全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 21(4)：367— 370 2o01年 11月
广西金丝桃属植物有效成分金丝
桃素的含量测定研究
李典鹏，梁小燕，文永新，陈海珊，方 宏
(； 广西植物研究所，广西桂林54106)
摘 要：采用 uv—VlS法和HPLC法检测了广西产金丝桃属植物丑其提取物中有效成分金丝桃幕的含量
建立了HPLC测定金丝桃紊的新方法，诙法有良好的重现性丑精密度。
关键词：金丝桃属植物；金丝桃葛c；含量测定
中图分类号：Q946．88 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(200L)04—0367—04
Determination of effective constituents hypericin
of Hypericum from Guangxi
LI Dian—peng，LIANG Xiao—yan，W EN yong—xin，
CHEN Hai—shan，FANG Hong
(Guangxi lnMitute Botany·Guangxi Z t^tangzu Agt~omous Region and
The Chi~se A~ademy o／Sciences，Guilin 541006I Ch Ena)
Abstract：The UV—VIS method and HPI．C method were applied tO determine Hypericum plants which is native
tO Guangxi and the effective constituent from its extract，from which we have established a new HPI C method
t。determine hyperiein This method has good reproducibility and sensitivity．
Key words：Hypericum I．．；bypericin；determination
金丝桃 属(Hypericum I ．)植物 属于金丝桃科
(Guttiferae)。该属植物全世界约有 400余种，分布
极为广泛。国产金丝桃属植物共有 55种，8亚种。 ，
且大部分为特有种，全国各地均有分布，但主要集
中在西南地 区。 。该属植物的模式种为贯叶连翘
(Hypericum perforatum I ．)，贯叶连翘提取物在欧
美用作抗抑郁药。 ，俗称St．john’s wort extract，其
抗抑郁的主要成分为金丝桃索(Hypericin)和假金丝
桃素(Pseud。hypefjcin)。近年来还报道它们具有抗
逆转录病毒及抑制 HIV活性的作用 ．可用于艾
滋病的治疗，从而引起医药界 的重视。金丝桃素
(Hypericin)的含量测定方法 国外有 TLC法 ，HPLC
法，uV／VIS法 ，国内也有采用 HPLC法测定贯
叶连翘制剂及其 提取物 中金丝桃 素含量 的报
道。’ ，但采用 HPI C法测定金丝桃属(Hyper 2Yum
I ．)原植物的金丝桃索含量，特别是测定广西金丝
桃属原植物的金丝桃索含量未见相关研究与报道。
研究中我们发现分布在广西的金丝桃属植物约为 9
收稿 日期 ：2001—02—06
作者简舟：李典鹏(1969一)，男，广西资谤c^ 、助理研究员、从事植物化学研究与开发工作
基盒项目：广西科学院基盆(桂科院研 9801){桂林市科委(编号980135)资助项日．
维普资讯 http://www.cqvip.com
368 广 西 植 物 21卷
种，我们采集了其中的6种，对其中的活性成分金丝
桃素进行了含量测定与筛选研究，筛选结果我们将
另文报道，本文仅报道对广西金丝桃属植物的金丝
桃素含量的 UV／VIS和 HPLC测定 方法及测定结
果，特别是关于 HPI C测定的方法学研究，该方法
分离效果好、方法准确、灵敏度高、重现性好。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪，并配有两台 510泵、
U6K型手动进样器、柱恒温仪、紫外 486检测器；岛
滓 210A紫外分光光度计。
金丝桃索 (Hypericin)对照品(纯度 85 ，sigma
公 司)；贯叶连翘 (Hyperkum perforatum I ．)，野金
丝桃(H．atenuxxtum Choisy)，田基黄(H．japonicum
Thb．)，小连 翘(H．erectum Thumb)，金 丝桃 (H．
chinese I ．)，采 自广西不同地区，经分类室韦发南、
毛宗铮教授鉴定。贯叶连翘提取物 I号由灵川海洋
天然植物制品厂提供，贯叶连翘提取物 I号和野金
丝桃提取物由课题组在实验室制备。
2 UV—VIS测定方法
本方法参照草药学家Roy Upton主编的《美国
草药 St John’s wort momograh》一书中Uv—VIS法
测定总金丝桃素的含量
