全 文 ：广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ　Ｊａｎ．２０１３，３３（１）：１０７－１１１　　　　　　　　　　 ｈｔｔｐ：／／ｊｏｕｒｎａｌ．ｇｘｚｗ．ｇｘｉｂ．ｃｎ
　
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１３．０１．０１９
李育川，郭巧生，房海灵，等．小桐子果壳杀虫活性部位的分离及其 ＨＰＬＣ－ＭＳ分析［Ｊ］．广西植物，２０１３，３３（１）：１０７－１１１
Ｌｉ　ＹＣ，Ｇｕｏ　ＱＳ，Ｆａｎｇ　ＨＬ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＰＬＣ－ＭＳ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｒａｎｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍＪａｐｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ　ｆｒｕｉｔ　ｓｈｅｌ［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ，
２０１３，３３（１）：１０７－１１１
小桐子果壳杀虫活性部位的分离
及其ＨＰＬＣ－ＭＳ分析
李育川１，２，郭巧生２＊，房海灵２，３，李维莉１，耿开友１，李绍萍１，王崇亮１
（１．昆明学院，昆明６５０２１４；２．南京农业大学 中药材研究所，南京２１００９５；３．江西省林科院，南昌３３００３２）
摘　要：为寻找小桐子果壳的杀虫活性物质，以小桐子果壳乙醇粗提物的正丁醇萃取相为实验材料，对其采
用硅胶柱反复柱层析，同时对各阶段分离产物进行活性追踪，筛选出具有杀虫作用的活性部位 ＷＤ１，最后采
用 ＨＰＬＣ－ＭＳ分析，初步鉴定出活性部位主体成分。结果表明，ＷＤ１活性组分在浓度为８ｇ·Ｌ－１时，对桃蚜
（Ｍｙｚｕｓ　ｐｅｒｓｉｃａｅ）和菜青虫（Ｐｉｅｒｉｓ　ｒａｐａｅ）的２４ｈ（７２ｈ）校正死亡率均大于７０％，显示出极高的毒杀活性。通
过对 ＷＤ１进行 ＨＰＬＣ－ＭＳ分析，鉴定了含量较高的７个化合物，为总量的８０．７２％，初步鉴定为２ａ，３ａ，２４－三
羟基－１２－２０（３０）－二烯－２８－乌索酸、环辛肽Ｂ、牡荆素、松香烷二萜、麻疯树酚酮Ａ、Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ａ或Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ｂ。
关键词：小桐子果壳；杀虫活性物质；分离鉴定；ＨＰＬＣ－ＭＳ
中图分类号：Ｑ９４６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－３１４２（２０１３）０１－０１０７－０５
＊Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＨＰＬＣ－ＭＳ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｆｒａｎｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍＪａｐｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ　ｆｒｕｉｔ　ｓｈｅｌ
ＬＩ　Ｙｕ－Ｃｈｕａｎ１，２，ＧＵＯ　Ｑｉａｏ－Ｓｈｅｎｇ２＊，ＦＡＮＧ　Ｈａｉ－Ｌｉｎｇ２，３，
ＬＩ　Ｗｅｉ－Ｌｉ　１，ＧＥＮＧ　Ｋａｉ－Ｙｏｕ１，ＬＩ　Ｓｈａｏ－Ｐｉｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｃｈｏｎｇ－Ｌｉａｎｇ１
