免费文献传递   相关文献

柑桔无病原体苗培育研究进展



全 文 :广 西 植 物 Guihaia 21 (1):5 3— 58 2001年 2月
柑桔无病原体苗培育研究进展
董高峰.李耿光,张兰英,黄 涛
中国科学院华南植物研究所.广东广州 5】0550)
摘 要:简述了柑桔无病原体苗培育的 2种主要方法:热处理法和组织培养法 其中重点介绍了利用珠心培
养、胚珠培养以及茎嫁接脱陈柑桔病原体的研究现状和最新进展,并就 目前存在的问题及今后的发展方向
进行了探讨 。
关键词:热处理;茎尖嫁接:组织培养
中国分类号:Q943.1 文献标识码 :A 文章编号:1000—3142(2001)叭 0053—00
Advances in the research of cul tivating
pathogen-free seedl ings of citrus
DONG Gao—feng,L1 Geng—guang,ZHANG Lan—ying,HUANG Tao
(South China 1,utitute ofBotany.Academia 5in&a,Guangzhou 510650,China)
Abstract;Two major methods on cultivating pathogen—free seedlings of citrus were briefly recounted:heat
treatment and tissue culture.W e particularly introduced the recent researching—situation and advances to elimi-
nate citrus pathogens by nucellus culture.ovule culture and shoot—tip grafting,an d also discussed the present
questions and future direction of development.
Key words:Heat treatment;shoot tip grafting;tissue culture
柑桔的病原体病害在全世界 40多个柑桔生
产国普遍都有发生,它们的病原体通常存在于长
期进行无性繁殖的老系品种中,能使植株长势减
弱,生活力降低,生长期变短 ,产量降低,供应期
缩短,品质变劣,严重地威胁柑桔类的生产。
柑桔的病原体病害主要可分为病毒病、类病
毒病和类菌原体病 3种,其中最重要的包括:青果
病 (Greening)或黄龙 病 (Yelow—shoot)、衰退病
(Tristeza)、裂皮病(Exocortis)、鳞皮病(Psorosis)、
碎叶病(TaferleaD等。: 蚜虫传播的衰退病是一
种广泛传播的病毒病,在巴西圣保罗州,衰退病
就曾使 600万株甜橙死亡(占总数的 75 );美国
1939年在加利福尼亚州,l951年在佛罗里达州;
以色列在 1970年,也先后造成毁灭性灾难 阿
根廷也曾因病毒危害毁灭了l 000万株柑桔 。
在我国南方地区如广东、广西、福建等地柑
桔黄龙病为害尤为严重。经过 4O多年的研究,已
证明是由类菌原体病原和术虱的传延媒介引起
的。这种毁灭性的病害,尚在向云南、江西、浙江、
四JI等地扩散传延,造成很大损失。l975~l976
收稿 日期:1999 07—19
作者简介:董高峰(1 971一).男.在读博士研究生,植物细胞工程专业
基金项目:中国科学院地方台作基盎项 目(9802).广东省科技创新百项工程(99) 中美 日国际合作项日(9807)
维普资讯 http://www.cqvip.com
广 西 植 物 21卷
年,仅广东汕头地区因黄龙病而死掉的柑桔树就
达 600万株以上“ 。柑桔裂皮病,自1965年由摩
洛哥传人四』I}重庆以来,据 Roistacher。 的调查.
