全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 31(5)：690— 694 2011年 9月
DOI：10．3969／j．issn．1000—3142．2011．05．023
脱油油樟叶提取物的体外抑茵活性研究
张 超1，魏 琴 ，杜永华1 ，周黎军 ，蒋勤久2，殷 中琼0
(1．宜宾学院 生命科学与食品工程学院 发酵资源与应用四JI省高校重点实验室，四川 宜宾 644000；2．宜宾县生产力
促进中心 ，四川 宜宾 644000；3．四川农业大学 动物疫病与人类健康 四JI省重点实验室 ，四川I雅安 625014)
摘 要：探讨了油樟叶提取挥发油后的残渣的乙醇浸膏和乙醇浸膏的石油醚萃取相、乙酸乙酯萃取相、正丁
醇萃取相和水萃取相对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 、沙门氏菌等三种常见致病菌的最低抑菌浓度(MIC)、最低
杀菌浓度(MBC)以及抑菌曲线 。结果显示 ，各提取物对大肠杆菌的抑菌活性为正丁醇萃取相 (MIC、MBC：
7．813、15．625 mg／mL)>乙酸乙酯萃取相(MIC、MBC：15．625、31．125)>乙醇浸膏和水萃取相(MIC、MBC：
31．25、62．5)>石油醚萃取相(MIC和 MBC都高于 500)；对金黄色葡萄球菌的抑菌活性为石油醚萃取相和乙
酸乙酯萃取相(MIC、MBC：7．813、15．625)>正丁醇萃取相(MIC、MBC：15．625、31．125)>乙醇浸膏和水萃取
相(MIC、MBC：31．25、62．5)；对沙门氏菌的抑菌活性为乙酸乙酯萃取相(MIC、MBC：3．9063、7．813)>正丁醇
萃取相(MIC、MBC：15．625、31．125)>乙醇浸膏和水萃取相(MIC、MBC：31．25、62．5)>石油醚萃取相(MIC、
MBC：31．25、125)。由此可见 ，油樟叶提取物中存在抗菌活性物 ，其活性成分主要集中在 乙酸乙酯萃取相 和正
丁醇萃取相。曲线结果表明，脱油后的油樟叶提取物对三种细菌的作用均属于浓度依赖型。
关键词 ：油樟叶；提取物；抑菌活性
中图分类号 ：$644．6，Q935 文献标识码：A 文章编号 ：1000—3142(2011)05—0690—05
The antibacterial study on extracts from de-oil
leaves oI ’ n nnamomum longepaniculatum
against three of the pathogenic bacteria
ZHANG ChaoI，WEI QinI，DU Yong-HuaI ，ZHOU Li—Jun ，
JIANG Qin-Jiu2，YIN Zhong-Qiong0
(1．Colege of Life Science and Food Engineering Key Lab of Fermentation Resource and Application of Institutes of Higher
Learning in Sichuan，Yibin 644000，China；2．Yibin Co unty Productivity Promotion Center ，Yibin 644000，China；3．Key
Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province，Sichuan Agricultural University，Ya’an 625014，China)
Abstract：The antimicrobial activity of ethanol extracts from the de-oiled leaves of Cinnamomum longepaniculatum
and system solvent extraction by petroleum，ethyl acetate and N-butano1 against the Escherichiu coli，Staphylococcus
n re“s，Salm0 ell口．Minimum inhibition concentration(MIC)，minimal bacteriocidal concentration(MBC)and time-
