaoyangsanleng’including４cultivars,theGroup４including３cultivars,theGroup５inＧ
cluding２cultivars,theGroup６including４cultivars,andtheGroup７includingonecultivaronly,thatwas‘Fenghu
olive’,whichhadalongdistanceinrelationshipwithothercultivars,maybeoccurredvariationincultivationpractice．
Keywords:AFLP;freshChineseolive;geneticdiversity
收稿日期:２０１３Ｇ０８Ｇ１６　　修回日期:２０１３Ｇ１１Ｇ２５
基金项目:广东省科技计划项目(２０１０B０２０３０５０１２);广东省农业科技项目(２００８４４５１２).
作者简介:周俊辉(１９６３Ｇ),男,江西临川人,博士,教授,主要从事园艺植物生理学研究,(EＧmail)junhuizhou＠１６３．com.
∗通讯作者
　　橄榄(Canariumalbum)是橄榄科(Burseraceae)
橄榄属(Canarium)植物,原产于中国,是我国著名的
亚热带特产果树,具有很高的营养和药用价值,以广
东、福建两省栽培最多(Zhouetal．,２０１２).橄榄在长
期栽培中多用实生繁殖,产生大量的品种,品种间的
亲缘关系不甚清楚,存在同种异名或同名异种等现
象,致使育种工作受到很大限制.广东省橄榄种质资
源的研究主要集中在品种调查、品种资源评价与保存
等方面.如池辉云等(２００７)在茂名市营建橄榄基因
库,收集了１１个农家品种８１个优良单株;周俊辉等
(２００９)用层次分析法对来自潮汕地区的１６个橄榄品
种资源进行分析和排名.在橄榄亲缘关系及遗传多
样性分析方面,宋亚娜等(２００７)从１８SＧ２６SrDNA及
ITS序列水平上将福建１５个橄榄品种分为四类;聂
珍素(２０１０)利用RAPD研究福建省２７份橄榄种质获
得９９．４％的多态性位点;赵谦(２００８)利用ISSR分子
标记对粤东地区２１份橄榄和１份乌榄进行亲缘关系
鉴定;刘天亮(２０１０)利用ISSR分子标记研究福建６０
份橄榄种质获得６７．６％的多态性位点.张平湖等
(２０１０)采用L１６(４５)正交试验设计对１１个橄榄品种
SRAP扩增体系进行优化.杨培奎等(２０１１)利用筛
选得到的８个ISSR引物对粤东地区６４份橄榄种质
进行了遗传多样性分析,共扩增出１２８条谱带,９９条
多态性条带,多态性比率为７７．３４％,表明粤东地区橄
榄种质资源总体遗传水平较低;并筛选出１６个品种
构建粤东地区橄榄核心种质.
每种分子标记各有其优缺点,如RAPD标记易
受外界条件的影响,结果不稳定,ISSR虽较为稳定,
但需要相当多的引物,需多次测定才能绘制较为有
用的指纹图谱(艾呈祥等,２００８).AFLP具有多态
位点丰富、灵敏度高、重复性较好的特点(Pieteret
al．,１９９５),被广泛应用于各种果树的遗传多样性和
亲缘关系分析 (Monteetal．,２０００;艾呈祥等,
２００８)、种质资源鉴定(Guoetal．,２００２)、遗传图谱
的构建(Yamamotoetal．,２００２;Liebhardetal．,
２００３)、遗传育种(廖振坤等,２００６)等研究.本研究
利用AFLP分子标记技术,对广东省不同地区的６３
个橄榄品种进行遗传多样性和亲缘关系分析,以期
从分子水平上为橄榄亲缘关系提供技术资料.
１　材料与方法
１．１材料
材料为６３份橄榄品种(表１),于２０１０年１０月
采自广东省的潮州、汕头、揭阳等地.采摘幼嫩叶片
放于装有冰袋的保温箱中,迅速带回实验室,清洗后
用液氮处理,放于Ｇ８０℃冰箱内保存备用.
