全 文 ：Guihaia Feb. 2016，36 (2):240-245
DOI: 10.11931/guihaia.gxzw201502015
谢俊杰，韩峻，左国营，等. 10种中草药提取物体外抗铜绿假单胞菌作用研究［J］. 广西植物，2016，36(2)：240-245
XIE JJ，HAN J，ZUO GY，et al. Antibacterial activity screening of 10 Chinese herbal medicines against Pseudomonas aeruginosa in vitro［J］. Guihaia，2016，
36(2)：240-245
10种中草药提取物体外抗铜绿假单胞菌作用研究
谢俊杰1,2，韩 峻 2，左国营 1*，王 宁 1，程子梦 1,2
( 1. 成都军区昆明总医院 天然药物研究中心，昆明 650032；2.云南中医学院，昆明 650500 )
摘 要： 通过对粗糠柴等 10种中草药采用 80%乙醇室温下浸渍制备的提取物进行体外抗铜绿假单胞菌
及其耐药菌活性研究，并采取药敏纸片法测定临床分离菌株的耐药性。结果表明：这 10种中草药 80%
乙醇提取物中，粗糠柴的乙酸乙酯层对铜绿假单胞菌标准菌及其耐药菌的抑菌效果最好，其抑菌圈直径
范围在 10～17 mm之间，MIC范围在 0.125～0.5 mg·mL-1之间，MBC范围在 0.5～1 mg·mL-1之间；
正丁醇层、水层的抑菌活性较乙酸乙酯层弱，石油醚层对铜绿假单胞菌没有效果。而小叶藤黄、滇南红
厚壳、续随子的乙酸乙酯层，巴豆、罗汉松、肉桂醇提物对铜绿假单胞菌及其耐药菌株有较弱抗菌活性；
滇南红厚壳的正丁醇层、续随子乙酸乙酯层以及大八角和郁金的醇提物对铜绿假单胞菌及其耐药菌株均
无活性。从这些数据中可以得出，粗糠柴的乙酸乙酯层、正丁醇层和水层对铜绿假单胞菌及其耐药菌有
较好的抑菌活性，尤以乙酸乙酯层活性最好，而粗糠柴的石油醚层没有活性。
关键词：中草药，粗糠柴，铜绿假单胞菌，MIC/MBC，抗菌活性
中图分类号：Q946，R285.5 文献标识码：A 文章编号：1000-3142（2016）02-0240-06
Antibacterial activity screening of 10 Chinese herbal
medicines against Pseudomonas aeruginosa in vitro
XIE Jun-Jie1,2，HAN Jun2，ZUOGuo-Ying1*，WANGNing1，CHENG Zi-Meng1,2
（ 1. Research Center for Natural Medicines, Kunming General Hospital of Chengdu Military Command，Kunming 650032，
China； 2. Yunnan Traditional Chinese Medical University，Kunming 650500，China )
Abstract: To investigate the in vitro antibacterial activities of 80% ethanol extracts from 10 Chinese herbal
medicines against Pseudomonas aeruginosa and its resistant strains, the drug-resistance spectrum of 7