（１．Ｋｕｎｍｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２１４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｊｉｎｇ　２１００９５，Ｃｈｉｎａ；３．Ｊｉａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　３３００３２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｓｅｅｋ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｆｒｏｍＪａｔｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ　ｆｒｕｉｔ　ｓｈｅｌ，ｕｓｉｎｇ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　ｂｕ－
ｔａｎｏｌ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ　Ｊ．ｃｕｒｃａｓ　ｆｒｕｉｔ　ｓｈｅｌｓ　ａｓ　ａｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｉｎ　ｏｕｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｔ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ，ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅａｃｈ　ｓｔａｇｅ　ｗｅｒｅ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｂｙ　ｔｒａｃｋｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ
ＨＰＬＣ－ＭＳ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ｐａｒｔ　ｗｅｒｅ　ｉｎｉｔｉａｌｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｌｏｎｙ　ＷＤ１ｒｅａｃｈｅｄ　８ｇ·Ｌ－１，Ｍｙｚｕｓ　ｐｅｒｓｉｃａｅ　ａｎｄ　Ｐｉｅｒｉｓ　ｒａｐａｅ　ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｅｘｃｅｅｄｅｄ　７０％ｉｎ　２４ｈ（７２
ｈ），ｗｈｉｃｈ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｖｅｒｙ　ｈｉｇｈ．Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＷＤ１ｂｙ　ＨＰＬＣ－ＭＳ，ｓｅｖｅｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
ｗｉｔｈ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ｗｉｔｈ　ｔｏｔａｌ　ａｍｏｕｎｔ　ｕｐ　ｔｏ　８０．７２％．Ｔｈｅｙ　ｗｅｒｅ　２α，３ａ，２３－Ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｕｒｓ－１２，２０
（３０）－ｄｉｅｎ－２８－ｏｉ，Ｃｙｃｌｇｒｏｓｓｉｎｅ　Ｂ，Ｖｉｔｅｘｉｎ，Ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ，Ｊａｔｒｏｐｈｌｏｎｅ　Ａ，Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ａ　ｏｒ　Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ｂ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ；ｆｒｕｉｔ　ｓｈｅｌ；ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ－ＭＳ
