全 文 :广 西 植 物 Guihaia 30(5):626— 628 2010年 9月
广西人工栽培铁皮石斛内生菌根的研究
曹 斌1,廖月葵2*,何开家1,周 军1,司徒百兴3,赖其瑞
(1.广西中医药研究院,南宁 530022;2.广西中医学院 药学院,南宁 530022;
3.广西大新聚龙铁皮石斛种植有限公司,广西 崇左 532300)
摘 要:通过光学生物显微镜及Qwin图像分析系统,对人工繁育栽培的铁皮石斛各生长期植株的内生菌根
进行了观察分析。结果表明:铁皮石斛具有典型的内生菌根;铁皮石斛根内共生菌不是其原有的,而是通过栽
培基质传与铁皮石斛的根而共生。被真菌侵染的区域大,其植株生长茂盛,真菌对铁皮石斛的生长发育可能
有促进的作用。
关键词:内生菌根 ;铁皮石斛 ;人工栽培
中国分类号 :Q949.9 文献标识码:A 文章编号 :100O一3142(2O10)05-0626-03
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Dendrobium 0 t{} canale
Q Bin1,LIA0 Yue-KuiZ;HE Kai-JiaI,ZHOU Jun1,
SITU Bai-Xing3,LAI( Rui1
(1.Cmangxi Institute of Chinese Medicine and Pharmaceutical Sciences,Nanning 530022,China;2.Pharmaceutical
Colege of Guangxi Colege of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530022,China;3.Vuangxi
Daxin Julong Tiepishihu Plant CO,Ltd.,Chongzuo 530022,China)
Abstract:The roots of cultivated Dendrobium officinale with endomycorrhiza from Guangxi were observed using the
Qwin image analysis system in different grwoth periods.The results showed that the roots of D.officinale had typi-
cal endomycorrhiza and the endophyte fungi came from their substrates and then co-existed with D.officinale.Fur-
thermore,D.officinale could grow better after the more endophyte fungi immigrated.Thus,endophyte fungi could
increasethe growth ofD.officinale.
Key words:Endomycorrhiza;Dendrobium officinale;cultivation
铁皮石斛(Dendrobium officinale)为兰科植物石
斛属多年生的附生草本植物(吉占和,1999)。是一种
珍稀的药用植物和室内观赏植物(王云等 ,2008)。功
能与主治为益胃生津,滋阴清热。用于阴伤津亏,口
干烦渴,食少干呕,病后虚热,目暗不明(中华人民共
和国药典委员会,2005)。其含有石斛碱、石斛次碱和
石斛宁等多种生物碱,具有清音明目、养胃清热、增强
免疫和抗肿瘤等功效(丁亚辛等,1998;莫昭展等,
2008;邵华等,2004)。利用铁皮石斛为原料开发了广
西名牌产品“金嗓子喉宝”、“复方鲜石斛颗粒”、“石斛
夜光丸”等产品。因铁皮石斛被人为过度采伐以及繁
殖率低等原因,致使野生资源濒临绝种、石斛药材供
需关系紧张,已被国家列为重点保护药用植物。铁皮
石斛生长对环境要求苛刻,除对气候和土壤等有较高
要求外,同时要有真菌的参与。菌根(Myeorhiza)是
共生真菌生存于健康的陆生植物根组织上而形成的
联合吸收器官,是植物在长期的生存过程中与菌根真
菌共同进化的结果(高倩等,2009)。经相关研究证
实,真菌对石斛的生长发育有促进的作用(杨有联等,
2005;李明等,2000)。在人工栽培过程中为了提高石
斛栽培的成活率,科研人员多采用对石斛组培苗进行
基部放置菌种的手段来提高幼苗的成活率 本文对
收稿日期:2009-04—13 修回日期:2010-09—29
基金项目:广西科技攻关项目(桂科攻0815005—2—8)[Supported hy Key Technologies Research and Development Program of Guang~(081S005-Z-8)]
作者简介:首斌(1964一),女,广东广州市人 ,助理研究员,主要从事药用植物薪产品的开发与研究 ,(Bmail)ca0binj@163.corn。