１．２方法
１．２．１DNA提取　利用天根植物基因组DNA提取
试剂盒提取基因组DNA并稍加改进,步骤如下:取
冷冻橄榄叶片３０mg,放入盛有液氮的研钵中充分
研磨;将研磨好的粉末迅速转移到预先装有７００μL
６５℃预热缓冲液 GP１的离心管中,加入７μLβＧ
ME,迅速颠倒混匀后６５℃水浴２０min,每隔１０
min颠倒１次;加入７００μL苯酚∶氯仿∶异戊醇
(２５∶２４∶１),充分混匀,１２０００r􀅰minＧ１离心
５min;加入７μLRNA水解酶,放入３７℃水浴３０
min,去除 RNA;小心取上层清夜,加入等体积氯
仿,充分混匀,１２０００r􀅰minＧ１离心５min;取上清转
入新离心管中,加入７００μL缓冲液GP２,充分混匀;
将混匀的液体转入吸附柱CB３中,１２０００r􀅰minＧ１
离心３０s,弃废液;向吸附柱中加入５００μL缓冲液
GD,１２０００r􀅰minＧ１离心３０s,弃废液,将吸附柱放
入收集管中;向吸附柱中加入７００μL漂洗液PW,
１２０００r􀅰minＧ１离心３０s,弃废液,将吸附柱放入收
集管中,重复漂洗１次;将吸附柱放回收集管中,
１２０００r􀅰minＧ１离心２min,倒掉废液.将吸附柱置
于室温下数分钟,以彻底晾干残余的漂洗液;将吸附
柱转入新的离心管中,向其中加入５０~１００μL预热
５０℃的ddH２O,室温放置２~５min,１２０００r􀅰
minＧ１离心２min,将溶液收集到离心管中分装备用,
经核酸蛋白测定仪检测OD２６０/OD２８０在１．８~２．０之
间,置于Ｇ２０℃冰箱保存.
１．２．２AFLP分析　所有接头和引物由上海英骏生
物技术有限公司合成,引物和接头的序列见表２,扩
增体系的优化参考王燕平等(２０１２).
(１)酶切:总体积２０μL,含纯化后的基因组
DNA５００ng,NEBbuffer２２μL,１００×BSA０．２
μL,EcoRⅠ３U,MseⅠ３U,加ddH２O至２０μL.３７
℃温浴４h,完成后将产物于６５℃下变性２０min,
去除酶活性.
(２)连接:总体积２０μL,包括:酶切产物１０μL、
MseⅠＧadapter(５０pmol􀅰μLＧ１)１μL,EcoRⅠＧaＧ
dapter(５pmol􀅰μLＧ１)１μL,T４DNAligase(５U􀅰
μLＧ１)０．３μL,T４Buffer２μL,加ddH２O至２０μL,１６
℃连接６h.完成后,将产物于６５ ℃下变性１０
min,去除连接酶活性.
５１期　　　　　　　　周俊辉等:用AFLP分析广东省鲜食橄榄品种资源遗传多样性
表１　供试橄榄材料一览表
Table１　ListofChineseolivecultivarsusedinthisstudy
编号 No．　品种名Cultivarname 来源地Source 编号 No．　品种名Cultivarname 来源地Source
１ 马岗２号 Magang２ 饶平县 Raopingcounty ３３ 橙皮Chengpi 普宁县Puningcounty
２ 马岗６号 Magang６ 饶平县 Raopingcounty ３４ 大红心 Dahongxin 普宁县Puningcounty
３ 马岗５号 Magang５ 饶平县 Raopingcounty ３５ 双湖香Shuanghuxiang 普宁县Puningcounty
４ 马岗１号 Magang１ 饶平县 Raopingcounty ３６ 揭西赤Jiexichi 揭西县Jiexicounty
５ 大池甜 Dachitian 普宁县Puningcounty ３７ 杂赤Zachi 普宁县Puningcounty
６ 锡１号 Xi１ 饶平县 Raopingcounty ３８ 凤湖橄榄Fenghuolive 揭西县Jiexicounty
７ 冬节圆１号 Dongjieyuan１ 普宁县Puningcounty ３９ 赤种２号Chizhong２ 普宁县Puningcounty
８ 下赤 Xiachi 潮安县Chaoancounty ４０ 大普 Dapu 饶平县 Raopingcounty
