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桂北地区不同品种、不同产地鲜罗汉果中总甙、甙V含量测定



全 文 :广 西 植 物 Guihaia 27(2):281— 284 2007年 3月
桂北地区不同品种、不同产地鲜罗汉
果中总甙、甙 V含量测定
刘金磊,李典鹏 ,黄永林
( 薯 毳广西植物研究所,广西桂林54106)
摘 要:分别采用紫外分光光度比色法(uv.vis)和高效液相色谱法(HPLC)~r]定了不同产地,不同品种罗汉
果中的总甙和甙 V的含量。测定结果表明:同一品种不同产地罗汉果中总甙含量、甙 V成分变化不大,不同
品种的总甙、甜味成分 V均有明显差别。
关键词:罗汉果;紫外分光光度法;HPLC;总甙;罗汉果甙V
中图分类号 :Q946.83 文献标识码:A 文章编号:1000—3142(2007)02—0281—04
Determination of mogrol
V content in the fresh
glycocides and mogroside
一 ·· n ● ●·0 fruitofS0m e trattta
gros ven orii varieties from di fferent
places in North Guangxi
LIU Jin-Lei,LI Dian—Peng ,HUANG Yong—Lin
(Guangxi Institute of Bonny,Guangxi Zhuangzu Autonomous Region and the Chinese Academy of Sciences,Guilin 541006,China)
Abstract:Content of mogrol glyeoeides and mogroside V in some Siraitia grosvenorii varieties growing in dif—
ferent places were determined by using UV—vis and HPLC.The results showed that no significant differences
existed in mogrol glyeocides of the same S.grosvenorii variety growing in different places,but did in mogrol
glyeoeides and sweet component of different varieties.
Key words:Siraitia grosvenorii;UV—vis;HPLC;mogrol glyeoeides;mogroside V
罗汉果 (Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeff—
rey)为葫芦科罗汉果属的多年生宿根茎性藤本植
物,为广西桂北地区传统特产。罗汉果性凉,味甘,
无毒,有润肺止咳,凉血润肠的功效,特别是用作祛
痰剂,在治疗慢性气管炎、百 日咳、胃肠疾病方面疗
效显著(江苏新医学院,1977),成熟罗汉果富含罗汉
果甜甙,它是一种高甜度、低热量甜味剂,因此罗汉
果广泛应用于医药、饮料、调味剂(高山林等,2000)。
罗汉果果实中主要化学成分是罗汉果皂甙(mogro—
side),该类物质除少数为无甜味或苦味(罗汉果二
糖甙和三糖甙)外,大多为强甜味物质和微甜味物
质,其中罗汉果甙V为果实中含量和甜度(为蔗糖甜
度的 256~344倍)均较高的成分,是主要的甜味成
分(李典鹏等,2004)。
随着罗汉果应用领域的拓宽,市场需求量越来
越大,罗汉果的种植面积及地域越来越广,种植品种
收稿日期 :2005—07—26 修回 日期:2005—09—22
基金项目:中国科学院“西部之光”人才培养计划(科发人教字[20021101号);广西科学基金(桂科基0236052)[Supported by the Per-