kil curves 0f extracts were studied． And the activities against the three strains of bacterial were compared．The re—
sultrs showed that。for E coli，the N—butanol extracts(MIC，MBC：7．813，15．625 mg／mL)> ethyl acetate extracts
(MIC，MBC：15．625，31．125)> the ethanol extracts and water extracts(MIC，MBC：31I 25，62．5)> petroleum ex-
tracts(MIC and MBC> 500)．For S．aureus，petroleum extracts and ethyl acetate extracts(MIC，MBC：7．813，
收稿日期：2010—12—06 修回日期：2011-03 17
基金项 目：四川省科技支撑项 目 (2009FZ0090)；宜宾市科技项 目 (200903019)[Supported by the Science and Technology Project of Sichuan Province
(2009FZ0090)；the Science and Technology Project of Yibin City(200903019)]
作者简介：张超(1966一)，男，重庆开县人，副教授 ，主要从事生物工程与食品生物技术领域研究，(E—mail)chzhl966@126．com。
通讯作者(Author for correspondence，E—mail：yonghuad@163．com)
5期 张超等：脱油油樟叶提取物的体外抑菌活性研究 691
15．625)>N—butanol extracts(MIC，MBC：15．625，31．125)~ ethanol extracts and water extracts(MIC，MBC：31．25，
62．5)．For Salmonell口，ethyl acetate extracts(MIC，MBC：3．9063，7．813)>N—butanol extraets(MIC，MBC：15．625，
31．125)> water extracts(MIC，MBC：31．25，62．5)> petroleum extracts(M IC，MBC：31．25，125)．C longepanicu—
Zn￡“，n had some antibacterial active compound s and the main active constituents existed in ethyl acetate extracts and
N_butano1 extracts．The extracts of de-oiled leaves of C．1ongepaniculatum displayed concentration-dependent rela—
tionship with al1 the three pathogenic bacteria．
Key words：Cinn~ omum longepaniculatum leaves l extracts；antibacterial activity
油樟 (Cinnamomum longepaniculatum)是樟科
(Lauraceae)樟属 (Cinnamomum)植物，为 中国特有
树种 ，已被列为 国家 Ⅱ级重点保护野生植物。油樟
主产四川省宜宾市。据调查，宜宾的油樟资源占全
国的 7O ，而 目前对四川宜宾油樟 的开发与利用主
要以油樟挥发油粗产品为主，对叶产品的深加工及
其它有用产物的开发较少 ；在提取油樟叶挥发油时，
将油樟叶通过水蒸气蒸馏 获得 叶挥发油后 ，剩下大
量的残渣副产物 。每年有 近 100 000 t的干废叶残
渣被抛弃，不仅浪费资源，还污染环境，这些问题导
致了油樟有价值的产品少、附加值低等不良后果，也
增加了企业处理废料的成本，严重限制了油樟的综
合利用与开发。
油樟 叶挥发 油据报道具有抗 菌活性 (魏琴等 ，
2006，2009)，提取过挥发油的油樟叶残 渣可用于食
用菌的种植，但出菇周期延长，目前没能在生产上得