９ 甜种 Tianzhong 潮阳区Chaoyangdistrict ４１ 赤种仔Chizhongzai 普宁县Puningcounty
１０ 烈火Liehuo 饶平县 Raopingcounty ４２ 潮阳甜榄Chaoyangsweetolive 潮阳区Chaoyangdistrict
１１ 大纳甜 Danatian 普宁县Puningcounty ４３ 揭西香甜榄Jiexixiangsweetolive 揭西县Jiexicounty
１２ 双罗Shuangluo 饶平县 Raopingcounty ４４ 大甜 Datian 丰顺县Fengshuncounty
１３ 土甜 Tutian 潮阳区Chaoyangdistrict ４５ 小丁香 Xiaodingxiang 饶平县 Raopingcounty
１４ 四季Siji 揭西县Jiexicounty ４６ 丁香 Dingxiang 饶平县 Raopingcounty
１５ 香种 Xiangzhong 潮安县Chaoancounty ４７ 凤喜赤Fengxichi 普宁县Puningcounty
１６ 东山１号 Dongshan１ 饶平县 Raopingcounty ４８ 下院 Xiayuan 饶平县 Raopingcounty
１７ 揭西青皮Jiexiqingpi 揭西县Jiexicounty ４９ 鸣之烈２号 Mingzhilie２ 饶平县 Raopingcounty
１８ 小黄仔 Xiaohuangzai 潮安县Chaoancounty ５０ 黄都 Huangdu 饶平县 Raopingcounty
１９ 麒麟纳种 Qilinnazhong 普宁县Puningcounty ５１ 鸡心Jixin 普宁县Puningcounty
２０ 广太青皮 Guangtaiqingpi 普宁县Puningcounty ５２ 广太甜种 Guangtaitianzhong 普宁县Puningcounty
２１ 晚花三棱 Wanhuasanleng 揭西县Jiexicounty ５３ 两头尖Liangtoujian 潮安县Chaoancounty
２２ 早花三棱Zaohuasanleng 揭西县Jiexicounty ５４ 纳种 Nazhong 潮阳区Chaoyangdistrict
２３ 马岗３号 Magang３ 饶平县 Raopingcounty ５５ 鸿运 Hongyun 揭西县Jiexicounty
２４ 铁节 Tiejie 普宁县Puningcounty ５６ 茶滘榄Chajiaoolive 萝岗区Luogangdistrict
２５ 文祠三棱 Wencisanleng 潮安县Chaoancounty ５７ 东山３号 Dongshan３ 饶平县 Raopingcounty
２６ 冬节圆２号 Dongjieyuan２ 普宁县Puningcounty ５８ 橡蒲青皮 Xiangpuqingpi 湘桥区 Xiangqiaodistrict
２７ 东联香 Donglianxiang 丰顺县Fengshuncounty ５９ 酥榄Suolive 潮安县Chaoancounty
２８ 细粒 Xili 饶平县 Raopingcounty ６０ 铁条 Tietiao 普宁县Puningcounty
２９ 老鼠牙Laoshuya 潮安县Chaoancounty ６１ 西土 Xitu 饶平县 Raopingcounty
３０ 大纳 Dana 普宁县Puningcounty ６２ 车酸１号Chesuan１ 普宁县Puningcounty
３１ 盐埕赤 Yanchengchi 普宁县Puningcounty ６３ 四棱Sileng 饶平县 Raopingcounty
３２ 潮阳三棱Chaoyangsanleng 潮阳区Chaoyangdistrict
　注:饶平县、潮安县、湘桥区属潮州市,普宁县、揭西县属揭阳市,潮阳区属汕头市,丰顺县属梅州市,萝岗区属广州市.