四JI}的柠檬已 100%的感染.并在广西、湖南及湖
北姊归等地传延到甜橙及密柑上
由于柑桔病毒、类病毒以及类菌原体病害主
要通过无性繁殖传染,因此,建立无病原体母本
园、采穗圃,进行无病原体的工厂化育苗,供应无
毒接穗和苗木是消灭柑桔病原体病的重要途径
美国、埃及、巴西、菲律宾、西班牙、日本和其它一
些地方都在开展这方面的工作 .并已经取得一定
的成效“ :。西班牙还决定从 1975年起开始全面
供应无毒苗木,10 a内使全国 l8万 hm 柑桔无病
原体化。
目前,无病苗的培育成为发展柑桔生产的重
要一环。它主要分为热处理法和组织培养法 2大
类,后者又可分为:(1)胚珠培养;(2)珠心培养;
(3)茎尖微型嫁接法。
1 热处理脱毒
热处理脱毒法由于其简便易行,效果 比较显
著,在国内外应用较久。最早热处理法是应用于
治疗桃苗的 ‘x 病毒。最初主要是采用温水 50。c
浸泡接穗,但对接芽的伤害 比较严重。’。林孔湘
等“ 在华南农学院首创用蒸汽热处理柑桔黄龙
病接穗,取得了良好效果 。柑桔 的接穗热处理要
求在暖房中先预处理(白天最高温度 28~40。C,
夜晚 24~27。C)3~4个月,效果较好。接穗从果
园取回后,如果立即用湿热空气处理时,它们不
能成活。但当接穗首先通过预处理后再进行热处
理(50。C,4 h),接穗都能很好地存 活。骆学海
等“”则进一步对两 2种典型的黄龙病症状“均匀
黄化病型 和“斑驳型”的柑桔苗进行了热处理,
他们发现 49。c湿热空气处理 50~6o min或用
50℃ 处理 5O min就可以消灭黄化病病原一类立
克 氏体。但高 日霞和郑和睦“”的实验却表明:尽
管柑桔苗木经 49。c温热空气处理 50 min后疗效
颇佳.但以后苗木的生长势却较弱。
日本的家城洋之“”详细研究了热处理对柑
桔衰退病毒、矮缩病毒和碎叶病毒的去毒效应
他们发现去除夏橙、柠檬上的CTV病毒(衰退病
毒).最短的热处理 8 d即可得到无毒苗.但要保
证去毒,则需4~5周。另一方面,对于较大的母树
则需要 30周以上的热处理才可以保证全株无毒。
矮缩病毒(SDV):盆栽温州蜜桔白天 40℃ 下 l2
h,夜间 30℃ 下 12 h进行 6~7周热处理,即可获
得无 SDV的苗术;碎叶病毒(cTLV):2~4年生
盆栽树苗以白天 41℃ 下 l2 h,夜间 3l。c下 12 h
的交替温度处理,要经 92 d以上才可获得无毒苗
术。因此,不同品种.不同的病毒,热处理的温度
和时间各异。
柑桔植株防毒热处理的方法:林孔湘等“ 将
柑桔用塑料罩放在温室中.处理 3~4个月,白天
温度 28~30。C,夜晚 27~28。c,放置少量水在培
养箱容器底部,即可发生湿热气体。美国加州大
学将要处理的品种,嫁接在特洛亚枳橙砧上,放
人调温培养箱中,温度保持 白天 40。c(6 h),夜晚
30。C 8 h,芽接后的植株生长 4~5周后弯倒在培
养箱中,放置 7~l 2周后,取出促进芽的萌发生
长“ 。苹果、葡萄植株的防毒,也可用同样的热处
理装置,如能应用自动控制的人工气候箱进行热
处理就更为方便。
热处理法治疗柑桔病原体虽然有较显著的
效果,但经处理后 的苗木和接穗 的存活率较低,
且对护理要求较严格,护理不好易造成苗木大量
死亡 。因此热处理法 目前还不宜广泛用于处理
生产上种植 的苗木和接穗,仅可用于消毒少量苗
木和接穗,以供各地建立无病原体母本园。
此外,热处理虽然对去除大多数柑桔病原体
有效,但是对于那些基本的病毒如裂皮病毒、顽
固病毒的脱除却非常困难。 。
2 柑桔组织培养法脱毒
柑桔组织培养法一般通过珠心培养、胚珠培
养以及茎尖微型嫁接来获得无病原体种苗。前两
种技术主要依据大多数柑桔病原体不能通过种
子传染,由无性胚胎发生所产生的珠心胚植株具
有同母本相同的特性;茎尖嫁接技术的有效性主