＊ 收稿日期：２０１２－０６－１３　　修回日期：２０１２－０８－１１
基金项目：云南省自然科学基金（２０１１ＦＢ０８６）
作者简介：李育川（１９７２－），男（彝族），云南永仁人，博士，高级讲师，主要从事药用植物资源利用与评价，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｌｙｃｈｕａｎ７２＠１６３．ｃｏｍ。
＊通讯作者：郭巧生，教授，博士生导师，主要从事药用植物资源品质评价与利用研究，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｇｑｓ＠ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。
　　小桐子（Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ）因其种仁含油量高，
在我国热带地区作为一种极为适宜的生物柴油原料
植物被大面积栽培。目前，国内外对小桐子杀虫活
性已有少量研究，李静等（２００５）利用种子毒蛋白、种
子油、种子乙醇提取物和种子石油醚提取物对桃蚜
（Ｍｙｚｕｓ　ｐｅｒｓｉｃａｅ）、菜青虫（Ｐｉｅｒｉｓ　ｒａｐａｅ）、米象
（Ｒｉｃｅ　ｗｅｅｖｉｌ）和萝卜蚜（Ｌｉｐａｐｈｉｓ　ｅｒｙｓｉｍｉ）进行毒
杀作用研究；Ｆａｇｂｅｎｒｏ　ｅｔ　ａｌ．（１９９８）利用茎枝石油
醚粗提物对柠檬凤蝶（Ｐａｐｐｉｌｉｏ　ｄｅｍ　ｏｌｅｕｓ）３龄幼
虫进行杀虫活性研究；李育川等（２００９）利用小桐子
枝叶提取物对蚜虫进行了毒杀活性测定，结果小桐
子枝叶乙醇提取物的石油醚萃取物具有很强的毒杀
活性。除此之外，尚未见其它报道。笔者对小桐子
果壳杀虫活性物质进行分离和初步鉴定，以期为利
用小桐子果壳开发植物源杀虫剂提供科学依据。
１　材料和方法
１．１材料与仪器
小桐子果壳于２００７年１０月采自云南永仁县，
经南京农业大学中药材研究所郭巧生教授鉴定为麻
疯树 （Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ）的干燥果壳，凭证标本
（２００７１０９）存放于南京农业大学中药材研究所标本
室。新鲜成熟果实剥下种子后，将果壳晒干保存粉
碎后备用。
实验用的桃蚜（Ｍｙｚｕｓ　ｐｅｒｓｉｃａｅ）和菜青虫（Ｐｉｅｒｉｓ
ｒａｐａｅ）均采自南京农业大学下马坊附近农田，经南京
农业大学植保学院孟铃教授鉴定。美国 Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｎｎｉｇａｎ生产的 ＬＣ－ＭＳ（ＬＣ　ｐｕｍｐｅｒ　ｓｕｒｖｅｇｏｒ、ａｕｔｏ
ｓａｍｐｌｅｒ　ｓｕｒｖｅｇｏｒ、ＬＣＱ　ＤＥＣＡ　ＸＰ　ｐｌｕｓ）。乙醇、乙酸
乙酯和甲醇均为国产分析纯。必喜３号（７０％吡虫啉
水分散粒剂），由浙江海正股份有限公司生产。吐温－
８０，上海化学试剂公司生产。乙腈为色谱纯（Ｆｉｓｈｅｒ
公司），实验用水为娃哈哈纯净水。
１．２试验方法
１．２．１待分离样品的制备　按照李育川等（２００９）的
方法对小桐子果壳先用９５％乙醇冷浸提取，减压浓
缩后再将浸膏用水溶解，滤后不溶解丢弃，依次用石
油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇对小桐子果壳乙醇
粗提取物的水溶液进行分离萃取，将正丁醇萃取相减
压浓缩，获得具有杀虫活性的待分离样品（Ａ３－４）。
１．２．２硅胶柱层析分离　第一步，大柱粗分：以硅胶