　Note:RaopingCounty,ChaoanCountyandXiangqiaoDistrictbelongtoChaozhouCity;PuningCountyandJiexiCountybelongtoJiexiCity;ChaoyangDistrictbeＧ
longstoShantouCity;FengshunCountybelongstoMeizhouCity;LuogangDistrictbelongstoGuangzhouCity．
　　(３)预扩增:反应体系为２０μL,含２．０μL１０×
PCRBuffer,１．０μLMgCl２(２５mmol􀅰LＧ１),１．２μL
dNTPs(２．５mmol􀅰LＧ１),１μL引物E＋０(５０ng􀅰
μLＧ１),１μL引物 M＋０(５０ng􀅰μLＧ１),０．２μLTaq
酶(５U􀅰μLＧ１),５μLDNA模板(连接产物稀释２０
倍),８．６μL灭菌超纯水.预扩增反应程序为９４℃
预变性５min;９４℃变性３０s,５６℃退火３０s,７２℃
延伸１min,共３０个循环;最后７２℃延伸５min.
(４)选择性扩增:用经过筛选的６对引物(表３)
进行选扩,反应体系为２０μL,包括２．０μL１０×PCR
Buffer,１．４μL MgCl２(２５ mmol􀅰LＧ１),１．６μL
dNTPs(２．５mmol􀅰LＧ１),０．６μLEcoRⅠ引物(５０
ng􀅰μLＧ１),０．６μLMseⅠ引物(５０ng􀅰μLＧ１),０．２
μLTaq酶(５U􀅰μLＧ１),５μLDNA模板(预扩产物
稀释８０倍),８．６μL灭菌超纯水.选择性扩增程序
为９４℃预变性５min;９４℃变性３０s,６５℃退火３０
s(每循环递减０．７℃),７２℃延伸１min,１２个循环;
９４℃变性３０s,５６℃退火３０s,７２℃延伸１min,２５
个循环;７２℃延伸７min,４℃终止反应.
(５)电泳及染色:选择性扩增产物变性后经６％
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,银染程序参照BasＧ
sam(１９９１)的方法并加以改进.将凝胶同长板置于
８００mL固定液(无水乙醇８０mL,冰醋酸４mL,加
水定容至８００mL)中固定３０min;放入银染液(１g
AgNO３加１．５mL３７０g􀅰LＧ１甲醛溶于１L水)中轻
轻摇动２０~３０min;蒸馏水漂洗５~１０s;立即放入
预冷的显影液(１１g氢氧化钠溶于１L水中,置于
４℃冰箱预冷,显影时加１０mL３７０g􀅰LＧ１甲醛)
６ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
表２　用于橄榄AFLP分析的限制性内切酶接头及引物序列
Table２　AdaptersandprimerssequencesusedintheAFLPanalysisofC．album
限制性内切酶
Restrictionenzyme EcoRⅠ MseⅠ
接头序列
Adapter
５′ＧCTCGTAGACTGCGTACCＧ３′ ５′ＧGACGATGAGTCCTGAGＧ３′
５′ＧAATTGGTACGCAGTCＧ３′ ５′ＧTACTCAGGACTCATＧ３′
预扩增引物
PreＧamplificationprime
E＋０: ５′ＧGACTGCGTACCAATTCＧ３′ M＋０: ５′ＧGATGAGTCCTGAGTAAＧ３′
选择性扩增引物
Selectiveamplification
prime
E/AAC:E/AAC:５′ＧGACTGCGTACCAATTCAACＧ３′ M/CAC:MCAC/:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACACＧ３′
E/AAG:E/AAG:５′ＧGACTGCGTACCAATTCAAGＧ３′ M/CAG:M/CAG:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACAGＧ３′
E/ACA:E/ACA:５′ＧGACTGCGTACCAATTCACAＧ３′ M/CAT:M/CAT:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACATＧ３′
E/ACC:E/ACC:５′ＧGACTGCGTACCAATTCACCＧ３′ M/CTA:M/CTA:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACTAＧ３′
E/ACG:E/ACG:５′ＧGACTGCGTACCAATTCACGＧ３′ M/CTC:M/CTC:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACTCＧ３′
E/ACT:E/ACT:５′ＧGACTGCGTACCAATTCACTＧ３′ M/CTG:M/CTG:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACTGＧ３′
E/AGC:E/AGC:５′ＧGACTGCGTACCAATTCAGCＧ３′ M/CTT:M/CTT:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACTTＧ３′
E/AGG:E/AGG:５′ＧGACTGCGTACCAATTCAGGＧ３′ M/CAA:M/CAA:５′ＧGATGAGTCCTGAGTAACAAＧ３′
中,显色至谱带清晰,用凝胶成像系统进行拍照.