到应用(周洪昌等，1991)。叶残渣是否具有抗菌活
性，国内外未见报道。大肠杆菌 (Escherichia coli)、
金黄色葡萄球菌(s 口p z0c∞f“5 aureus)、沙门氏
菌(Salmonella)是三种空气 中常见致病菌 ，为 了充
分利用与合理开发油樟资源 ，寻找油樟产品的新价
值 ，促进油樟产业的可持续发展 ，本课题拟 以提取过
挥发油的油樟叶为研究对象 ，研究油樟叶残渣提取
物的抗菌活性，以期为综合利用油樟资源奠定基础。
1 材料与方法
1．1菌种与培养基
金黄色葡萄球菌 (ATCC 25923)、埃希 氏大肠
杆菌 (CMCC(B)44102)、沙 门氏菌 (ATCC 50041)
的菌种均由四川农业大学食品科学学院微生物实验
室提供；MH肉汤培养基、营养琼脂培养基、麦康凯
培养基)、Baird．Parker琼脂基础培养基 、SS琼脂培
养基 ，均购 自北京奥博 星生物技术有限公司。
1．2油樟叶提取物药液的制备
将提过挥发油的油樟叶残渣在 45℃的烘箱中
烘干或者 自然条件下风干 ，再粉碎过 20目筛。加入
10倍量的 95 乙醇 ，在 85℃下索氏提取 8～10 h，
将提取液趁热过滤后旋转蒸发并挥发干溶剂得
95 乙醇浸膏。称取适量 的 95 乙醇浸膏 ，用水分
散均匀，用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次
进行萃取分离。将各萃取层真空旋转浓缩至干，得
石油醚萃取相、乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃取相和水
萃取相。95 乙醇浸膏和各组萃取相用二甲基亚砜
一 水溶解配成母液，临用前用 MH 肉汤稀释。
1．3菌悬液的制备
将大肠杆菌接种到麦康凯培养基的平板上；沙
门氏菌接种 到 SS琼脂培养基 ；金黄色葡萄球菌接
种到 Baird．Parker琼脂基础培养基上进行纯化 ，恒
温 37℃培养 18～24 h，用接种环分别挑取单个特征
菌落分别接种 于 5mL灭菌 MH 肉汤培养基 中，置
3≯℃恒温箱中培养 18~24 h。培养后取 0．5 mL已
制备好的菌悬液加入到 4．5 mL的 MH培养基(或
灭菌生理盐水)中依次进行 1O倍 比稀释 ，选取适当
的浓度涂板，每个浓度 3个平行 ，选取菌落数在 3O
～ 300之间进行计数 ，用 MH 肉汤 (或灭 菌生理盐
水)稀释菌悬液浓度至含菌体 1O ～lO。CFU／mL后
备用 。
1．4最低抑菌浓度的测定
参考戴 自英(1985)的描述采用试管二倍稀释
法，以含不同浓度油樟叶提取物的含菌 MH肉汤为
试验组 ，同时设 3个对照组 ，即以含菌液 的 MH 肉
汤为菌液对照 、不含菌液的 MH 肉汤为 MH 肉汤培
养基对照 、加有二甲亚砜的含菌 MH 肉汤为二 甲基
亚砜溶剂对照 。37℃温箱 中培育 18～24 h后 ，观
察结果 。当菌液对照和二 甲基亚砜溶剂对照混浊 ，
而 MH 肉汤培养基澄清时，以无细菌生长的油樟 叶
提取物浓度为最小抑菌浓度 (MIC)，各油樟叶提 取
物设置 10个浓度梯度 ，其最高浓度为 250 mg／mL，
每个浓度梯度做 3个重复。
1．5最低杀菌浓度的测定
观察药物 MIC以上未见细菌生长 的各管培养
692 广 西 植 物 31卷
物，分别取 0．1 mL移种至不含药 的营养琼脂平皿
上，轻轻推开药液，置 37℃培养过夜，观察有无细菌
生长。按一般规定，平皿培养基中，计数少于 5个菌
落者作为该药的最低杀菌浓度(MBC)。
1．6抑菌曲线的测定
参考 Zhang等(2010)的方法，选取最佳抑菌提
取物 ，分别做其在 0．5MIC、1MIC、2MIC浓度下对
三种细菌的抑菌曲线，以时间为横坐标，以细菌数目
的对数为纵坐标作 图，得抑菌 曲线 。取对数生长期
的细菌接种 到 Muller Hinton培养基 中，使该液体
培养基中含苗量为 10 cfu／mL,加入 3种细菌的各
自最佳抑菌提取物，使其终浓度为 0．5MIC、1MIC、
2MIC，分别于 0、1、2、4、8、12、24、36 h取出菌液 100
L按 1O倍顺序稀释，选取适当浓度的菌液 100 L
接种于琼脂平板上 ，轻轻推开菌液 ，置 37℃培养 18
h，挑选平板上生长 30~300个 的菌落计数。求两个
表 1 油樟叶提取物对三株细菌的 MIC值 (mg／mL)