柱Ｈ（１００～２００目）（４００ｇ）柱径８ｃｍ，常规湿法装柱，
硅胶装柱高度约８０ｃｍ，取正丁醇萃取物（Ａ３－４）样品
２０ｇ上样，以乙酸乙酯∶甲醇（１０∶１、５∶１、１∶２）为
流动相进行梯度洗脱，连接 ＨＤ－５电脑紫外检测仪
（检测波长２７５ｎｍ）在线检测，合并同一吸收峰值收
集液，将各流份减压浓缩称重，结合活性测定。第二
步，中柱细分：以硅胶柱Ｈ（２００～３００目）（２５０ｇ）柱径
５ｃｍ，常规湿法装柱，硅胶柱高度约４５ｃｍ，取活性较
强的Ａ３－４－４样品３ｇ；以乙酸乙酯∶甲醇（１∶１、１∶
１．５）为流动相进行梯度洗脱，将各馏分减压浓缩称
重，结合活性测定。
具体分离流程如图１所示：①以乙酸乙酯∶甲
醇（１０∶１）混合溶液。②以乙酸乙酯∶甲醇（５∶１）
混合溶液。③以乙酸乙酯∶甲醇（１∶２）混合溶液。
④以乙酸乙酯∶甲醇（１∶１）混合溶液。⑤以乙酸乙
酯∶甲醇（１∶１．５）混合溶液。
１．２．３杀虫活性测定　根据李育川（２０１１）利用小桐
子果壳提取物对蚜虫和菜青虫活性测试发现，小桐
子果壳乙醇提取物对豌豆长管蚜的ＬＣ５０的９５％置
信限为３．２０～４．２９ｇ·Ｌ－１的结果，本研究确定将各
流份处理液浓度为８ｇ·Ｌ－１处理液。分别准确称取
各样品０．８ｇ，分别用加０．８ｍＬ吐温－８０，拌匀，使其
充分乳化，再用蒸馏水溶解，定容至１００ｍＬ，制成８
ｇ·Ｌ－１处理液。对照液用０．８ｍＬ吐温－８０加蒸馏水
定容至１００ｍＬ制成。分别采用喷雾法（张宗炳，
１９８８）对桃蚜和菜青虫进行处理。桃蚜每组１００头，
菜青虫每组３０头，每处理设３个重复，分别于处理
２４ｈ后和７２ｈ后调查残虫数，计算死亡率。
校正死亡率（％）＝［（处理组死亡率－对照组死
亡率）／（１－对照组死亡率）］×１００
１．２．４ＨＰＬＣ－ＭＳ分析　ＨＰＬＣ条件：仪器为Ｔｈｅｒ－
ｍｏ　Ｅｌｅｃｔｏｎ　ｃｏｒｒｐｏｒａｔｉｏｎ，色谱柱Ｚｏｒｂａｘ　ＳＢ－Ｃ１８（２５０
ｍｍ×２．１ｍｍ，５μｍ），流动相为溶剂Ａ（乙腈）︰溶剂
Ｂ（水）＝１５︰８５，等定洗脱；流速为０．２ｍＬ·ｍｉｎ－１，
自动进样０．２μＬ。质谱条件：ＬＣＱ　ＤＥＣＡ　ＸＰ　ｐｌｕｓ（电
喷雾离子阱质谱仪），离子源为ＥＳＩ，质量分析器为离
子阱分析器，正、负离子检测模式，毛细管温度为２７５
℃，源电压为５ｋＶ，源毛细管电压为１５ｋＶ，质量数范
围１００～２　０００ｍ／ｚ，干燥气为氮气，进样量为２０μＬ。
质谱数据采集模式：自动质谱／质谱。高效液相和质
谱数据采集和分析采用化学工作站进行（美国，Ｔｈｅｒ－
ｍｏ　Ｆｉｎｎｉｇａｎ）。
１．３数据处理与分析
数据采用ＳＰＳＳ　１６．０进行方差分析。
８０１ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷
图１　小桐子果壳杀虫活性组分分离流程图
Ｆｉｇ．１　Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｐｅｓｔｉｃｉｄａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ　ｓｅｅｄｃａｓｅ
２　结果与分析
２．１Ａ３－４样品柱层析流份的杀虫活性分析
２．１．１大柱初分样品各流份的杀虫活性测定　（１）
大柱初分样品各流份对桃蚜的毒力活性测定：将小
桐子果壳乙醇粗提物的正丁醇萃取物样品，如图１
所示进行大柱初分，梯度洗脱，共收集到６个流份；
将各流份的收集液减压浓缩，利用桃蚜分别对６种
流份进行杀虫活性测定，测定结果见表１。杀虫活
性测定结果表明，编号Ａ３－４－４、Ａ３－４－１和Ａ３－４－５流
份对桃蚜都具有毒杀活性，３种流份对桃蚜毒杀活
性极显著高于其它流份，其２４ｈ校正死亡率分别是
８０．３５％、４８．０７％和７．８９％，其三者对桃蚜毒杀活
性差异极显著；具有毒杀活性的３个流份中，编号
Ａ３－４－４流份的活性最强，虽然其对桃蚜的毒杀活性