要是依据 White。”和 Morel等“ 的研究:病原体
在植物体内分布的不均一性,顶端分生组织几乎
维普资讯 http://www.cqvip.com
1期 董高峰等 :柑桔无病原体苗培育研究进展 55
漫有或检查不出病原体;嫁接后存活后的植株与
母本是完全一致的。
2.1离体珠心培养
人们很早就 已意识到可以对多胚性柑桔品
种进行珠心培养以获得无病毒珠心胚植株“ 。最
早 Ranga—Swamy 通过培养多胚性品种的珠心
获得珠心胚,但是他在培养的时候就已经形成了
珠心前胚。西班牙的Gonzalez Sicilia等 播种主要
的带病良种甜橙,从多胚性种子得到避毒的新生
系。Rangan等 ”则第一个成功地诱导出单胚品种
珠心胚的形成 。Esan等 还对单胚品种的不定胚
胎发生进行了大量的研究。
目前,珠心胚培养已在诱导许多单胚柑桔品
种产生珠心胚上获得成功。Navarro等。”先后在
无核良种 的 Navelate、Washington Navel、Precoz、
Navelima Foyos Washington、Newhal和无核温州
蜜桔上用组织培养法培养珠心胚得到了无病毒
植株。后来 Navarro等 “ 又从单胚性的克里曼
丁桔上,用组织培养方法,培养出无病毒的 Fina、
Nules、Oroval等良种珠心苗。这些无病毒珠心苗
嫁接在抗病毒的特洛亚梗橙砧木上,还可以进行
结果品质的鉴定 。
从不同果龄的果实中获取的珠心在很大程
度上可以影响珠心胚的形成 。Bitters等 曾先后
成功地诱导出授粉后 10~18周的 Temple tangor
品种珠心胚的形成,但是其早期和后期的果实都
没能成功。Esan。 也诱导出授粉后 11~1 2周的
Etrog citron产生珠心胚。Juavel等。 则使用授粉
后 1 2~l4周的Clementine果实诱导产生珠心胚。
实践证明;适合于产生珠心胚 的果实,应是从心
形期到早期子叶形成的阶段。
利用珠心胚培养新生系避毒的方法简便 易
行,其缺点是约有 26 的变异,同时珠心胚实生
苗会具有各种童期性状,如多刺和结果晚,多数
品种往往需要 10 a以上才能结果 :,这极大地影
响了它在实践中的应用。
2.2离体胚珠培养
从无籽的多胚柑桔品种中获取珠心胚植株
是 比较困难的,一些受控制的杂交品种则比较容
易诱导 出种子,但 是对 另外一些 品种 如脐 橙
(Nave1),由于其大孢子母细胞极易降解而导致很
难获得任何种子。这种问题可以在它们败育之前
通过离体胚珠培养加以解决。Biters等。 在授粉
时分离胚珠中的珠心加以培养获得了 Robertson
navel、sweet orange的 珠 心 胚植 株。Button和
Bornman。 则从发育的果实胚中分离出完整的胚
珠和珠心进行培养而获得了Washington navel的
珠心胚植株。
胚珠培养主要被用来诱导那些种子易降解
的多胚 柑 桔品 种产 生 珠 心 胚,如 Washington
navel、
.Robertson navel以及 Precoz、Ponkan等品
种。以前从单胚品种中试图培养不育或未授粉的
胚珠都失败了。胚珠可以从发育的果实或花芽分
化期的子房中分离出来,分离时的果龄不会明显
影响其外植体诱导产生胚状体的成功率。胚珠通
常来源于外源授粉后花发育所形成的果实,从实
践的观点来看,使用去雄后花发育成的果实中的
胚珠最适宜。 。
Navarro等。 还发现柑桔胚珠诱导胚状体产
生的机率是相当高的。胚珠能够产生一种类似愈
伤的组织,迅速分化形成胚状体,与前胚很相似。
Button和 Bornman 对此进行了详细的研究,并
将之命名为假胚芽。胚珠的发育非常缓慢,它们
必须移人不含麦芽提取物并附加 1 mg/L GA3或
27 mg/L腺嚎呤的培养基中才可诱导生根“ 。
和珠心胚一样,胚珠培养获得的植株同样具