Table 1 The MICs of 3 strains bacteria of extracts from C．1ongepaniculatum
平板平 均菌数 ，根据稀释浓度算 出每 1 mL的活苗
数 ，将每个菌落计数 的对数与培养 时间在直角坐标
系中绘 出油樟提取物对细菌的时间抑菌 曲线 。
2 结果
2．1油樟叶残渣提取物的抑菌效果
从表 1可知，各提取物对大肠杆菌的抑菌活性
为正丁醇 萃取 相 (MIC、MBC：7．813、15．625 mg／
mL)> 乙酸 乙酯 萃 取 相 (MIC、MBC：15．625、
31．125)> 乙 醇浸 膏 和水 萃取 相 (MIC、MBC：
31．25、62．5)>石油醚萃取相(MIC和 MBC都高于
500)；对金黄色葡萄球菌的抑菌活性为石油醚萃取
相和乙酸乙酯萃取相(MIC、MBC：7．813、15．625)
>正丁醇萃取相(MIC、MBC：15．625、31．125)> 乙
醇浸膏和水萃取相(MIC、MBC：31．25、62．5)；对沙
门氏菌的抑菌活性为乙酸乙酯萃取相(MIC、MBC：
3．9063、7．813)> 正 丁 醇 萃 取 相 (MIC、MBC：
15．625、31．125)>水 萃 取 相 (MIC、MBC：31．25、
62．5)>石油醚萃取相 (MIC、MBC：3l_25、125。乙
醇浸膏和水萃取相对三种细菌的抗 菌活性相 当，其
他萃取相对三种细菌有不同程度 的抑制作用 ，石油
醚萃取相对金黄色葡萄球菌的活性最强，对其他两
株细菌没有明显活性；乙酸乙酯萃取相对沙门氏菌
的活性最强 ，其次分别是金黄色葡萄球菌和大肠杆
菌 ；正丁醇萃取相对大肠杆菌效果最好 ，对金黄色葡
萄球菌和沙门氏菌的活性萃取相当。总体来说，油
樟叶残渣的抗菌活性主要集中在乙酸乙酯萃取相和
正丁醇萃取相 。
2．2油樟叶残渣提取物对三种细菌的抑菌 曲线
正丁醇萃取相对大肠杆菌、乙酸乙酯萃取相对
沙门氏菌和石油醚萃取相对金黄色葡萄球菌的生长
曲线的影 响见 图 1～3。三种细菌在溶剂对照试验
中能持续生长 ，并完成 了生长过程需要 经历 的调整
期 、对数期和稳定期 ，最后逐步进入衰亡期 。在 0．5
×MIC值提取物浓度下 ，三种细菌的生长情况基本
同溶剂对照组，其中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌在
作用后，12 h内与大肠杆菌萃取相 比较，其生长速
度较缓慢；在 MIC值提取物浓度下，大肠杆菌和沙
门氏菌的增长速度缓慢 ，活菌数 目一直维持在一个
较低的水平 ；金黄色葡萄球菌直接进入衰亡期 ，表现
为明显的杀菌活性 。在 2×MIC值提取物浓度 下 ，
三种细菌的生长均直接进人衰亡期 ，没有调整期 、对
数期和稳定期的变化。乙酸乙酯萃取相、正丁醇萃
取相和石油醚萃取相杀死所有的大肠杆菌 、沙 门氏
菌和金黄色葡萄球菌所需要的时间分别为 24、36和
36 h。
3 讨论
本实验 中的油樟叶脱油后 的乙醇提取物对金黄
色葡萄球菌 、大肠杆菌和沙 门氏菌均具有一定抑制
5期 张超等：脱油油樟叶提取物的体外抑菌活性研究 693
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40
时间Time(h)
大肠杆菌溶剂对照组
ControI s of
escherichi a coI i
solvent
0 5MIC浓度 0 5Mlc
cOncentrat i on
1MIc浓度 1 MIc
concentration
2MIc浓度 Ic
concentrat i on
图 1 不同浓度的正丁醇萃取相对大肠杆菌的抑菌曲线
Fig．1 Time—kill cure of N—butanol extracts from C．
1ongepaniculatum leaves against Stnph，Eococcus auKeus
金葡球菌溶剂对照组
ControI s of aureus
StaphyIococcus
solvent
0 5MIc浓度 0 5MIc
cOncentrat i on
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40
时间Ti rile(h)
图 2 不同浓度的石油醚萃取相对
金黄色葡萄球菌的抑菌曲线