P. aeruginosa stains isolated from the clinical sputum samples was determined by the Kirby-Bauer (K-B) method.
The dried powder of the collected 10 Chinese herbal medicine samples were extracted with 80 % ethanol and the
solvent was evaporated under reduced pressure to get the Chinese herbal medicines ethanol extracts. The ethanol
extracts were suspended in deioned water, then petroleum ether, ethyl acetate, and n-BuOH were used to extract
successively. The activities of each extract against P. aeruginosa were screened of inhibition zone diameters (IZDs)
by the agar-diffusion methods, and the minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal
concentration (MBC) were further determined by serial microdilution method. The data showed that of the 10
Chinese herbal medicines, the ethyl acetate extracts from Mallotus philippensis showed the most active against
Pseudomonas aeruginosa and its resistant strains, with IZDs ranging by 10－17 mm, and the MICs and MBCs
ranging by 0.125－0.5 mg·mL-1, respectively. The activities of n-BuOH and water extracts were slightly weaker,
收稿日期：2015-02-15 修回日期：2015-09-10
基金项目：国家自然科学基金（NSFC 81173504）[Supported by the National Natural Science Foundation of China (NSFC 81173504)]。
作者简介：谢俊杰（1990-），男，安徽六安人，硕士研究生，主要从事中草药抗耐药菌活性成分及耐药机制研究，(E-mail)xjj7294@163.com。
*通讯作者：左国营，博士，主任药师，博士后，硕士生导师，主要从事植物活性成分研究和天然药物开发, (E-mail)zuoguoying@263.net。
http://journal.gxzw.gxib.cn
http://www.guihaia-journal.com
2期 谢俊杰等：10种中草药提取物体外抗铜绿假单胞菌作用研究 241
whereas the petroleum ether extracts showed no activities against P. aeruginosa and its resistant strains. The ethyl
acetate extracts from Garcinia cowa, Calophyllum polyanthum and Euphorbia lathyris, together with the ethanol
extracts from Croton tiglium, Podocarpus macrophyllus and Cinnamomum cassia showed slightly weaker activities
against P. aeruginosa and its resistant strains. The n-BuOH extracts from Calophyllum polyanthum, ethyl acetate
extracts from Euphorbia lathyris and ethanol extracts from Illicium majus, and Curcuma aromatic all showed no
activities against P. aeruginosa and its resistant strains. We could made a conclusion from those data that the ethyl
acetate, n-BuOH and water extracts from M. philippensi. Arg had effective antibacterial activities against