有多刺,童期长,易产生变异的特点。”。已有报道
表明:胚珠培养对于去除Exocortis、Psorosis、Con—
cave gum和Vein enation病毒十分有效 ,但对
于去除其它柑桔病毒的效果还不太清楚。
2-3离体茎尖嫁接
通过茎尖培养获得无病原体植株最初主要
是运用在草本植物上。 ,但以后却被广泛应用到
其它植物上,如葡萄。”、苹果 、梨。 “ 、大豆。”、
龙眼等。 。但是到目前为止,试图在柑桔类上通
过茎尖培养来获得无病原体苗都没有成功。为
此.在茎尖培养的基础上发明了茎尖微型嫁接技
术.并已初步获得了一些无病原体品种。
Murashige等。”最早将几种柑桔的茎尖嫁接
在砧木实生苗上获得 了成功。经检测,这些存活
维普资讯 http://www.cqvip.com
广 西 植 物 21卷
的植株不含有exocords病毒并且不具备童期性
状 。1 975年.Navarro。 详细研究了柑桔的茎尖嫁
接技术,他先后将Lemon、lime和Citron等多种柑
桔品种的茎尖嫁接到“Troyer”枳橙实生苗上.并
且获得得了 30 ~5O 的嫁接成功率,嫁接苗从
室内移植到大田的存活率也超过了 95 。通过田
间指示植物鉴定表明:Lemon、lime和Citron的嫁
接苗都成功地去除了 Tristeza、Psorosis病毒以及
Stubborn spirolasma、Exocortls类病毒.并且所有
这些无病毒苗都没有产生童期性状。在此基础上
他还总结出一套规范性的茎尖嫁接程序,已被以
后的许多实验室所采用。它们具体包括z(1)砧木
的准备 ;(2)接穗的准备;(3)嫁接;(4)嫁接苗的
管理;(5)移植八大田。其中他们所设计的倒“T”
字形嫁接法已成为应用虽为广泛的嫁接方式。
随后,离体 茎尖嫁接技术迅 速发展起来。
1 976年,Navarro 开始在西班牙应用这种方法来
生产无病毒的柑桔母本树,大量推广无病毒接
穗。1 980年以来 ,西班牙、美国、以色列、巴西、El
本等国也都在研究采用茎尖微型嫁接法来培育
无病原体柑桔母本树 ,以防治柑桔速衰病、鳞皮
病、裂皮病、青果病等病毒、类病毒和类菌原体
病“ 。Navarro“”应用茎尖微型嫁接,采取甜橙、克
里曼 丁桔茎尖带有 3个叶原基、约 0.14~0.18
mm长的生长点,嫁接到灭菌组培的特洛亚枳橙
上,获得了 100 的无病毒苗,去掉了包括裂皮
病、速衰病、叶脉突出病、缩叶病等病毒病,但鳞
皮病病毒难以根除。茎尖若从田间或温室 18~25
℃ 气温下采取,经过茎尖嫁接获得的苗木只有
10 以下的植株无毒,而从 27~32。C的暖室中
采集的茎尖经微型嫁接所获得的苗木则有 72
是无毒的植株。说明茎尖嫁接法脱除病原体的效
果 还 与一定 的生态 环境有关。Mukhopadnysy
等。 还首次采用双嫁接法来鉴定 Tristeza、Green
[ng等病毒,并且成功地获得了无病毒的 Darjeel
[ng orange嫁接苗,将 良种繁殖的时间从 2 a缩短
到 l a左右。目前西班牙、美国已经将现有的所有
柑桔 良种都用茎尖嫁接法生产出无病原体的母
本树(如脐橙、夏橙、温州蜜柑、克里曼丁柑、柠檬
等),然后采取接穗进行繁殖推广。
通过茎尖嫁接技术来获取无病原体苗的工
作在我国开展的也较早。早在 1 978年,李耿光
等 就获得了暗柳、雪柑和柚子等 3个柑桔品种
的离体茎尖培养植株.并首次采用“倒 T字形”方
式将甜橙(Citrus sinensis)带 3个叶原基的茎尖嫁
接到枳壳实生苗上,获得了嫁接绿苗 18.j 的成
活率。但他们没有进一步做病原体鉴定的工作。
从 1 980年开始,华中农大“ 进行了大量的柑桔茎
尖微型嫁接研究,目前已经取得一定的成功,先
后得到了将脐橙、夏橙等优势株系嫁接到抗病毒
的特洛亚枳橙、卡里佐桔橙、枳柚等砧木的 良种