极显著低于吡虫啉，但因其相对数量最多，值得对其
进一步分离研究。
　　（２）大柱初分样品各流份对菜青虫的毒力活性
测定：利用菜青虫再分别对６种流份进行杀虫活性
测定，测定结果见表２。测定结果表明：编号Ａ３－４－４
流份和Ａ３－４－１流份对菜青虫都具有毒杀活性，２种
流份对菜青虫毒杀活性极显著高于其它流份，其
７２ｈ校正死亡率分别是８５．８６％和５４．８３％，其二者
对菜青虫的毒杀活性差异极显著；具有毒杀活性的
２个流份中，编号 Ａ３－４－４流份的活性最强，但其对
菜青虫的毒杀活性极显著低于吡虫啉，但仍然在
８０％以上。
　　通过利用桃蚜和菜青虫对以上６种流份进行活
性追踪发现，小桐子果壳中的杀虫活性物质主要存
在于编号Ａ３－４－４流份和编号 Ａ３－４－１流份中，且其
相对含量都较高，值得进一步对其进行分离研究。
表１　８ｍｇ·ｍＬ－１小桐子果壳乙醇粗提物的正丁醇
萃取物柱层析各流份对桃蚜的生物活性测定
Ｔａｂｌｅ　１　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　８ｍｇ·ｍＬ－１　ｖａｒｉｏｕｓ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｂｕｔａｎｏｌ　ｂａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ　Ｊａｔｒｏｐｈａ
ｃｕｒｃａｓ　ｓｅｅｄｃａｓｅ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｆｔｅｒ　ｃｏｌｕｍｎ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｔｏ　Ｍ．ｐｅｒｓｉｃａｅ　ｓｕｌｚｅｒ
流份Ｆｒａｎｃｔｉｏｎｓ
２４ｈ死亡率
２４ｈＭｏｒｔａｌｉｔｙ
（％）
２４ｈ校正死亡率
２４ｈＡｄｊｕｓｔｅｄ
ｍｏｒｔａｌｉｔｙ（％）
Ａ３－４－１　 ５０．６７　 ４８．０７Ｃｃ
Ａ３－４－２　 ５．３３　 ０．３５Ｅｅ
Ａ３－４－３　 ４．６７　 ０Ｅｅ
Ａ３－４－４　 ８１．３３　 ８０．３５Ｂｂ
Ａ３－４－５　 １２．５０　 ７．８９Ｄｄ
Ａ３－４－６　 ４．４６　 ０Ｅｅ
７０％吡虫啉
７０％Ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ
９４．００　 ９３．６８Ａａ
ＣＫ（水）ＣＫ（Ｗａｔｅｒ） ５．００　 ０Ｅｅ
　注：表中数据为３次重复的平均值；同列中不同的小写字母表示
在５％水平上差异显著，同列中大写字母表示在１％水平上差异显
著。下同。
　Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｄａｔｕｍｓ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｔａｂｌｅ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ
ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　５％ｌｅｖｅｌ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｐｉｔａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ
ｃｏｌｕｍｎ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　５％ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅ－
ｌｏｗ．
９０１１期　　　　　　　李育川等：小桐子果壳杀虫活性部位的分离及其 ＨＰＬＣ－ＭＳ分析
２．１．２Ａ３－４－４样品中柱细分各流份的杀虫活性测定
　（１）Ａ３－４－４样品中柱细分各流份对桃蚜的毒杀活