sonnel Training Plan of West Light Foundation of the Chinese Academy of Sciences([20023101);Natural Science Foundation of Guangxi
(0236052)]
作者简介:刘金磊(1980一),男 ,内蒙古赤峰市人 ,研究实习员,从事植物资源的开发利用研究 。
’通讯作者(Author for correspondence,E-mail;Idp@gxlb.cn)
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282 广 西 植 物 27卷
繁多,果实品质差别大,极大地影响了罗汉果深加工
产品的质量。高山林等(2000)采用紫外分光光度法
测定了不同重量 (大、中、小)的罗汉果总甙含量,发
现含量有一定差别,但至今未见有关对不同品种和
产地的罗汉果鲜果进行过有效成分分析的系统资料
报道。本文采用香草醛一高氯酸试剂分光光度比色
法、高效液相色谱法对同一品种不同产地、不同品种
同一产地罗汉果进行总甙、甙 V进行了对照含量测
定,其结果对罗汉果的推广种植和种植品种的选择,
以及罗汉果加工企业的原料采购有现实指导意义。
仪器、试剂与材料
1.1仪器
Agilent—l100分析型高效液相色谱仪,包括二
极管阵列多波长 DAD检测器、四元梯度泵、在线真
空脱气机、7725i手动进样器、HP化学工作站(美国
Agilent公司);R—ll4型旋转蒸发仪(瑞士 Bachi公
司制造)。731型分光光度计(上海第三分析仪器厂
生产)。
1.2试剂
色谱乙腈(美国 TEDIA公司);甲醇、冰醋酸、
香草醛、高氯酸试剂均为国产分析纯,重蒸蒸馏水为
自制。
1.3材料
罗汉果样品采集 日期为 2004年 8月至 l1月,
地点为广西桂北地区;均为生长在 80 d后的成熟
果,所采样品均由中国科学院广西植物研究所专家
进行品种鉴定。鲜果采后直接冷冻干燥,粉碎,过
40目筛,备用。罗汉果总甙、甙 V对照品(本实验室
自制,TLC的 Rf值、IR、UV、NMR值均与文献值
一 致,液相色谱峰为单峰,纯度达到 98.8 );HPD-
200大孑L树脂(山东鲁抗树脂厂生产)。
2 检测方法与色谱条件
2.1总甙检测方法
香草醛一高氯酸试剂分光光度比色法。
2.2罗汉果甙 V检测方法
HPLC法,色谱柱:ZORBAX SB_Cl8柱 (4.6
mm×l50 mm,5 m);柱温:25℃;流动相:乙腈一
水(体积 比 25:75);流速 :l mL/min;检 测波长 :
203 nm;进样量:20 L。定量方法:外标法。在确
定了上述条件后,罗汉果甙 V色谱峰与其它组分达
到了良好分离。
图 1 罗汉果甙 V对照品(A)和样品(B)的 HPLC图谱
Fig.1 HPLC chromatogram of mogroside V(A)
and sample(B)of S.grosvenorii
3 结果与分析
3.1对照品的制备
3.1.1总甙对照品溶液的制备 精密称取罗汉果总
甙对照品10 mg,置于25 mL容量瓶中,加甲醇溶液
超声溶解,稀释至刻度摇匀,作对照品溶液备用。
3.1.2甙V对照品溶液的制备 精密称取罗汉果甙
V对照品10 mg,置于 l0 mL容量瓶中,用流动相乙
腈一水(体积比25:75)溶液超声溶解,稀释至刻度
摇匀,作对照品溶液备用。
3.2供试 品溶液的制备
3.2.1总甙供试品溶液的制备(李锋等,2003) 选
取成熟罗汉果 10个,破碎、冷冻干燥 24 h,碾碎过
40目筛,精密称取 l g,20 mL甲醇溶解回流提取 3
次(2、l、l h),过滤,合并滤液回收至于,多次加入总
量约 20 mL的水超声溶解,溶液过 HPD-200大孑L
吸附树脂,然后 用蒸馏水洗至流出液无色,并以
80 乙醇溶液 60 mL洗脱,收集洗脱液,旋转蒸发
至于,用甲醇定容至 50 mL备用。