营养系无毒母本树,并繁殖推广到四JI『、广西、湖
北、湖南、江西等省。但他们的工作以去除速衰
病、裂皮病病毒为主,对其它一些病毒、类病毒和
类菌原体未做更详细的鉴定。同时,中国农科院
柑桔所也在茎尖嫁接脱毒方面做了大量的工作。
赵学源等 利用茎尖嫁 接获得 了无裂皮病 毒
(Exocortis)的暗橙、伏令夏橙、尤力克柠檬和费米
耐劳柠檬的植株。蒋元晖等“ 则获得了无裂皮病
的脐血橙品种。他们还进一步将传统的倒T字形
嫁接切 口改为三角形切口,提高了嫁接成活率,
并通过采用“二次嫁接法”将从茎尖嫁接到鉴定
脱毒效果的时间从 1 a缩短至 0.5 a。蒋元晖“ 还
具体研究了柑桔茎尖嫁接过程所应着重注意的
问题,并提出了相应的改进措施,如切割技术、茎
尖切口方形 以及茎尖大小对脱毒率和嫁接成功
率的影响。张秋胜等“ 则进一步对传统的茎尖嫁
接技术作了改进。他将Navarro原有的 5个步骤
缩短为 3个步骤:(1)砧木不剥皮播于培养土;
(2)茎尖嫁接;(3)移栽.从而完全省去了试管培
养过程。
除了柑桔类外,茎尖嫁接技术还广泛运用于
其它果树的脱毒上。如桑树“ 、梨“”等品种,已成
为果树脱除病原体病虽主要的方式。
3 小结与展望
尽管柑桔珠心胚培养能够有效地去除绝大
多数病毒和类菌原体,但是珠心胚植株常常带有
许多童期性状:过 量旺长,多刺 ,结果期极长等
等.往往要栽培许多年后才具备商业价值。此外,
维普资讯 http://www.cqvip.com
1期 董高峰等:柑桔无病原体苗培育研究进展
珠心胚 植株尤其是离体培养的珠心胚植株常常
会发生许多变异。
热处理柑桔种苗不会导致明显的变异,也不
会带有各种童期化性状。但是这种技术不能有效
地 去除裂皮病 (Exocorfis)和木质陷 L病(Xylo-
porosis)等世界范围内大量传播的病毒。而且也很
容易损伤种苗。
茎尖嫁接结台适 当的热处理则很容易去除
绝大多数的病毒和类菌原体,包括那些不易被热
处理法所去除的病毒 ,而且茎尖嫁接不会产生变
异,也不具有童期性状。因此,茎尖嫁接法是 目前
最有效的获得无病原体柑桔植株的途径,现在它
已被广泛应用于各种柑桔品种的改良以获取可
以大量繁殖的无病种苗。相信随着生物技术的迅
速发展,茎尖嫁接技术将会与柑桔常规育种、体
细胞杂交以及抗病基因转化等技术结台起来,在
生产中发挥越来越大的作用。
参考文献:
C13章文才.果树的病毒病及无病毒良种繁育技术口].
园艺学文摘.1986,6(1):1~l2
[2]Brhnsky R H. Citrus tristeza virus 13 popu L~in
,south Florida[J].Proc.Fin.State Hort.Soc,1986,
99 66~ 69
(3]袭文选主编.圊艺植物组织培养[M].上海;上海科
技出版社 ,1986.195
[43柯 冲.柑桔黄病的病愿研究与防治建议[J].中国
柑桔,l979,34(3):29~32
[5]Rolstacher C N主编.柑桔良种工厂化育苗及病毒鉴
定[A].武汉:华中农学院园林系整理编印,1982.1
~ 20
[6]Navarro I .Development of a program for disease—free
citrus bodwond in Spain[A].Proc.Int.So:.Citri—
culture.】981,70~ 73
[73 Navarro L.Citrus shoot—tip grafting in vitro(STG)
and its apptication,a review[A].Prcc.Int.Soc Cit
ricuhure,1981.452-456
C83 Zhao Xue—yuan.Citrus ye L~w—shoot.A reyew-A].