P. aeruginosa and its resistant strains, especially the ethyl acetate extracts showing the best activitity, compared
with the others extracts,whereas the petroleum ether extracts showed no activities against P. aeruginosa and its
resistant strains.
Key words: Chinese herbal medicines,Mallotus philippensi, Pseudomonas aeruginosa, MIC/MBC, antibacterial activity
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）是
一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界和人体中，
是导致院内感染的重要病原菌之一。在临床上常见于
一些呼吸道感染、尿路感染和免疫力低下的病人的痰
液和尿液中，甚至会引起严重的囊性纤维化病 (cystic
fibrosis，CF) (Pier，2002)。临床上常用的一些抗生素，
铜绿假单胞菌都或多或少表现出耐药性（赵津彩和张
跃栋，2013）。中草药因为具有不良反应小，资源丰
富、价格低，作用位点相对较多，不易产生耐药性等
特点而越来越受到药学和病原微生物研究者的关注。
本研究通过对粗糠柴等 10种中草药进行体外抑
菌活性研究，以筛选出来活性较好的中草药，为深入
研究其活性单体化合物和作用机制打下物质基础。
1 材料与方法
1.1 材料
药材：粗糠柴（Mallotus philippensis）、小叶藤黄
（Garcinia cowa）、续随子（Euphorbia lathyris）、滇南
红厚壳（Calophyllum polyanthum ）肉桂（Cinnamomum
cassia）、郁金（Curcuma aromatic）、巴豆（Croton tiglium）、
罗汉松（Podocarpus macrophyllus）、大八角（Illicium
majus）、水杨梅（Adina rubella）均为本实验室保存。
培养基：M-H（Mueller-Hinton）琼脂培养基和
M-H肉汤培养基（杭州天河微生物试剂有限公司）。
试剂：石油醚、乙酸乙酯、正丁醇均为工业级（重
蒸后使用）；二甲基亚砜（DMSO）为分析纯，均购
自昆明福海达化玻仪器有限公司。
菌株：标准菌为铜绿假单胞菌（ATCC27853）购
自中国药物制品检定所；耐药菌株为 PA135、PA216、
PA276、PA281、PA291、PA314，PA319（从成都军区
昆明总医院临床重症呼吸系统患者的痰液标本中分离
得到），药敏纸片由温州市康泰生物科技有限公司提供。
1.2 方法
1.2.1 耐药菌株的鉴定 药敏测试按照抗菌剂药敏
常用测试方法的 K-B纸片扩散法（Kirby-Bauer 法）
进行。以 Clinical and Laboratory Standards Institute
（CLSI）2012版（CLSI：M02-A11，2012）推荐方
法为判断依据。
1.2.2 提取物的制备 将粗糠柴等药材粉碎成粗粉，
用 80%乙醇分别浸泡 7、5、3、1 d，合并滤液，减
压蒸发得到浸膏。浸膏用水分散，依次使用石油醚、
乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚层、乙酸
乙酯层、正丁醇层和水层。减压回收得到各个萃取
层的浸膏备用。
1.2.3 药液的制备 称取各待测药物，用 1 mL 二甲
基亚砜（DMSO） 溶解，配制成 10 mg·mL-1的浓
度，供打孔初筛使用；另取待测药用肉汤和 5%DMSO
溶解药物，制成 16 mg·mL-1的溶液，用于测定MIC。
1.2.4 体外抑菌活性的测定
1.2.4.1 琼脂打孔法测定抑菌圈 配制菌液浓度为
0.5麦氏单位的标准菌悬液浊度(1.5×108CFU·mL-1)。
将已灭菌的M-H琼脂培养基倒入灭过菌的培养皿上
（厚度约 5 mm）。然后在培养基上用直径 6 mm的
无菌打孔器打孔。用无菌棉签蘸取适量的菌液挤去
多余的液体后，均匀涂抹在打好孔的培养基表面。
最后于每孔中加入 50 μL 制备好的药液，放置在
（37±2）℃的恒温培养箱中培养 24 h。
1.2.4.2 MIC的测定 微量稀释法测定 MIC，均按照
CLSI2012版指南进行（CLSI:M07-A9,2012）。
1.2.4.3 MBC的测定 确定MIC后，取MIC前 3～5
孔的培养物，接种到不含药的 MH 培养基上，在
（37±2）℃恒温箱中培养 24 h。采用活菌计数法检查
242 广 西 植 物 36卷
表 1 7株耐药菌株的药敏实验结果
Table 1 Drug sensitive test result of 7 resistant strains
菌株编号
Stain No.
敏感
Sensitive
中介
Intermediary