0 U 0 0 0 0 0 0 O 0 们 ∞ ∞ ∞ 们 加
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2期 刘金磊等:桂北地区不同品种、不同产地鲜罗汉果中总甙、甙V含量测定 283
3.2.2甙V供试品溶液的制备(李锋等,2003) 选
取成熟罗汉果 1O个,破碎、冷冻干燥 24 h,碾碎过
4O目筛,精密称取 1 g,20 mL甲醇溶解回流提取 3
次(2、1、1 h),过滤,合并滤液回收至干,多次加入总
量约 20 mL的水超声溶解,溶液过 HPD-200大孔
吸附树脂,然后用蒸馏水洗至流出液元色,并 以
8O 乙醇溶液60 mL洗脱,收集洗脱液,旋转蒸发至
干,以流动相乙腈 :水(体积比25:75)溶液少量多次
的超声溶解,并定容至 25 mL容量瓶中,用 0.45,um
微孔滤膜过滤,滤液作为甙 V供试品备用。
3.3总甙、甙 V含量的测定
3.3.1标准曲线的制备 (1)总甙标准曲线的制备:
精密吸取罗汉果总甙对照品 1O、2O、3O、4O、5O L置
于磨口具塞试管中,挥干溶剂,加入新配制的 5 9,6香
草醛一冰醋酸溶液 0.2 mL,高氯酸溶液 0.8 mL,60
℃水浴保温 15 rain,取出后用冰水迅速冷却,加入 5
mL冰醋酸摇匀,放置 10 rain,于 590 nm波长处测
定吸光度值A。得标准曲线回归方程为:A一0.002 1
C+0.010 6(r=0.999 5)。结果表明,罗汉果 总甙
含量的测定在 3.5~0.6×1O。 g范围内呈线性关
系。(2)甙 V标准曲线的制备:精密吸取罗汉果甙
V对照品 2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0 L注入液
相色谱仪中,按上述色谱条件测定,记录峰面积,以
进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,
得回归方程:Y一206.02X+26.626(r一0.999 2)。
结果表明,罗汉果甙 V含量的测定在 2.5~1.2
表 1 同一品种不同产地罗汉果总甙、甙 V含量检测结果
Table 1 The total mogroside and mogroside V content of the same Siraitia grosvenorii variety from different places
品种
Variety
产地
Locality
总甙含量( 甜甙 宝莩‘ ) )R ate of t-.ota’
ro s·d emogrostde mog l ~V / 1意 、,⋯⋯⋯:J
青皮果(72-蔓)
Qingpi fruit(Press the vine)
青皮果(组培)
Qingpi fruit(Tissue culture)
红毛果(扦插)
Hongmao fruit(Cuttage)
永福龙江 Longjiang,Yongfu
临桂五通 Wutong,IAngui
永福县郊 Suburb,Yongfu
临桂茶洞 Chadong,Lingui
临桂宛田 Wantian,Lingui
临桂两江 Liangiiang,Lingui
永福龙江 Longjiang,Yongfu
桂林郊 区Suburb,Guilin
桂林资源 Ziyuan,Guilin
桂林兴安 Xingan,Guilin
桂林荔浦 Lipu,Guilin
桂林龙胜 Longshang,Guilin
桂林临桂 Lingui,Guilin
柳州融安 Rongan,I iuzhou
桂林龙胜 Longshen,Guilin
临桂宛田 Wantian,Lingui
永福龙江 I.ongjiang,Yongfu
注 不同字母表示差异显著程度,小写字母表示PNote:The smal and capital letters express P< O.05 and P< o.Ol respectively.The same as folows.