Proc.Int.So:.Citricu[ture,1981.466- 469
C93 Navarro I .The citrus variety improvement program in
Spain[A].In Proc.7th conf IOCV.Riverside.
1976-198~ 2O2
[103林孔湘.骆学海 柑桔黄梢病 (黄龙病)治疗的初步
研究[J].植物保护学报-1965,4(2):169~175
[113骆学海等.柑柑黄龙病对热治疗的研究[J].植物保
护学报 ,1981,8(1);47~50
[129高目霞.郑和睦.甜桔黄龙病治疗试验研究[J].植
物保护学报 ,1981.8(1):55~58
[13]家城洋之.热处理对柑桔速衰病毒、矮缩病毒和碎
叶病毒的去毒效应[J].果树试验报告 B(兴津).
1 984.n :71~ 87
C143林孔湘,郑儒钰.柑桔黄龙病热灶理初步研究[J]
植物病毒学报 ,l964,7(1):61~65
[15]Roistacher C N. Etimination of citrus pathogon in
propagative budwood.1 Bnd wood setection-index-
ing and thermotherapy[A].Proc.Int Soc.Cirri
cu]ture.1 977,3-965~ 972
[16]Murashige T-Bitters P.Rangan T S.et .A tech—
nique of shoot apex grafting and its utilization t0-
wards recovering virus~free citrus clones[J]
H ortscience,l972,7:i18~ l19
[173 White P R.Multiptication of the viruses of tobacco
and aucul~ mosaics in growing excised tom ato root
tips[J].Phytopathotogy,1934,24:1003~101I
[18]Morel G.Producing virusrfrees Cymbidiuras[J].
A r.0rchid Soc.B“ 1960.19:495~ 497
(193 Roistacher C N,Calvan V and Navarro L.Concepts
and procedures for importation of citrus 6udwood
[A],Proc.Int.Soc.Cltricuture,1977,3:133~
136
[203 Ranga—Swamy N S.Cniture of nuceilar tissue of[it-
ru.5 in vitro[J3.Experiemia,14:111~112
[21]Rangan T S,MurasbigeT andBittersW P.In vitro
studies of Zygotle and nueeUur embryogenesis in eft
rus[A].Proc.Ist Int.Citrus Symp,1:225~229
C22]Esan E B.A detailed study of adventive embryogene—
s s in the Rutaceae[M].Ph.D.Thesis.Riverside:
University of Catifornia,l973.10- 22
23]Navarro L,Jiarez J,Balester J F, .Obtencion
de phntas nUCOlares libres de virlS de diversas、 卜
iedades de agric~det grupo Navel(C.Sinensls n .)
Osbeck)por cutivo de ovu[es in vitroEA3.An.INI—
A ·Ser.Prot.Vege,l979.12:95- l13
[。4]Na 。afro I ,Ba Llester J F,Juare2 J.et at.The citrus
variety improvement program in Spain(CVIPS)af-
ter four years[A].Riverside:Proc.8th Conf.
IOCV.1979,289~ 294
维普资讯 http://www.cqvip.com
广 西 植 物 2l卷
[25:Bitters W P.Murashige T , al Investigations on
established virus free p Lants through tissue culture
_A].Calif.Citrus Nurserymen’s Soc..1970,9:27
~ 30
[26]Juavez J,Navarro L and Guardida J I _Obtention de
plantes de divers cu[tlvars de demontiniers au moyen
de la culture de nucelle in vitro_J] Fruits,1976.
3l:751~ 762
[27]Navarro I ,Juarez J.Pina J A and Ba]lester J F The
citrus quarantine station in Spain[A].Riverside:
Pro:.9th Cont.IOCV(in press).
[28]Button J and Bornman C H D relopment of nucelar
plants from unpoilinated and unfertilized ovules of
Washington navel orange in vitro[J].J.S Aft.