(６)数据分析:银染后记录电泳图谱上清晰可见
的条带,以１和０记录多态片段的有和无,生成“０,
１”矩阵.用NTSYSpc２．１０a软件DICE法计算样品
间的相似系数,使用SAHNClustering的 UPGMA
(UnweightedpairＧgroupmethodarithmeticaveraＧ
ges,算术平均数不加权对组法)进行聚类分析.
２　结果与分析
２．１AFLP标记多态性
利用从６４对引物组合中筛选出的多态性较高
的６对引物,对６３份橄榄基因组进行选择性扩增,
获得较好的扩增结果(图１,表３).共扩增出４１７条
谱带,平均每对引物扩增出６９条带,且均有多态性,
多态性比例１００％,可见不同橄榄品种存在明显遗
传差异,橄榄品种遗传多样性极为丰富;AFLP分子
标记适于检测橄榄品种资源遗传多样性.
表３　６对引物选择性扩增引物产生的条带多态性
Table３　PolymorphismofAFLPbandsobtainedby
selectiveamplificationbasedon６primerpairs
序号
No．
引物组合
Primer
combination
总带数
Totalband
number
多态性带数
Polymorphic
bandnumber
多态性位点
百分率 (％)
Polymorphicband
percentage
１ EＧAGG/MＧCAA ６６ ６６ １００
２ EＧACA/MＧCAA ４９ ４９ １００
３ EＧACC/MＧCAA ９３ ９３ １００
４ EＧAAC/MＧCTT ７１ ７１ １００
５ EＧACT/MＧCAT ８０ ８０ １００
６ EＧAAC/MＧCAT ５８ ５８ １００
合计Total ４１７ ４１７ －
平均 Average ６９．５ ６９．５ １００％
２．２６３份橄榄品种的聚类分析
６３份橄榄种质相互间的相似系数为０．０６０６~
０．７６１９,其中‘赤种仔”与‘铁条”的相似系数最小,
为０．０６０６,表明两品种间的亲缘关系最远.‘马岗２
号’与‘马岗１号’的相似系数最大,为０．７６１９,表明
两品种间的亲缘关系最近.
从聚类图上可以看出,以相似系数０．３１２为标
准可将６３份橄榄种质资源分为７个品种群.
第１群包括４５个品种,在相似性系数为０．３７５
处可再分成３个组.其中‘四季’、‘铁节’、‘香种’和
‘下院’首先聚在一起形成第１组;第２组中‘揭西
赤’、‘纳种’、‘揭西香甜榄’、‘双湖香’、‘两头尖’、
‘潮阳甜榄’、‘鸿运’、‘小丁香’和‘鸣之烈２号’,该
组相似系数范围为０．３９６~０．６２,相似系数较小,说
明其亲缘关系较远;第３组２９个品种,可以分为两
个小组,其中第１小组包括２３个品种,他们关系复
杂,不过大多数是来自潮州市的地方品种.
第２群包括５个品种,‘大纳甜’与‘橙皮’相聚
后和‘盐埕赤’为一组;‘凤喜赤’和‘黄都’聚为另一
组.
第３群包括４个品种,‘下赤’和‘大甜’、‘潮阳
三棱’和‘赤种２号’分别为一组.
第４群中‘土甜’和‘文祠三棱’首先聚在一起,
再与‘早花三棱’聚在一起.
第５群包括‘铁条’和‘细粒’两个品种,相似系
数为０．３７５０,相似系数较小又聚为一类,说明与其他
类群亲缘关系较远.
第６群包括‘广太甜种’、‘西土’、‘鸡心’和‘车
酸１号’,相似系数为０．４０００~０．５４５４,相似系数分
布较窄,说明三者亲缘关系较近.