×10。 g范围内呈线性关系。
3.3.2样品中总甙、甙V含量的测定 (1)样品中总
甙的测定:精密量取 3份罗汉果供试品溶液 l mL,
至磨口试管中,挥干溶剂,加入新配制的5 9/6香草醛
一 冰醋酸溶液 0.2 mL,高氯酸溶液 0.8 mL,60℃
水浴保温 15 rain,取出后用冰水迅速冷却,加入 5
mL冰醋酸摇匀,放置 10 rain,于 590 nm波长处测
定吸光度值 A,同时设空白对照,根据标准曲线计算
样品总甙含量。(2)样品甙 V的测定:精密吸取罗
汉果甙 V供试样品溶液 2O L,注入液相色谱仪中
按上述色谱条件进行检测,将所测定的峰面积代人
回归方程,计算所含甙 V的含量。
3.4罗汉果总甙与甙V含量测定结果
我们对同一品种(青皮果和红毛果)不同产地和
胁 硒三詈川姗 耋藿 m m~胁~ 22 2文2 33色23 3 2 色
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284 广 西 植 物 27卷
同一产地(永福龙江和临桂宛田)不同品种进行总甙
和甙 V的含量测定,总甙所测数据进行 SPSS方差
数理分析,结果见表 1和表2。
4 讨论
(1)采用香草醛一高氯酸试剂紫外分光光度比
色法与 HPLC检测同一品种不同产地、同一产地不
同品种罗汉果中总甙及甙 V的含量进行了检测并
作了比较。结果表明:同一品种不同产地总甙、甙 V
含量有一定差异,但不显著,但同一产地不同品种罗
汉果中总甙及甙 V的含量差异较明显,这说明罗汉
果果实的品质受地域影响不大,适合大范围的推广
种植,但需选择优良品种。
表 2 不同品种同一产地罗汉果总甙、甙 V含量检测结果
Table 2 The total mogroside and mogroside V content of Siraitia
grosvenorii varieties from the same places
(2)从品种来看,长滩果和冬瓜果的果实品质较
好,总甙和甙 V含量均较高,现今市面上品种大多
为青皮果,产量高,易于繁殖,总甙和甙 V含量较
高,适合于大面积推广。
(3)从结果来看,成熟的青皮果中其甙 V相对
含量均占总甙的5O 以上,为罗汉果中主要甜味成
分,但其他品种(如油桐果和红毛果甙 V)相对含量
偏低。现今通用的罗汉果质量控制方法是采用比色
法测定罗汉果总甙含量,但总甙标准不统一,所以测
定结果也相差较大。且总甙只反映一个总皂甙量,
并不实际反映单体甙类成分的含量,罗汉果果实中
除甜味成分外尚有少量的无味或苦味成分(李典鹏
等,2004),因此有必要对罗汉果的质量控制标准,测
定方法作进一步规范化。
参考文献:
江苏新医学院.1977.中药大辞典EM].北京:上海科学技术出
版社
李锋,李典鹏,蒋水元,等.2003.罗汉果栽培与开发利用I-M].
北京 ;中国林业 出版社
Gao SL(高山林 ),Wang H(汪红).2000.The technique on ex-
traction and content determination of saponin from Momordica
grosvenori(罗汉果皂甙的含量测定)I-J].Nat Product Res
Development(天然产物研究与开发),13(2).36—39
Helena C Makapugay,N P Dhammika Nanayakkara,et a1.1985.
High-performance Liguid Chromatographic analysis of the major
sweet drinciple of Lo Han Kuo fruitsl,J].J Agric Food Chem,
33:348—350
Kasai R,Nie Ruiliu,Nashi K,et al,1989,Sweet cucurbitane-gly—
coSides from fruits of Siraitia siamensis(Ch~zi Luo-har~guo)
口].Chem Pharm Bull 53(12):3 347—3 349
Li DP(李典 鹏),Chen YY(陈 月园 ),Pan ZH(潘争 红),et a1.
2004.Study on variation of mogrol glycocides from fruits of Si
raitia grosvenorii in diferent grow ages(不同 日龄罗汉果甙类
变化研究)I-J].Guihaia(广西植物),24(6)546—549
Matsumoto K,Kassai R,et a1. 1 990. Minor CuCurbitane-Gly—
cosids from fruits of Siraitia grosvenorii[J].Chem Pharm
Bull,38(7):2 O3O一2 032
Takemoto T。Arihara S,Nakajima T,et a1.1983.Studies on the
constituents of Fructus Momordicae(I)I-J].Yakugaku Zasshi,
103:1 154
维普资讯 http://www.cqvip.com