。遥讯作者(Author for correspondence,E—mail:lykgxnn@163.corn)
5期 曹斌等 :广西人工栽培铁皮石斛内生菌根 的研究 627
广西铁皮石斛内生菌根在不 同生长阶段显微结构变
化的进行了研究 ,为铁皮石斛大面积人工栽培、品种
优选提供资料依锯。
1 材料与方法
1.1材料
材料采集于广西大新聚龙铁皮石斛种植有限公
司种植基地各生长阶段 的铁皮石斛 。选用铁皮石斛
的无菌组培苗根、茎上部分孽生苗长达 6 cm以上的
未接触栽培基质的气生根、炼苗 60 d植株根、生长 8
个月发育不良的植株根、正常生长 5个月的植株根、
生长一年至采收期的植株根的中部进行试验。
1.2方法
将根中部切成 0.2 cm小段,用(FAA)固定,按
常规石蜡切 片法制作供显微观察 的切片。切片厚
10/zm,番红一固绿染色 ,置于 MPS-60型生物显微镜
及 Qwin图像分析系统(德国莱卡)进行观察分折。
2 结果
2.1铁皮石斛根的外形特征
铁皮石斛不同生长阶段的根形态有所不同,组培
苗(无菌苗或称瓶培苗)有 3~4条根,直径约 1 ITEm,
长 3~8 cm,浅绿色。经过炼苗 60 d后,新增须根 2~
3条,长度可达到 15 cm,颜色为乳 白色或黄白色。到
采收期铁皮石斛的根系非常发达,根可长达28 cm,直
径 1~2 into,颜色为白色或浅黄白色。
2.2铁皮石斛根横切面特征
铁皮石斛根由根被,皮层及中柱构成(图版I)。
图版 I 铁皮石斛不同生长阶段根横切面,示根的结构及菌丝存在的部位 (×400) 1.无菌组培苗根;2.未接触栽培基质气生
根;3.炼苗60 d植株苗根;4.生长发育不良植株根;5.正常生长 5个月植株根;6.生长一年至采收期植株根。
Plate I Transverse section of the root of Dendrobium officinale at diferent growth stages(×400) 1.Root in aseptic tisue
culture:2.Aeria1 rCOt in free substrates culture;3.Shoot rot on 60 d after transplantation;4.Under development rot 1 5.Normal root grown for 5
months;6.Normal root cultivated for 12 months,or at harvest stage.
628 广 西 植 物 30卷
根被细胞较小为近圆形或椭圆形,向内依次茎向延
长,细胞较大,呈多角形,细胞壁薄,具纤维素细网络
状增厚;皮层壁薄组织的外层和内层分化为外皮层和
内皮层,外皮层为一层径向延长的多角形细胞,细胞
壁较厚和木质化,间隔分布有壁薄的通道细胞,这是
真菌从根被细胞向内皮层侵入的人 口。紧邻的外皮
层薄壁细胞较小,有的含有草酸钙针晶束,向内为6
~ 7层近圆形或椭圆形的薄壁细胞 ,真菌侵染后菌丝
在细胞内繁殖,被真菌侵染的细胞较大。内皮层为一
层排列整齐近方形细胞,包围着为中柱。无菌苗根、
未接触基质的气生根、生长期植株根、采收期植株的
根的结构都具有上述特征。有些学者认为只有成熟
的根被细胞,壁具有纤维素的细网络加厚(刑晓科等,
2005),而我们从无菌根苗也观察到纤维素的细网络
细胞(图版 I:1,根被组织)。
2.3不同生长期的根中真菌繁殖情况
通过组织解剖和显微镜的观察 ,在皮层薄壁细胞
中菌丝的存在,从无到少量至复杂的菌丝团;而无菌
组培苗的根和未接触栽培基质的气生根均未观察到
菌丝(图版 I:1,2)。经过 60 d炼苗期后发现有呈线
状菌丝生成(图版I:3)。生长发育不良植株的根中菌
丝及菌丝团较少(图版 I:4)。菌丝进入细胞后,逐渐
发展成为菌丝团。这期间为真菌感染的最高峰,同时
是植株生长最茂盛的花前期(采收期),根系最发达,
根呈白色,皮层中有大量的共生菌菌丝和菌丝团,有
的细胞腔内充满菌丝及菌丝团(图版I:5,6)。
3 结论与讨论
(1)在 自然条件下,铁皮石斛与真菌共生成菌根
的现象非常普遍(刑晓科等,2005),一般根尖及伸长
区很少有菌丝。被真菌侵染的区域越大,菌丝及菌丝
团越多,植株生长越茂盛。成年兰科植物与真菌共生
形成内生菌根是 自然界的一种普遍现象,菌根真菌为
兰科植物提供生长、繁殖所必需的营养物质(伍建榕
等,2006)。但真菌入侵铁皮石斛的条件和机理有待
进一步研究 。
(2)无菌铁皮石斛组培苗的根和未接触栽培基质
的气生根均没有菌丝。铁皮石斛根内共生菌不是本
身原来带有的,可能是在 自然条件下栽培基质中具有
铁皮石斛所需的共生菌,真菌传予铁皮石斛的根内形
成共生。在栽培实践中今后如何通过将菌种按一定
比例混合于基质,提高铁皮石斛的产量还有待进一步
研究。
(3)有学者认为老根的根被才有纤维素的细网络
细胞(李明等,2000;刑晓科等 ,2005),而根据我们的
观察,无菌苗根也有纤维素的细网络细胞存在。
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