Bo1.,l971,37:l27~ l34
[29]Koehba J。Spiegel Roy P and Safran H A d1-enti~‘e
plants from ovules and nuceIli in Citrus[J].Planta.
1972,lo6:237~ 245
(30]Kochba J,Buton J,Spiegel—Roy P,et a1.Stimula—
lion of rooting of citTus embryoids by gibberelie add
and adenine sulphate[J].Ann.Bot.,1974,38:795
~ 802
[31]Roistacher C N.Detection of citrus viruses by graft
transmission:a review[A].Riverside:In.Proe
7th Conf.IO(2V ,l975,lOCV,l75~ 185
[32]Quak F.Meristem culture and virus—free plant.In.
F.Reinert& Y.P.S.Bajai(eds.).P]am Celtis—
sue and organ cut[re[M].Berlin:Springer—Verlag,
1977,598~ 615
[33]Robaeker C D and Chang C J Shoot—tip culture of
M uscadine grape to]eiminate pierce’s disease bacteria
。 [J].Hortscience,1992,27(5):449~450.
[343王际轩,李 敬珍 ,隋世琴等.苹果组织培养苗离体
嫁接的研究口].园艺学报,1985,12(3):15l~l5 7
[35]薛光荣,扬振英,洪 霓等.茎尖培养等处理脱除
攀病毒的技术研究[J].中国果树,l995,3:9~11
C38]洪 霓,王国平,张尊平等.巢病毒脱除技术研究
[J].中国果树,1995.4:5~7
[37]Grum M ,Camloh M ,Rudolph K and Ravnikar M
Elimination of bean seed—borne bateria by ther—
motherapy and meristem culture[J] Plant Cell Tls
sure and Organ Cullure,1998,52:79~ 82.
[383陈菁瑛 ,胨景耀.龙眼茎尖离体培养及其脱毒效果
口].植物生理学通讯.1996,32(2):126~13i
[393 Navarro⋯I .Roistacher.C.N.,and Murashige.
T ,l976.Efect of size and source of shoot tips on
psorosis-A anal exocortis content of navel orange
plants obtained by shoot_【lp grafting in vitro[A].
Riverside: In. Proc. 7th Conf. IOCV. 1975.
IOCV,194~ 197
[403高原利雄等 简易茎尖嫁接法脱柑桔病毒_J] 果树
试验场报告,l986.8:13~24
[41]Navarro L,Jucurez J.Ballester J F and Pina J A.E一
]imination of some citrus pathogens producing psoro—
sis—like leaf symptoms by shot—tip grafting in vitro
[A .Riverside:In.Proe.8th Conf IOCV,]975,
198O,l62~ l66
(42]Mukhopadhyay S,Jaishree Rai,Sharma B C,eL a1.
Micropropagation d Dar)eeling orange(Citrus retieu一
[ata Blanco)by shoot—tip grafting[J].Journal of
Hortscience.1997,72(3):493~ 499
(43]李耿光,胡兰娟,黄群声等 柑桔 茎尖培养的韧步
研究[J].植物生理学报,1978,4(2l:189~l9
[443赵学源,蒋元晖,李世菱等.我国柑桔栽培品种的
裂皮病的鉴定与脱除_J].园艺学报(Acta Horticu].
ture Sinica),l986,13(2):91~ 94
[45]蒋元晖,邱柱石 .苏维芳,赵学源.利用茎尖嫁接脱
毒 培养无裂皮病的脐血橙[J].植物保护学报,
1983,10(8):l66~ 168
(46]蒋元晖.谈谈柑桔茎尖嫁接技术[J].中国柑桔,
l987,2:l5~ 16
[473张秋胜,舒广平.宁顺华.柑桔茎尖嫁接技术的改
进[J] 中国柑桔,1991,20(2):1l~l3
[483 Fengtong Ma,Chunhui Guo,Yurong Liu,eL a1.In
vitro shoot—apex grafting of Mulbrry (Morus alba
L..)[J].Hortscie~ce.1996,31(3):460~462
[49]王国平.德国果树病毒病研究及防治考察口].中国
果树 ,199l,47(1):55~56
维普资讯 http://www.cqvip.com