耐药
Resistant
PA135 多粘菌素 B(PB)、氨曲南（AZT）、亚胺培南(IPN)、
哌拉西林/他唑巴坦(PIT)
头孢哌酮(CFP)、
左氧氟沙星(LVF)
美洛培南 (MPN)、环丙沙星 (CIP)、头孢他啶
(CAZ)、妥布霉素(TM)、阿米卡星(AK)、氨苄西
林(AM)、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(SXT)、莫西沙星
(MXF)
PA216 美洛培南(MPN)、多粘菌素 B(PB)、环丙沙星
(CIP)、左氧氟沙星(LVF)、头孢哌酮(CFP)、哌拉
西林/他唑巴坦(PIT)、头孢他啶(CAZ)、氨曲南
(AZT)、亚胺培南(IPN)
—
妥布霉素(TM)、阿米卡星(AK)、氨苄西林(AM)、
甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(SXT)、莫西沙星(MXF)
PA276 多粘菌素 B(PB)、哌拉西林/他唑巴坦(PIT)、氨曲
南(AZT)、头孢他啶(CAZ)、头孢哌酮 /舒巴坦
(SCF)、头孢吡肟(FEP) —
妥布霉素(TM)、亚胺培南 (IPN)、左氧氟沙星
(LVF)、环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AK)
PA281 多粘菌素 B(PB)、环丙沙星(CIP)、头孢哌酮(CFP)、
哌拉西林/他唑巴坦(PIT)、头孢他啶(CAZ)、氨曲
南(AZT)、亚胺培南(IPN) —
美洛培南(MPN)、左氧氟沙星(LVF)、妥布霉素
(TM)、阿米卡星(AK)、氨苄西林(AM)、莫西沙星
(MXF)
PA291 多粘菌素 B(PB)、环丙沙星(CIP)、氨曲南(AZT)、
亚胺培南(IPN)、美洛培南(MPN)、氨苄西林(AM)
左氧氟沙星(LVF) 头孢哌酮(CFP)、哌拉西林/他唑巴坦(PIT)、头孢
他啶(CAZ)、妥布霉素(TM)、阿米卡星(AK)、莫
西沙星(MXF)
PA314 多粘菌素 B(PB)、氨曲南(AZT)、头孢他啶(CAZ)、
阿米卡星(AK)、左氧氟沙星(LVF)、哌拉西林/他
唑巴坦(PIT) —
亚胺培南(IPN)、妥布霉素(TM)、环丙沙星(CIP)、
头孢吡肟(FEP)
PA319 多粘菌素 B(PB)、氨曲南(AZT)、头孢他啶(CAZ)、
阿米卡星(AK) —
亚胺培南(IPN)、妥布霉素 (TM)、左氧氟沙星
(LVF)、哌拉西林/他唑巴坦(PIT)、头孢哌酮/舒巴
坦(SCF)、环丙沙星(CIP)、头孢吡肟(FEP)
琼脂平板上的菌落数量，当菌落数少于 5个的最小药
物浓度即为此药的 MBC（杨翠先等，2012）。
2 结果与分析
2.1 7株耐药菌株的药敏实验结果
通过对 7株临床分离的铜绿假单胞菌的药敏试
验检测，所测结果如表 1。从表 1可以看出，这 7株
菌株已对临床上常用的一些抗生素产生了耐药，而
且表现出多重耐药的趋势。
2.2 10种中草药提取物体外抑菌实验结果
从表 2、表 3和表 4看出，粗糠柴的石油醚层对
铜绿假单胞菌及其耐药菌株没有抑菌效果；乙酸乙
酯层对标准铜绿假单胞菌和耐药菌株具有较好的抑
菌效果，抑菌圈在 10.5～18 mm 之间；正丁醇层对
标准铜绿假单胞菌和耐药菌株具有较好的抑菌效
果，抑菌圈在 12～16 mm之间；水层标准铜绿假单
胞菌和耐药菌株具有较好的抑菌效果，抑菌圈在
11～15 mm 之间。说明粗糠柴的乙酸乙酯层、正丁
醇层、水层、石油醚层的抑菌活性逐渐降低，而其
他 9种中草药对铜绿假单胞菌的标准菌株及其耐药
菌株的抑菌效果较差。此外，这 10种中草药还对标
准金黄色葡萄球菌也有较好的抑菌效果。
3 讨论与结论
本研究所使用的耐药菌株均是从本院临床重症
患者的痰液中分离得到的，这 7株耐药菌株对临床
上现有使用的多种抗生素产生了耐药性。这提示我
们在临床用药上应该充分结合药敏实验的结果合理
用药，以提高治疗效果。
随着抗生素耐药问题的日益严重，现有抗生素
的治疗效果日益降低。从天然药物中发现新的有效
的化学成分已成为国内外的研究热点。在医院患者
微生物感染中，革兰阴性菌的检出率明显高于革兰
阳性菌，而且铜绿假单胞菌在检出的革兰阴性菌中
居于首位(黄传正等，2015；李玉梅等，2015)，由此
看出，革兰阴性菌感染在临床上是亟待解决的一问
题。近年来铜绿假单胞菌耐药性的产生，给临床治
疗带来严重挑战。武晓敏等（2014）通过对临床分
2期 谢俊杰等：10种中草药提取物体外抗铜绿假单胞菌作用研究 243
表 2 10种中草药提取物体外抑菌实验的抑菌圈直径
Table 2 Inhibition zones diameters of 10 Chinese herbal medicines extracts in vitro antimicrobial activity (mm)
种名
Name of species
ATCC
27853
PA
135
PA
216
PA
276
PA
281
PA
291
PA
314
PA
319
小叶藤黄-P Garcinia cowa-P 14 9 — 12.5 9.5 9 9 9
小叶藤黄-E G. cowa-E 8.5 9 — 12 17 13 9 —