2．1样品制备与测定
原植物样品的制备：原料样品经 6o。c左右烘
干，研碎过 2O目筛，精确称取样品 2．000 g于小滤
纸简 在索氏提取器底瓶中加入 150 mI 乙醚，索氏
抽提 5 h，移去乙醚，换 95 乙醇 1 50 mI，再抽提 6
h，乙醇相转移至 250 mI 容量瓶中，定容至刻度，以
95 乙醇为空白于岛津一210A紫外分光光度仪在
590 nm渡长下测定 A值 。
提取物样品制备：室温条件下，准确称取提取
物 70～100 nag，用 2O mI，95 乙醇在超声波上溶解
5～10 rain，冷却定容至25 mL容量瓶。于光照条件
下放置 2．5～3 h，用滤纸过滤，取 5 mI 滤液用 95
乙醇稀释至 25 mI 容量瓶，以 95 乙醇为空白，在
j90 rim下测定 A值 。
2．2样品含量的计算方法
总金丝桃素含量
A一590 nm波长下的吸光度值；w一样品的准确
重量(g)；870一Hypericin在 590 nm下的特定吸收系
数
原料植物样品及部分提取物样品的 uV—VIS
测定结果见表 2。
2．3金丝桃素(Hyperl~in)对照品的 uV扫描 图
见 图 1
l
田 l 金丝桃素的紫外扫描图谱
Fig 1 UV absorption spectrum of hypericln
3 HPLC测定法
3．1色谱条件
色谱柱：Spherisorb Ct (4．6×250 nnl，5 m)；流
动相：甲醇一乙酸乙酯一0．1 M磷酸二氢钠(267：208
：525)；流速 ：1．0 ml ／min；检测波 长 ；590 ilm；柱
温：4O。C；进样量：1O I 。色谱图见图 2。
3．2线性关系
精确称取金丝桃素对照品 1．0 nag于 5 mI 容
量瓶，用甲醇超声波溶解，稀释至刻度，摇匀，精密
吸取此溶液 100 稀释至 1 mL，C=O．02 mg／mL，
分别进样 2、4、8、12、16、2O ，测定峰面积以进样
量( g)为纵坐标，峰面积为横坐标，求得 回归方程
为：
Y一 一1．92×1O + 3．13×】o X r一0．999 95
说明金丝桃素的进样量在 0．04～0．5 ug范围
维普资讯 http://www.cqvip.com
4期 李典鹏等：广西金丝桃属植物有效成分金丝桃素的含量测定研究 369
内线性 良好 。
3．3最低检测限
将金丝桃素对照品母液c=0．02 mg／m1 稀释
100倍，进样 5 p-L，以信噪比3：l为指标 ，确定该方
法的最低检测限为 0．001 g，说明该方法的灵敏度
非常好
3．4加标回收率，重现性试验
精密称取提取物样品 50 mg于 5 m1 容量瓶，
加人 0．1 6 g金丝桃素对照品，进样 20 I ，测定回
收率如表 1。
0 4 8 1 0
A C／而jn
图 2 金丝桃紊对照品(A)及样品(B)HPI C色谱图 I．金丝桃紊(8．74 min)
Fig-2 The HPLC chromatogranl of Hyperlcin(A)and its sample(B) 【
． Hypericin(8．74 min)
表 1 金丝执素的回收率实验
Table 1 Recoveries of Hypedcin
往 ：n芊4
3 5精密度试验
金丝桃索对照品溶液(c=0．02 mg／mI )，进样
1 0 I ，连续进样 6次，测定峰面积，计算值为：0．205
6、0·200 7、0t 205 5、0．201 0、0．199 7
、 0．203 0 ／zg．
RSD= 0．71 。
3．6稳定性试验
将新配制的样 品溶 液分别 置 日光及室 内 自然
光 下放置 0、0-5、l、2、2．5、3、4 h后再测定 ，结果表
明光照放置 z，5 h后金丝桃索的峰面积基本稳定。
试验中同时还考察了金丝桃寨的热稳定性，将样品
表 2 不同样品的金丝拄素台■测定结果
Table 2 Contents of Hypericln in different sample
室温下测定及置 30、50、70、90℃ 水浴加热 1 h，2 h
后再测定 ，试验过程 中注意避 光，测定结 果基本 一
致。
3．7溶液制备与样 品测定
标准液制备：取对照品 1．0 mg，用甲醇少量超
声波溶解，冷却后定容至 5 mL，摇匀。精密吸取此溶
液 lO0 I 稀释至 l mL，配成金丝桃索浓度为 c一
维普资讯 http://www.cqvip.com
370 广 西 植 物 2l卷
0．02 mg／ml 的甲醇溶液。
原植物样 品溶液 的制备 ：取植物样 品于 6O℃
左右烘干，弃去茎杆，研碎，过 4O目筛，精密称取样
品 1．000 g于小滤纸筒内，于索氏提取器中先用乙
醚脱脂 ，至乙醚层基本 无色 止，换 95 乙醇提取 6
h，回收乙醇，撮膏用甲醇溶解，定容至 l0 mI 容量
瓶，过滤．进样 20 I 测定峰面积。
提取物样 品制备：精密称取提取物粉末样品
l00．0mg于 10mL容量瓶 中，加入少量甲醇，超声
波溶解，冷却后定容，过滤，滤液进样 l0 I 测定峰
面积。
样品的铡定结果见表 2。
4
4．1 HPLC检测波长的选择
