全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 25(6)：591—595 2005年 11月
广西十个不同产地的两面针中
活性成分的分析
刘绍华1，覃青云1，方 垄1，唐献兰1，杨卫豪1，张祥民
(1．柳州两面针股份有限公司博士后工作站 ，广西柳州 545001；2复旦大学化学系，上海 200433)
摘 要：采用 HPLC法对广西十个不同产地的两面针中具有抗肿瘤活性的氯化两面针碱和具有镇痛活性的
L．芝麻脂素的含量进行了分析和比较。发现在不同产地的两面针中氯化两面针碱和 L一芝麻脂素的含量差别
都较大，广西百色的两面针中氯化两面针碱含量和 L．芝麻脂素的含量均最高，氯化两面针碱 0．467 ，L-芝麻
脂素0．160 ；广西金秀的两面针中氯化两面针碱含量和L．芝麻脂素的含量均最低，氯化两面针碱 0．0490 ，
L一芝麻脂素 0．0370 。分析的色谱柱为 HYPERSIL BDS Cls，测定氯化两面针碱的条件为，流动相乙腈：
0．02 mol／L KHzP04溶液(34：66)，流速为 1．0 mL／min，柱温4O℃，检测波长 329 nm，进样量为2O L；测定
L．芝麻脂素的条件为，流动相乙腈：水(50；50)，流速为1．o mL／min，柱温 4O℃，检测波长 287 nm，进样量为
2O L。该研究为两面针在抗肿瘤药物和镇痛等方面的开发利用提供了可靠的理论依据，具有重要应用价值。
关键词：高压液相色谱；两面针；氯化两面针碱；芝麻脂素；抗肿瘤；镇痛
中图分类号 ：Q946 文献标识码：A 文章编号：1000-3142(2005)06-0591-05
r_-广11 1 J ● J● n ⋯ 1I● l l ● 1l 1 l ne determ lnatl0n 0tnitiOine c1110rlcIe ancl
L-。sesamin of Zanthoxylum nitidu
DC growing in ten areas of G
LIU Shao—hua ，QIN Qing—yun ，FANG Kun ，T
m(Roxb．)
uangxl
ANG Xian—lan1．
YANG W ei—hao ，ZHANG Xiang—min
(1．Workstation of Postdoctor of Liuzhou Liangmianzhen Co．LTD．，I．iuzhou 545001．China；
2．Department of Chemistry，Fudan University，Shanghai 200433，China)
Abstract；Active compounds of Zanthoxylum nitidum growing in ten different areas of Guangxi were analysed
in this study．The results were as follows：The content of nitidine chloride and L—sesamin had great difference
in the ten growing areas of Guangxi． The highest content of the nitidine chloride 0．467 and L-sesamin
0．1 60 of Zanthoxylum nitidum was growing at Baise of Guangxi；the lowest content of the nitidine chloride
0．0490 and L-sesamin 0．0370 of Zanthoxylum nitidum was growing at Jinxiu of Guangxi．The high per—
formance liquid chromatography(HPLC)was utilized for this purpose with the column of HYPERSIL BDS
C18．For nitidine chloride，the mobile phase containing acetonitrile and 0．02 mol／L monobasic potassium phos—
phate(34：66)，the detection wavelength was 329 nm，flowing rate was 1．0 mL／min，column temperature was
4O℃，sample injection was 2O L．For L-sesamin，the mobile phase containing acetonitrile and water(50
50)，the detection wavelength was 287 nm，flowing rate was 1．0 mL／min，column temperature was 40℃，sam一
收稿 151期：2004-12—13 修订 151期：2005—04—20
基金项目：复旦大学博士后流动站 ；柳州两面针股份有限公 司博士后工作站博士后研究项 目内容之一 (Supported by Workstation of
Postdoctor of Liuzhou Liangmianzhen Co．Lro．；Department of Chemistry，Fudan University)。
作者简介：刘绍华(1962一)，男 ，广西桂林人 ，博士 ，副教授 ，研究方向：靶向药物的开发研究，E-mai：．