性测定　经过对小桐子果壳乙醇粗提物的正丁醇萃
取物进行大柱初分，并对各流份进行活性追踪，发现
编号Ａ３－４－４的流份活性最强，相对含量也最高。因
此选择编号Ａ３－４－４流份膏，如图１所示，继续进行
中柱细分，共收集到３个流份；将各流份的收集液减
压浓缩，利用桃蚜分别对３种流份进行杀虫活性测
定，测定结果见表３。活性测定结果表明，编号为
ＷＤ１流份、ＷＥ１流份和 ＷＦ１流份均对桃蚜具有一
定的 毒 杀 活 性，其 ２４ｈ 校 正 死 亡 率 分 别 为 了
８５．６６％、２３．６６％、和２５．８１％，３种流份对桃蚜的毒
杀活性极显著高于空白对照，显示出一定的毒杀活
性；三种流份中，ＷＤ１流份对桃蚜的毒杀活性最高，
其极显著高于 ＷＥ１和 ＷＦ１，但低于７０％吡虫啉；
ＷＥ１和 ＷＦ１对桃蚜的毒杀活性无显著差异。
表２　８ｍｇ·ｍＬ－１小桐子果壳乙醇粗提物的正丁醇
萃取物柱层析各流份对菜青虫的生物活性测定
Ｔａｂｌｅ　２　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　８ｍｇ·ｍＬ－１　ｖａｒｉｏｕｓ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｂｕｔａｎｏｌ　ｂａｒｔｉｔｉｏｎｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ
Ｊａｔｒｏｐｈａ　ｃｕｒｃａｓ　ｓｅｅｄｃａｓｅ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｆｔｅｒ
ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｔｏ　Ｐｉｅｒｉｓ　ｒａｐａｅ
流份Ｆｒａｎｃｔｉｏｎｓ
７２ｈ死亡率
７２ｈＭｏｒｔａｌｉｔｙ
（％）
７２ｈ校正死亡率
７２ｈＡｄｊｕｓｔｅｄ
ｍｏｒｔａｌｉｔｙ（％）
Ａ３－４－１　 ５６．３３　 ５４．８３Ｃｃ
Ａ３－４－２　 ４．００　 ０．６９Ｄｄ
Ａ３－４－３　 ３．６７　 ０．３５Ｄｄ
Ａ３－４－４　 ８６．３３　 ８５．８６Ｂｂ
Ａ３－４－５　 ４．３３　 １．０４Ｄｄ
Ａ３－４－６　 ２．６７　 ０Ｄｄ
７０％吡虫啉
７０％Ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ
９７．６７　 ９７．５９Ａａ
ＣＫ（水）ＣＫ（Ｗａｔｅｒ） ３．３３　 ０Ｄｄ
表３　８ｍｇ·ｍＬ－１　Ａ３－４－４样品柱层析
各流份对桃蚜的生物活性测定
Ｔａｂｌｅ　３　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　８ｍｇ·ｍＬ－１　ｖａｒｉｏｕｓ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　Ａ３－４－４ｆｒａｎｃｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｃｏｌｕｍｎ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｔｏ　Ｍ．ｐｅｒｓｉｃａｅ　Ｓｕｌｚｅｒ
流份Ｆｒａｎｃｔｉｏｎｓ
２４ｈ死亡率
２４ｈＭｏｒｔａｌｉｔｙ
（％）
２４ｈ校正死亡率
２４ｈＡｄｊｕｓｔｅｄ
ｍｏｒｔａｌｉｔｙ（％）
ＷＤ１　 ８６．６７　 ８５．６６Ｂｂ
ＷＥ１　 ２９．００　 ２３．６６Ｃｃ
ＷＦ１　 ３１．００　 ２５．８１Ｃｃ
７０％吡虫啉
７０％Ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ
９６．３８　 ９６．０６Ａａ
ＣＫ（水）ＣＫ（Ｗａｔｅｒ） ７．００　 ０Ｄｄ
　　（２）Ａ３－４－４样品中柱细分各流份对菜青虫的毒
杀活性测定：利用菜青虫分别对Ａ３－４－４样品中柱细