小叶藤黄-B G. cowa-B 11 9.5 — 8.5 13 10 9 9
滇南红厚壳-E
Calophyllum polyanthum-E
10.5 12.5 — 15.5 15 11 9.5 10
滇南红厚壳-P
C. polyanthum-P
9.5 10 — 14.5 9.5 8 11 9.5
滇南红厚壳-B
C. polyanthum-B
— 8 — 15 — 13 — 10.5
续随子-E
Euphorbia lathyris-E
9.5 10.5 10 14.5 11.5 9 10 9
巴豆-E Croton tiglium-E 8.5 10 8.5 13 9 12 10 9.5
罗汉松-E
Podocarpus macro-phyllus-E
12.5 9 — 15 13.5 11 12 11.5
肉桂-B
Cinnamomum cassia-B
8.5 13.5 — 13 14 10.5 9.5 12.5
郁金-E Curcuma aromatic-E 15 — — 16 15 11 — 11.5
粗糠柴-P
Mallotus philippensis-P
— — — — — — — —
粗糠柴-E M. philippensis -E 15 18 16 16 15 10.5 14 15.5
粗糠柴-B M. philippensis-B 16 13 12 15 12 — — —
粗糠柴-W M. philippensis-W 14 15 — 14.5 13 — 11 —
大八角-P Illicium majus-P — — — — — — — —
大八角-E I. majus-E — — — — — — — —
大八角-B I. majus-B — — — — — — — —
水杨梅-E Adina rubella-E 14 12 10.5 — — 13 11 —
注：“—” 没有抑菌圈；P. 石油醚层；E. 乙酸乙酯层；B. 正丁醇层；W. 水层。
Note：“—” No inhibition zone diameters；P. Petroleum ether extracts；E. Ethyl acetate extracts；B. n-BuOH extracts；W. Water extracts.
离的 711株铜绿假单胞菌的耐药性分析和分布情况
分析，发现这 711株菌株对头孢唑啉、复方大新诺
明、头孢呋辛酯、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、呋
喃妥因、头孢呋辛耐药率均达 95.00%，且这 711株
菌株中，89.59%来自于痰标本。因此加大对抗铜绿
假单胞菌的中草药活性成分的研究具有较大意义。
本研究中，我们通过对粗糠柴 10种中草药提取物对
铜绿假单胞菌及其耐药菌株的抗菌活性筛选，在这
10种中草药中，粗糠柴的乙酸乙酯层对铜绿假单胞
菌的抑菌效果明显优于其他各个萃取层和其他中草
药，为以后进一步追踪其抗菌成分提供了依据。粗
糠柴在驱虫方面具有很好的效果，特别是在肠道绦
虫方面的应用（Mayank et al，2013）；此外在抗炎
止痛（Mohammad et al，2010）、抗血管生成（Giuseppe
et al，2011）和抗氧化（Muhammad et al，2009）等
方面也有一定效果。但是在抗菌方面，目前只有 Syed
et al（2009）报道过从粗糠柴中提取出一种成分对耐
克拉霉素和甲硝唑的幽门螺杆菌有很好的抑菌效
果，对铜绿假单胞菌的抑制作用及其活性成分还未
见报道。蔡芸等（2007）研究发现大蒜素与头孢哌
酮联用有协同抗铜绿假单胞菌的作用，可明显降低
头孢哌酮的用量。国内外关于中草药与抗生素联用
抗菌的报道(王春娟等，2014; Francisco et al，2013)，
提示可以从联合用药方面来评价中草药的抗菌活
性。根据本研究结果，通过进一步追踪活性成分，
从粗糠柴中得到对铜绿假单胞菌有效的化学成分，
为进一步研究其与抗生素联用抗铜绿假单胞菌的作
用效果提供一定的指导作用。
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244 广 西 植 物 36卷
表 3 10种中草药提取物对 PAS及其耐药菌株体外抑菌MIC值
Table 3 MIC of 10 Chinese herbal medicines extracts against PAS and its resistant strains (mg·mL-1)
种名
Name of species
ATCC
27853
PA
135
PA
216
PA
276
PA
281
PA
291
PA
314
PA
319
小叶藤黄-P Garcinia cowa-P 0.5 na 4 na 1 1 na na
小叶藤黄-E G. cowa-E 0.5 1 2 1 0.5 0.5 4 1
小叶藤黄-B G. cowa-B 1 4 2 1 2 4 2 na
滇南红厚壳-P
Calophyllum polyanthum-P
na na na na na na na 4
滇南红厚壳-E
C. polyanthum -E
1 1 0.5 0.5 0.5 0.5 1 1