Fig．2 Time—kill cure of petroleum ether extracts from
C．1ongepaniculatum leaves against S．aureus
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40
时间 Tifile(h)
沙门氏菌溶剂对照组
Oontrol s of
saln~)rlella so Jvent
0 5MIc浓度 0 5MIC
cOncentrat j on
1MIc浓度 1 MIC
concentration
2MIc浓度 MIc
c0ncentrat}Ol3
图 3 不同浓度的乙酸乙酯萃取相对
沙门氏菌的抑菌曲线
Fig．3 The time—kil cure of ethyl acetate extracts
from C．1ongepaniculatum leaves against Salmonella
作用，其 MIC和 MBC相当(表 1)，说明对三种菌的
抗菌活性相当。从最低抑菌浓度来看，油樟叶残渣
乙醇浸膏对大肠杆菌和沙门氏菌(MIC均为 31．25
mg／mL)的抑制活性高于芦笋皮乙醇提取液对大肠
杆菌和沙门氏菌 (MIC均为 50 mg／mL)的作用，对
金黄色 葡萄球 菌 的抑 制活性 (MIC为 31．25 rag／
mL)略低于芦笋皮乙醇提取液(MIC为 10 mg／mL)
(冯翠萍等，2010)，作为废物利用资源，油樟废叶的
抗菌活性具有进一步研究的价值。
油樟叶脱油后的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌
和大肠杆菌的抑菌活性与戴群等(2008)报道的油樟
同属植物香樟 (C．camphora)叶脱脂后 的乙醇提取
物对金黄色葡球菌和大肠杆菌均具有抑制作用相
似。吴传茂等(2000)报道香樟叶未脱去挥发油的乙
醇提取物对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌和枯草芽孢
杆菌等多种微生物具有抑制作用，其抑制作用可能
与香樟油的抑菌作用相关(李爱民等，2006)。研究
表明油 樟 油 同样 具有 较 强 的抑 菌作 用 (魏 琴 等，
2006，2009)。孙崇鲁等(2006)研究表明，香樟叶脱
脂后的乙醇提取物主要成分是黄酮类化合物，而据
文献报道，黄酮类化合物有强烈抑菌作用(曲中堂
等，2010；韦英亮等，2010)，戴群等(2008)，得到的具
有抑菌作用的乙醇提取物被检测出黄酮成分 。尽管
油樟与香樟为同属植物 ，但其抑菌成分是否为黄酮
类化合物还有待于进一步研究 。
乙醇浸膏的不同极性溶剂相对三种菌生长具有
不同抑制作用。乙酸乙酯萃取相对金黄色葡萄球菌
和沙门氏菌的MIC和 MBC最低，正丁醇萃取相对
大肠杆菌 MIC和 MBC最 低 ，且 高 于乙醇 浸膏 的
MIC和 MBC(表 1)，说明油樟 叶抗菌活性成分主要
集中在油樟叶乙醇浸膏的乙酸乙酯萃取相和正丁醇
萃取相。由于乙酸乙酯和正丁醇都是极性较低的溶
剂，此结果符合甘聃等(2003)的研究结果：樟树叶片
(同属的香樟)提取物得出的脂溶性提取物 的抑菌活
性高于水溶性提取物的抑菌活性的规 律，这说明可
能在活性成分上有相似性 ，为活性成分的追踪奠定
了基 础 。
抑菌曲线 (图 1～3)结果表明，金黄色葡萄球菌
在 MIC值提取物浓度下时直接进入衰亡期，大肠杆
菌和沙门氏菌在 2×MIC值提取物浓度下衰亡期，
36 h内杀死细菌，这充分证 明了提取物杀菌 的高效
性 。抑菌曲线还表明，抑菌活性均 随着浓度的增大
而加强 ，即抑菌活性与抗菌药物的浓度呈一定的正
相关，其作用类型为浓度依赖型 。这 为进一步试验
4 2 0 8 6 4 2 0
Lo clE c ∞一 叮一> o ∞ 一四>EL| 一 ∞咖oJ
一]叫／n 暑o 1) 簌靛餐 粗蜒
4 2 0 8 6 4 2 0
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4 2 0 8 6 4 2 0
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694 广 西 植 物 31卷
时用量设计提供试验数据 。
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