全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 24(5)：460—462 2004年 9月
HPLC法测定藜豆中左旋多巴的含量
黄海滨1，苏 健1，谭叶憧
(1．广西中医学院制药厂，广西南宁 530001；2．广西中医学院药学院，广西南宁 530001)
摘 要：采用 HPLC法建立测定藜豆中左旋多巴含量的方法。色谱柱为岛津c一18甲基硅烷柱(250 mm×4．6
mm，5 m)，流动相为甲醇：0．1 mol／L醋酸溶液(25：75，v／v)，以硫唑嘌呤为内标物，检测波长 280 nm，流速
1．0 mL／min，柱温为室温，供试品的前处理方法为微波辅助提取法。结果表明，该方法准确度高，线性关系
好，重现性好，平均加样回收率为 97．34 ，RSD 1．01 (n一5)，结果满意。
关键词：藜豆；左旋多巴；高效液相色谱法
中图分类号：Q946．91 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2004)05—0460—03
Determination of
macrocarpa
Levodopa 。 M ucuna0 in
W all by HPLC
HUANG Hai-binI，SU Jian1，TAN Ye—chong2
(1．Factory of Pharmaceutical Science，Guangxi Traditional Medicine University，Nanning 530001，China；
2．Pharm aceutical Science，Guangxi Traditional Medicine University，Nanning 530001，China)
Abstract；To establish a method for determination of Levodopa in Mucuna macrocarpa Wall by HPLC．Using
HPLC with Shimadzn C一18 COlumn(250 mm×4．6 mm，5 m)，the mixture of methanol and 0．1 mol／L acetic
acid(25：75，v／v)as mobile phase，detection wavelength is 280nm；Azathioprine was used as internal standard
substance，flow rate at 1．0 mL／min，column temperature at r．m．The method has a good linear dependence．
The average recovery of loading sample was 97．34 with RSD 1．01 (n一5)．The method is fast，simple and
stable．It has been proved tO be a good practice for determination of Levodopa in M、macrocarpa Wal1．
Key words：Mucuna macrocarpa Wall；Levodopa；HPLC
藜豆(Mucuna macrocarpa Wal1)，在西南各地
均有种植(蔡军等，1988)，近年来的研究表明，藜豆
中含有较高的左旋多巴成分(蔡军等，1990)，它是人
和动物体内合成去甲肾上腺素和多巴胺的前体之
一
，是经典的抗震颤麻痹药，临床上用于帕金森氏病
的治疗。从藜豆中提取左旋多巴是一重要的药用资
源。为了更准确的测定藜豆中左旋多巴的含量，我
们首次采用了 HPLC内标法来进行测定。该法比
较过去使用的紫外分光光度法、薄层扫描法、HPLC
法，测定的准确性和重现性均有所提高。另外，在样
品提取中用到了近年来新采用的微波辅助提取法比
较原来的冷浸法也是有其先进性的。
1 仪器、试药、样品
岛津 LC-10A高效液相色谱仪；微量进样注射
器 (美 国 HAMILTON 公 司)；微 波 炉 (Galanz
WP700L17型)。左旋多巴和硫唑嘌呤为中国药品
生物制品检验所提供；甲醇为优级纯，其余均为分析
纯。样品：藜豆，采 自广西东兰县，经本院中药鉴定
收稿日期：2004-02-23 修订日期 ：2004—05-18
作者简介：黄海滨(1955一)，男，广西北海人，副教授，硕士生导师，1996～1998年在德国汉堡大学从事天然药物研究工作，研究
方向为天然药物研究开发和药物分析。
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5期 黄海滨等：HPLC法测定藜豆中左旋多巴的含量 461
教研室林安平教授鉴定。
2 实验方法
2．1色谱条件
色谱柱为岛津 C-18甲基硅烷柱(250 mmx 4．6
mm，5 tLm)；流动相为甲醇：0．1 mol／L醋酸溶液(25
：75，v／v)；紫外检测器灵敏度：0．05 AUFS，检测
波长 280 nm；流速：1．0 mL／min；柱温：室温。在此
条件下，左旋多巴能达到理想的分离效果，保留时间
在 10 min左右，内标峰无干扰，理论塔板数以左旋
多巴计不低于 3 000。
2．2供试品溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取左旋多巴50 mg，加
流动相制成 100 mL(每 I mL含左旋多巴0．5 rag)。
内标溶液的制备：精密称取硫唑嘌呤 25 mg，加
流动相制成 5O mL。(每 1 mL含硫唑嘌呤 0．5 rag)。
样品溶液的制备：精密称取研成粗粉的藜豆粉
末 0．3 g，精密加入乙醇 ：0．1 mol／L醋酸(40：6O)