７１期　　　　　　　　周俊辉等:用AFLP分析广东省鲜食橄榄品种资源遗传多样性
图１　用EＧAGG/MＧCAA引物组合对橄榄选择性扩增的AFLP图谱　品种编号同表１,下同.
Fig．１　AFLPfingerprintingpatternsofChineseolivecultivarsusingtheprimerofEＧAGG/MＧCAA
TheserialnumberofcultivaristhesameasTable１,thesamebelow．
　　第７群中源于揭阳市的‘凤湖橄榄’单独聚为一
类,与其他类群亲缘关系较远,可能在栽培过程中发
生变异.
３　结论与讨论
聂珍素(２００５)利用１６个RAPD引物对来自福
建的２７份橄榄进行分析,获得高达９９．５％的多态
性.本研究AFLP扩增结果获得了４１７条多态性
谱带,多态性位点百分率达１００％.与杨培奎等
(２０１１)获得的７７．３４％的多态性位点间差异十分明
显,且平均每对引物所产生的多态性带数(６９．５条)
明显高于前者(１２条).此外,从DNA分子水平上
来说,遗传多样性越高,表明其遗传背景越复杂,该
物种存在的历史越久远(李俊丽,２００５).高达
１００％的多态性,说明橄榄在其遗传进化过程中,基
因组DNA发生了丰富的变异,同时也揭示了橄榄
种质资源具有极其丰富的遗传多样性.
本研究得到的多态性相似系数为０．０６０６~
０．７６１９,与杨培奎等(２０１１)的结论有一定的差别,可
能是两种分子标记检测位点覆盖基因组的程度不同
导致;另一方面本研究中的实验材料与杨培奎等的
供试橄榄品种略有不同,从而导致了遗传距离发生
了一定的差异,聚类结果及相似系数有所不同.
广东橄榄生产上一直沿用实生苗,品种变异很
大;由于供试品种大多数原产和栽培于潮汕地区,地
域较小,引种交流频繁,品种溯源不清;所以就不像
其他植物种类那样品种聚类有较明显的地域相关
性.例如‘东联香’、‘大甜’都源于梅州市丰顺县但
分别属于第１群和第３群,这一点与杨培奎的研究
结果一致.但也有来源地相同而聚为一起的,如来
自潮州市饶平县的‘马岗２号’、‘马岗１号’、‘马岗
６号’聚在一起,来自揭阳市普宁县的‘冬节圆
１号’、‘冬节圆２号’聚在一起.
由聚类图可知,潮汕地区的橄榄品种资源存在
同物异名和同名异物现象.例如来自潮州市饶平县
的‘马岗２号’、‘马岗１号’、‘马岗６号’聚在一起,
且前两者间的遗传相似性达０．７６１９,说明这３个品
种很可能具有共同的亲本,而杨培奎等(２０１１)的研
究中这３者并未聚到一起;而以“三棱”命名的的‘文
祠三棱’与‘潮阳三棱’并没有聚在一起,分别属于第
４群和第３群,表明它们不可能属于同一品种.‘早
花三棱’和‘晚花三棱’在开花习性、果实成熟期、果
实性状等形态特征明显不同,被视为两个品种,本研
究中两者的相似系数为０．１２９,两者的亲缘关系相差
较远,也充分证明了两者不可能为同一品种.
本研究利用 AFLP技术建立了广东省橄榄品
种资源AFLP聚类图,６３份材料之间的遗传相似性
系数在０．０６０６~０．７６１９,相似系数为０．３１２时,可将
广东省橄榄品种资源分为７个品种群.
８ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
图２　６３份橄榄种质AFLP标记聚类图
Fig．２　Dendrogramfor６３accessionsof
ChineseolivebasedonAFLPmarkers
致谢　本研究在广东省热带与亚热带花卉与园
林植物重点实验室完成,感谢仲恺农业工程学院的
蒋锋博士、胡秀博士、张晚风老师等在研究过程中提
供的技术指导和帮助.
参考文献:
刘天亮．２０１０．福建省橄榄种质资源的ISSR分析[D]．福州:福
建农林大学
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９１期　　　　　　　　周俊辉等:用AFLP分析广东省鲜食橄榄品种资源遗传多样性