从金丝桃素对照品的紫外扫描图谱(图 1)来
看，金丝桃索在 2：84、328、380、473、508、547、590 nm
处均有吸收，其中 284、590 rlm两处峰形较尖，吸收
值大，理论上这两个波长都可以作为 HPI C的紫外
检测波长，美国草药St．John’s wort monograh推荐
的HPLC检铡方法所使用波长为284 nm。本实验我
们对 284、590 nm这两个波长进行了检测，结果发
现．采用 284 D_m作为检测波长，对金丝桃素类成分
检测专一性差，许多其他类成分如黄酮类、黄酮甙
类成分均有信号 ，且对金丝桃素的检濑6灵敏度偏
低，基线难稳定．峰形对称性差，而采用 590 mn作
为检测波长，对样品和对照品来说，其峰的对称性、
分离度、基线稳定性均大有改善，且检测灵敏度高，
杂质干扰峰少。因此我们选择 590 ilm作为 HPI C
的紫外检测波长。
4．2 HPLC流动相的选择
在流动相选择中我们发现在甲醇与水中加入
一 定量的乙酸乙酯可大大改善峰的对称性和峰检
测信号 ，同时 pH值对分离也有较大影响，我们以加
人缓冲液磷酸二氢钠来调节 pH值可达满意的分离
效果，最后我们摸索出的流动耜为甲醇～乙酸乙酯
O．1 M 磷酸二氢钠 (2：67：208：525)。
4 3稳定性试验
金丝桃素的光敏性较强，光照对样品溶液中金
丝桃素含量有一定影响，但在 100℃ 以内，测定温
度对金丝桃素的影响不是很大
本文采用 UV VIS和 HPI C两种 方法对广西
的金丝桃属植物及部分提取物进行了比较测定 ．发
现两种方法的羽j定结果偏差较大，这是因为 UV—
VIS法测定的为总金丝桃素含量，该方法受色素等
其它类在 590 ilm下有吸收的物质干扰严重；HPI C
梭出的为金丝桃素单体物质的含量，相对准确可
靠，因此为国际上认可的贯叶连翘提取物质量控制
方法．但对生产厂家来说，UV VIS法简便，快速．成
本低，也不失为一种好的质控方法。另外，从测试结
果我们也看到：广西金丝桃属植物种类问金丝桃素
含量差异大，这与植物 的品种 ，产地 ，采收时 间，提
取工艺等有关，这方面，我们正进行进一步的研究。
参考文献：
C13李锡文，李延辉．童绍全 ，等．《中国植物志》第五十卷
第二分册[M]．北京：科学出版社，1990、2—72．
C23潘映红，郭宝林 ，彭 勇．国产金丝桃属药用植物资源
现状及利用前景_J]．中药材，1993．16(3)：14—18．
[3]刘一兵 贯叶金丝桃研 究进展 I——原植物、采收、
制剂和化学成分[J]．国外医药——植物药分册．
1998，13(3)：99— 104．
C4J朱晓薇．贯叶金丝桃研究进展 1 药代动力学、药
教学和治疗应用(续)[J]．国外医药——植物药分册，
1998，13(5)：210— 214．
5]Veronika Butterweck，Frank Petereit．FIi[ke W inter—
hoff， a1．Sotubilized Hyperic[n and Pseudohypericin
from Hypericum perforatum Exert AⅡtIdeDressant Ac—
t[vity in the Forced swimming Test[J]．Ptant~M ．，
1998．64：291— 294．
[6]Peter M Bork，Susanne B~her．M Lienhard Schm[tz．et
a1．Hypericio as a Non—Antioxidant Inhibitor of NF—kB
[刀．Planta Med．，1999，65：297-300．
C73 Giuseppe M，Francesco I ，Paoline C High—perfor
mance liquid chromatographic determ[natlon of the bio_
logically active principle hypericin In phyt0therapeut c
vegetable extracts and alcoholic beverages[J ．Chro-
matography，1996t 731：336～ 339．
[8] Debska W ，Zmndzinska I． I)ensitometric and spec—
trophoto—metric detemination of hyperlcin in St．John’s
Wort(Herba Hypericin)LJ]．Chem．Abstracts，1983，
98：132414w．Herba Po1．1982 28：21— 29．
C93孙 微 ，施肖峰 孙志浩．贯叶连翘提取物中金丝桃
紊的初步HPLC测定LJ]．中国医药工业杂志，Z000，
31(4)：I72 173．
[103王 峰．高天兵 ，田金改．RP—HPLC法测定贯叶连
翘片剂中有效成分金丝桃紊和金丝桃苷的含量[J]．
药物分析杂志，2000，20(8)：101—103．
维普资讯 http://www.cqvip.com