溶液 5O mL后，精密称定重量，微波提取 1．5 min，功
率中档，放冷后，补足上述溶液至原来的重量，过滤，
弃去初滤液，精密量取续滤液 1O mL，减压蒸干，精密
加人内标溶液 5 mL，使溶解，作为供试液。
2．3线性关系考察
分别精密量取左旋多巴对照品溶液 2、4、6、8、
1O mL，蒸干，残渣分别精密加入内标溶液 5 mL，使
溶解，吸取上述溶液各 1O L，注入高效液相色谱
仪，依本法测定，结果见表 1。以左旋多巴的进样量
表 I 线性试验结果
Table 1 Linearity test
左旋多巴进样量(X)( g) 2 4 6 8 10
b
0 5 1 0 1 5 20 0 5 1 0 1 5 20
图 1 高效液相色谱图
Fig．1 The HPLC chromatogram
A．藜豆供试液 A．sample r B．左旋多巴对照品和内标物 Standard；a．左旋多巴a-Levodopa}b：硫唑嘌呤 b-Azathioprine．
( g)为横坐标(X)，以左旋多巴和内标物的吸收峰
面积比值为纵坐标(A)，进行回归分析，结果表明：
左旋多巴进样量在 2～10 g范围内，进样量与吸收
峰面积呈良好的线性关系。回归方程：Y一6．683X
+0．002 9，r一0．999 9。
2．4精密度试验
精密量取左旋多巴对照品溶液 5 mL，加内标溶
液定溶至 1O mL，吸取 1O L注人高效溶液相色谱
仪，重复测定 5次，记录峰面积，左旋多巴峰面积平均
值为 306 673，RSD=1．7％，内标物峰面积平均值为
341 737，RSD=0．6 ，峰面积比值平均值为 0．892 3，
RSD=0．014 ，详见表 2，表明测试精密度良好。
表 2 精密度试验结果
Table 2 Accuracy test
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表 3 稳定性试验结果
Table 3 Stability test
2．5稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 1O L，分别于0，l，
2，4，6，8 h注入高效液相色谱仪，记录左旋多巴和
内标物的峰面积，结果显示供试品溶液中的左旋多
巴和内标物在 8 h内稳定(表 3)。
2．6重现性试验
取同一批采集的藜豆依法分别制成供试品溶液
5份，测定其中左旋多巴的含量。结果见表 4，平均
值为 4．55％，RSD=2．2％(n=5)，表明本方法的重
现性较好。
表 4 重现性试验结果
Table 4 Recurrence test
表 5 回收率试验结果
Table 5 Recovery test
O．1486
O．1493
6．OO
6．OO
6．OO
6．OO
6．OO
2．7加样回收率试验
精密称取已知含量的藜豆5份，分别精密加入
定量的左旋多巴对照品溶液，混均，蒸干，依法分别
测定左旋多巴的含量(表 5)。
3 讨 论
(1)根据左旋多巴在水中微溶，在稀酸中易溶的
性质，我们设计用 0．1 mol／L的醋酸溶液作为提取
溶剂，溶剂中4O 的乙醇能避免过多的水溶性杂质
的溶出。文中采用的微波提取法能使藜豆植物细胞
在很短时间内破裂，细胞内容物迅速扩散到溶剂中。
此法较以前采用的浸渍法大大节省时间，平均加样
回收率97．68 ，提取效果是比较理想的。近年来
微波提取作为一种新的提取方式，在植物提取物的
研究上发挥在了很大的作用。
(2)文献中对藜豆属植物中的左旋多巴的含量有
用紫外分光光度法(北京医学院药学系74届学员，
1974)、薄层扫描法(陈勇等，1993)、HPLC(黄海滨，
1994)法测量的报导，本文采用 HPLC内标法提高了
测定的准确度。内标物硫唑嘌呤可溶于稀酸溶液，且
在 280 nln处有最大吸收，吸收峰附近无杂质峰干扰。
参考文献：
北京医学院药学系 74届学员．1974．藜豆中左旋多巴的提取
和含量测定[J]．中草药通迅，(4)：20—22．
Cai J(蔡 军)，Zhu ZY(朱兆仪)．1988．A survey of research
on the natura!resources of Mucuna Adans．(藜豆属药用资
源研究概况)[J]．Chinese Traditional and Herbal Drugs
(中草药)，19(2)：37—40．
Cai J(蔡 军)，Zhu ZY(朱兆仪)．1990．The research of leve—
dopa inMucuna Adans．(藜豆属药物 中左旋多巴资源的研
究)[J]．Chinese Traditional and Herbal Drugs(中草药)，
21(8)：7—8．
Chen Y(陈 勇)，Zhen HS(甄汉深)，Xu)(J(许学健)，eta1．
1993．Determination of Levodopa in Maodou(Mucuna pru—
riens)and Lidou(M rt~crocarpa)by TLC Scanning(薄层扫描
法测定猫豆和藜豆中左旋多巴的含量)[J]．Chinese Tradi—
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Huang HB(黄海滨)，Xu XJ(许学健)，Feng JF(奉健芳)，et
n￡． 1994． HPLC Determination of Levodopa in Mucuna
pruriens var．utilis(高效液相色谱法测定猫豆中左旋多巴的
含量)[J]．Guihaia(广西植物)，14(3)：293—294．
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