分３种馏分进行杀虫活性测定，测定结果见表４。
活性测定结果表明，所得的流份 ＷＤ１、ＷＥ１和 ＷＦ１
均对菜青虫具有一定的毒杀活性，其７２ｈ校正死亡
率分别为了８９．５１％、３１．４７％和３３．５６％，３种流份
对菜青虫的毒杀活性极显著高于空白对照，显示出
一定的毒杀活性；三种流份中，ＷＤ１对菜青虫的毒
杀活性最高，其极显著高于 ＷＥ１和 ＷＦ１，但低于
７０％吡虫啉；ＷＥ１和 ＷＦ１对菜青虫的毒杀活性无
显著差异。
表４　８ｍｇ·ｍＬ－１　Ａ３－４－４样品柱层析各流份
对菜青虫的生物活性测定
Ｔａｂｌｅ　４　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　８ｍｇ·ｍＬ－１　ｖａｒｉｏｕｓ
ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　Ａ３－４－４ｆｒａｎｃｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｃｏｌｕｍｎ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｔｏ　Ｐｉｅｒｉｓ　ｒａｐａｅ
流份Ｆｒａｎｃｔｉｏｎｓ
７２ｈ死亡率
７２ｈＭｏｒｔａｌｉｔｙ
（％）
７２ｈ校正死亡率
７２ｈＡｄｊｕｓｔｅｄ
ｍｏｒｔａｌｉｔｙ（％）
ＷＤ１　 ９０．００　 ８９．５１Ｂｂ
ＷＥ１　 ３４．６７　 ３１．４７Ｃｃ
ＷＦ１　 ３６．６７　 ３３．５６Ｃｃ
７０％吡虫啉
７０％Ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ
９７．６７　 ９７．５５Ａａ
ＣＫ（水）ＣＫ（Ｗａｔｅｒ） ４．６７　 ０Ｄｄ
　　由以上结果看出，三种流份都具有一定的杀虫
活性，其杀虫活性可能表现为多种物质的协同作用；
流份 ＷＤ１活性极显著高于其它２种流份，且其相
对含量也最高，可以作为指标性成分对其进行进一
步的分离纯化、鉴定等研究。
２．２样品 ＷＤ１的化学组成及其相对含量分析：
通过对 ＷＤ１样品进行 ＨＰＬＣ－ＭＳ分析，在正、
负离子模式下检出，各化合物在负离子模式下都有
比较好的响应。结合文献资料，对图谱进行解析，解
析了含量较高的７个化合物，为总量的８０．７２％，分
别为２α，３β，２４－三羟基－１２－２０（３０）－二烯－２８－乌索酸
［２α，３ａ，２３－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｕｒｓ－１２，２０（３０）ｄｉｅｎ－２８－ｏｉ］、环
辛肽Ｂ（Ｃｙｃｌｇｒｏｓｓｉｎｅ　Ｂ）、牡荆素（Ｖｉｔｅｘｉｎ）、松香烷
二萜（Ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ）、麻疯树酚酮Ａ（Ｊａｔｒｏｐｈｌｏｎｅ　Ａ）和
Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ａ或Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ｂ。主要属于二萜类化
合物、三萜类、黄酮类、肽及蛋白类化合物，其中二萜
最多为５个。具体如下：
化合物１　ＲＴ：３２．８２；相对质量分数５．２４％。
ＥＩ－ＭＳ［Ｍ］＋ｍ／ｚ：４８５．７、４８６．７，主要质谱数据与
Ｋｏｊｉｍａ　ｅｔ　ａｌ．（１９９１）报道的２α，３ａ，２４－三羟基－１２－２０
０１１ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３３卷
（３０）二烯－２８－乌索酸相似，鉴定为２α，３ａ，２４－三羟基－
１２－２０ （３０） 二 烯－２８－乌 索 酸 ［２α，３ａ，２３－
ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｕｒｓ－１２，２０（３０）－ｄｉｅｎ－２８－ｏｉ］，为三萜酸。