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pie inj ection was 20“L．This study wil supply a reliable theoretic direction to develop and make use of Zan—
thoxylum nitidum in anti—tumor，antinociceptive and SO on．
Key words：high performance liquid chromatography(HPLC)；Zanthoxylum nitidum ；nitidine chlodine；L-
sesamin；anti—tumor；antinociceptive
两面针[Zanthoxylum nitidum(Rox．)DC．]系
芸香科花椒属植物，别名上山虎、入地金牛、两背针，
主要分布于我国广西、广东、云南、贵州、四川、浙江、
福建、江西、台湾等省，生于山野坡地灌木丛中。在
我国的传统医药开发中，中药两面针具有悠久的药
用历史，其根和茎皮具有驱风化湿、消肿止痛、行气
之功效，民间用中药两面针水煎服或研粉冲服，广泛
用于镇痛、抗炎和麻醉，主治风湿关节痛、跌打扭伤
肿痛、神经痛、牙痛、肠胃绞痛、胆道蛔虫症引起的疼
痛及疡病等(江苏新医学院，1977；杨仓 良，1993)。
1977年被收入 《中 国药典 》(国家药典 委员会，
1977)。1980年黄治勋等报导氯化两面针碱能延长
小鼠艾氏腹水癌的生命，对慢性粒细胞型白血病有
近期疗效(黄治勋等，1980)。药典是以薄层扫描法
测定其中氯化两面针碱的含量作为对两面针进行质
量控制的方法(中华人民共和国药典，1995)。有学
者报导用 TLC—UV法测定氯化两面针碱(赖茂祥
等，1992)，有用反相 HPLC测定的报导(陈钧等，
2001)，也有用 HPLC测定两面针中氯化两面针碱
含量的报导，此方法简便、灵敏、准确、重现性好(张
守尧等，1998)。1982年曾报导从中药两面针中分
离出来一种木脂素化合物叫两面针结晶一8(结构未
确定)具有解痉、镇痛和镇静等作用(曾雪瑜，1982)。
洪庚辛等(1983)还报导了两面针结晶一8镇痛作用
机理。因此，有学者建议将木脂素的鉴别和测定作
为衡量两面针质量的标准之一(张守尧等，2002)。
本研究采用 HPLC法对广西十个不同产地的两面
针进行氯化两面针碱和木脂素化合物——L一芝麻脂
素的分析和比较，为中药两面针的最佳原料产地的
选择和两面针的开发利用提供可靠的理论依据，具
有重要的指导意义。
1 仪器、药材和试剂
1．1仪器
日本岛津 UV一2201紫外分光光度计，日本岛津
高效液相色谱仪(LC—IOA高压泵，SPD-10A紫外检
测器，GS—light色谱数据处理软件)。
1．2药材
氯化两面针碱标准品为外购商品(由中国药品
制品检定所提供)，L-芝麻脂素对照品由本研究小组
分离和鉴定。两面针样品采自广西的金秀，百色，北
流，钦州，融水，天峨，桂平，邕宁，桂林，龙州十个不
同产地。样品由柳州两面针股份有限公司黄光伟高
级工程师鉴定，并保存在柳州两面针股份有限公司。
1．3试剂
乙腈：HPLC级色谱纯；甲醇：HPLC级色谱纯。
2 实验方法
2．1氯化两面针碱的检测
2．1．1色谱条件 大连依利特公司 HYPERSIL
BDS Cl8高效液相色谱柱 (5 m，4．6 Inm×250
mm)，C。保护柱，检测波长：329 nm，柱温：4O℃，流
动相：(乙腈：0．02 mol／L KHzPO 溶液(34：66))，
流速：1．0 mL／min，进样量：2O L，外标法定量。
2．1．2求标准曲线和线性回归方程 准确称取
0．0015 g氯化两面针碱标准品，用 HPLC级甲醇溶
解后定容于 25．OO mL容量瓶中，摇匀后作为标准
品贮备液。
准确量取标准 品贮备液 0．10、0．25、0．50、
1．O0、2．O0、3．O0 mL和 4．O0 mL于 10．O0 mL容量
瓶中，以甲醇定容至标线，摇匀，得如表 1所示的各
梯度浓度的标准品溶液。
取各浓度标准溶液 2O L进样测定，每个浓度
进样 3次，以平均峰面积为纵坐标，对应的浓度 C
(mg／rnL)为横坐标作标准曲线和线性回归方程，在
0．0006~0．0240 mg／mL范围内的线性关系良好，
见表 1、图 1。
2．2 L-芝麻脂素的检测
2．2．1色谱条件 大连依利特公司 HYPERSIL
BDS C 8高效液相色谱柱 (5 m，4．6 Inm×250
mm)，C 。保护柱，检测波长：287 nm，柱温：4O℃，流
动相：乙腈一水 (50：50)，流速：1．0 mL／min，进样
量：2O L，外标法定量。
2．2．2求标准曲线和 线性回归方程 准确称取
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0．0066 g L一芝麻脂素对照品，用甲醇溶解后定容于
5O．O0 mL容量瓶中，摇匀作为对照品贮备液。
准确量取对照品贮备液 0．20、0．40、0．50、
0．70、0．80 mL和 1．O0 mL于 1O．O0 mL容量瓶中，
以甲醇定容至标线，摇匀，得对照品溶液。
取各浓度对照品溶液 2O L进样测定，每个浓
度进样 3次，以平均峰面积为纵坐标，对应的浓度 C
(mg／mL)为横坐标作标准曲线和线性回归方程，在
0．00264～0．01320 mg／mL范围内的线性关系 良
好 ，见表 2、图 2。