滇南红厚壳-B
C. polyanthum -B
na na na na na na na na
续随子-E
Euphorbia lathyris-E
2 2 2 1 2 2 2 1
巴豆-E Croton tiglium-E 2 4 4 4 2 na 4 2
罗汉松-E
Podocarpus macro-phyllus-E
0.5 2 1 0.5 0.5 1 1 0.5
肉桂-B
Cinnamomum cassia -B
4 4 4 1 4 4 na 4
粗糠柴-P
Mallotus philippensis -P
na na na na na na na na
粗糠柴-E
M. philippensis -E
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.125 0.5 0.5
粗糠柴-B
M. philippensis -B
1 na 1 2 4 2 2 2
粗糠柴-W
M. philippensis -W
2 1 2 2 2 1 4 4
郁金-E
Curcuma aromatic-E
na na na na na na na na
大八角-P Illicium majus-P na na na na na na na na
大八角-E I. majus-E na na na na na na na na
大八角-B I. majus-B na na 4 na na 4 4 na
水杨梅-E Adina rubella-E 1 1 0.5 1 0.5 1 1 0.5
注：“na” 表示在 4 mg·mL -1的浓度条件下，没有抑菌效果。下同。
Note：“na” means no effective antibacterial activities at the concentration of 4 mg·mL -1. The same below.
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2期 谢俊杰等：10种中草药提取物体外抗铜绿假单胞菌作用研究 245
表 4 10种中草药提取物对 PAS及其耐药菌株体外抑菌MBC值
Table 4 MBC of 10 Chinese herbal medicines extracts against PAS and their resistant strains (mg·mL-1)
种名
Name of species
ATCC
27853
PA
135
PA
216
PA
276
PA
281
PA
291
PA
314
PA
319
小叶藤黄-P Garcinia cowa-P 2 na na na 2 4 na na
小叶藤黄-E G. cowa-E 1 4 4 2 1 2 na 4
小叶藤黄-B G. cowa-B 4 na na 2 4 na 4 na
滇南红厚壳-P
Calophyllum polyanthum-P
na na na na na na na na
滇南红厚壳-E
C. polyanthum-E
2 4 2 1 2 2 4 4
滇南红厚壳-B
C. polyanthum-B
na na na na na na na na
续随子-E
Euphorbia lathyris-E
na na na na na na na na
巴豆-E Croton tiglium-E na na na na na na na na
罗汉松-E
Podocarpus macro-phyllus-E
1 4 4 2 2 2 4 1
肉桂-B
Cinnamomum cassia-B
na na na na na na na na
粗糠柴-P
Mallotus philippensis-P
na na na na na na na na
粗糠柴-E
M. philippensis-E
1 1 1 1 1 0.5 1 0.5
粗糠柴-B
M. philippensis-B
2 na 2 4 na 4 na 4
粗糠柴-W
M. philippensis-W
2 4 2 4 na 4 na na
郁金-E
Curcuma aromatic-E
na na na na na na na na
大八角-P Illicium majus-P na na na na na na na na
大八角-E I. majus-E na na na na na na na na
大八角-B I. majus-B na na 4 na na 4 4 na
水杨梅-E Adina rubella-E 2 4 2 4 2 2 2 2
[王春娟，左国营，王根春，2014. 没食子酸与 5种抗生素联
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更 正
《广西植物》2016，36（1）发表的“王文采：中国赤车属新分类”一文，英文题目中“classification
(英文)”更正为“classificatio (拉丁文)”。更正后的英文题目为“Nova classificatio specierum sinensium
Pellioniae (Urticaceae)”。
特此声明!
《广西植物》编辑部