化合物２　ＲＴ：３４．１９；相对质量分数２０．９７％。
ＥＩ－ＭＳ［Ｍ］＋ｍ／ｚ：７８１，主要质谱数据与 Ｃａｔｈｅｒｉｎ
Ａｕｖｉｎｑｕｅｔｔｅ　ｅｔ　ａｌ．（１９９７）报道的化合物环辛肽Ｂ基
本一致，鉴定为环辛肽Ｂ（Ｃｙｃｌｇｒｏｓｓｉｎｅ　Ｂ）。
化合物３　ＲＴ：３４．２７；相对质量分数１７．１９％。
ＥＩ－ＭＳ［Ｍ］＋ｍ／ｚ：４３１．９，与陈泉等（１９９６）报道的化
合物牡荆素（Ｖｉｔｅｘｉｎ）基本一致，鉴定为牡荆素（Ｖｉ－
ｔｅｘｉｎ），为黄酮类。
化合物４　ＲＴ：３６．７４；相对质量分数６．２９％。
ＥＩ－ＭＳ［Ｍ］＋ｍ／ｚ：２２７．１、３０４．７、３２７．２、３２８．３、
３６３．１，质谱数据与丛浦珠等（２００３）报道的《化合物
４７８１》基本一致，为松香烷二萜化合物。
化合物５　ＲＴ：３７．３３；相对质量分数６．７１％。
ＥＩ－ＭＳ［Ｍ］＋ｍ／ｚ：２９５．４，质谱数据与Ｐａｒｔｈａｓａｒａｔｈｙ
ｅｔ　ａｌ．（１９８４）报道的化合物香豆素－木脂素，又名麻
疯树酚酮Ａ（Ｊａｔｒｏｐｈｌｏｎｅ　Ａ）一致，为二萜化合物。
化合物６　ＲＴ：３８．０７；相对质量分数１６．３５％。
ＥＩ－ＭＳ［Ｍ］＋ｍ／ｚ：２９６，质谱数据与Ｎａｅｎｇｃｈｏｍｎｅｎｇ
ｅｔ　ａｌ．（１９８６）报道的化合物Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ａ或Ｂ基本
一致，鉴定为二萜化合物。
化合物７　ＲＴ：３９．６０；相对质量分数７．９７％。
ＥＩ－ＭＳ［Ｍ］＋ｍ／ｚ：２９６，质谱数据与Ｎａｅｎｇｃｈｏｍｎｅｎｇ
（１９８６）报道的化合物Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ａ或Ｂ基本一致，
为二萜化合物。
３　结论与讨论
将小桐子果壳经乙醇提取，依次利用石油醚、三
氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇对乙醇提取物的水溶液进
行萃取；选择活性最强的正丁醇萃取相上硅胶柱进
行大柱初分，以乙酸乙酯∶甲醇（１０∶１、５∶１、１∶２）
为流动相进行梯度洗脱，共获得６个流份，结合利用
桃蚜和菜青虫进行活性追踪筛选，筛选出活性强、含
量最高Ａ３－４－４流份；将 Ａ３－４－４流份浓缩后再上硅
胶柱进行中柱细分，以乙酸乙酯∶甲醇（１∶１、１∶
１．５）对流动相进行梯度洗脱，获得３个流份，同时结
合活性追踪筛选，获得含量最高、活性最强的 ＷＤ１
流份；最后将 ＷＤ１进行 ＨＰＬＣ－ＭＳ分析，鉴定了含
量较高的７个化合物，为总量的８０．７２％，初步鉴定
为２ａ，３ａ，２４－三羟基－１２－２０（３０）－二烯－２８－乌索酸、环
辛肽Ｂ、牡荆素、松香烷二萜、麻疯树酚酮Ａ、Ｃｕｒｃｕ－
ｓｏｎｅ　Ａ或Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ｂ。
笔者２０１１年研究发现，小桐子果壳和枝叶的乙
醇提取物对多种试虫具有多种作用方式的毒杀活
性，小桐子果壳的乙醇提取物会导致试虫出现明显
的拒食、腹泄、麻痹、趋避、触杀（虫体发黑软烂）、肿
胀等中毒症状，这可能是小桐子果壳含有多种杀虫
活性成分综合作用的结果。本研究发现小桐子果壳
含有丰富的杀虫活性物质，其杀虫活性物质可能是
２ａ，３ａ，２４－三羟基－１２－２０（３０）－二烯－２８－乌索酸、环辛
肽Ｂ、牡荆素、松香烷二萜、麻疯树酚酮Ａ、Ｃｕｒｃｕｓｏ－
ｎｅ　Ａ或Ｃｕｒｃｕｓｏｎｅ　Ｂ中的一种或者多种，具体杀虫
活性成分种类的确定还有待于对其继续进行分离和
鉴定研究。
参考文献：
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１１１１期　　　　　　　李育川等：小桐子果壳杀虫活性部位的分离及其 ＨＰＬＣ－ＭＳ分析