表 1 标准品氯化两面针碱溶液的浓度和峰面积
Table 1 The concentration and the peak area of
nitidine chloride as reference substance
表 2 对照品 L_芝麻脂素溶液的浓度和峰面积
Table 2 The concentration and the peak area
of L-sesamin as reference substance
2．3样品分析
取广西十个不同产地两面针根的干燥横切薄片
约 0．55 g，精密称定，置于 100 mL圆底烧瓶中，加
45 mL甲醇，于68℃水浴中加热回流 2 h，冷却后用
甲醇定容至 5O．O0 mL，摇匀，用 0．45 m有机相滤
膜过滤，取2O L进样测定，每个样品进样 3次，以
平均峰面积根据线性回归方程计算其浓度(mg／
mL)，然后计算药材中氯化两面针碱的含量( )和
L一芝麻脂素的含量( )。
对照品溶液与两面针原根药材中的氯化两面针
碱的色谱图见图 3、图4。
对照品溶液与两面针原根药材中的 L一芝麻脂
素的色谱图见图5和图 6。
2500000
l 2000
1500000
1000000
懈
鎏5000
O
0．000 0．010 0．020 0．030
浓度 Concentration(mg／mL)
图 1 标准品氯化两面针碱的标准曲线和线性回归方程
Fig．1 The standard curve and the linear regression
equation of nitidine chloride as reference substance
g
o_
暄
浓度 Concentration(mg／mL)
图2 对照品L_芝麻脂素的标准曲线和线性回归方程
Fig．2 The standard curve and the linear regression
equation of L-sesamin as reference substance
2．4精密度试验
在十个不同产地两面针样品中，精密吸取试样
溶液 2O L，连续进样 3次，计算相对标 准偏差
RSD。以邕宁、桂林、龙州三个不同产地的两面针为
例来进行日内反复测定氯化两面针碱，计算 RSD和
测量误差。同样，以桂林产的两面针为例来进行 日
内反复测定 L一芝麻脂素，计算 RSD和测量误差。
2．5加标 回收率的测定
准确量取已经过测定，含量已知的百色两面针
横切片，准确加入一定量的氯化两面针碱对照品，依
2．3法提取，测定并计算加标回收率；用同样的方法
测定并计算 L一芝麻脂素加标回收率。
3 实验结果
(1)广西十个不同产地两面针中氯化两面针碱
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1．25
1．00
0．75
0．50
0．25
O．OO
OO 2 5 5 0 7 5 10．0 rain
图 3 对照品溶液色谱图(12：生物碱)
Fig．3 The chromatogram of nitidine chloride as
reference substance(1 2：nitidine chloride)
图5 对照品溶液色谱图(2；芝麻脂索)
Fig．5 The chromatogram of L—sesamin as
reference substance(2：sesamin)
表 3 广西十个不同产地两面针根中氯化两面针碱含量
Table 3 The content of nitidine chloride in
the roots of Zanthoxylum nitidum from
1 0 growing areas of Guangxi
及 L一芝麻脂素的含量( )和RSD(n=3)见表 3、4。
(2)在邕宁、桂林、龙州三个不同产地的两面针
样品中，日内反复测量氯化两面针碱的含量，计算其
RSD和相对误差，结果见表 5；同样，以桂林两面针
0 0 2．5 5．0 7．5 10．0 rain
图4 两面针根提取液色谱图(10：生物碱)
Fig．4 The chromatogram of nitidine chloride in the root
of Zanthoxylum nitidum extract(1 0：nitidine chloride)
图 6 两面针根提取液色谱图 (8：芝麻脂索)
Eg．6 The chromatogram of extracted L-sesamin from
root of Zanthoxylum nitidum(8：sesamin)
为例，日内反复测定 L一芝麻脂素的含量，计算 RSD
和测量误差，结果见表 6。
表 4 广西十个不同产地两面针根中L．芝麻脂素含量
Table 4 The content of L-sesamin in the
roots of Zanthoxylum nitidum from
1 0 growing areas of Guangxi
(3)加标回收率实验结果见表 7和表 _8。
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4 讨论
氯化两面针碱和木脂素类化合物被认为是两面
针中的有效成分。其中氯化两面针碱能延长小鼠艾
氏腹水癌的生命，对慢性粒细胞型白血病有近期疗
效，是抗肿瘤药物的有效成分，而也有文献提出将木
脂素类化合物的含量测定和鉴定作为衡量两面针质
量的标准之一(张守尧等，2002)。据此本研究将广
西十个不同产地两面针根中的氯化两面针碱和 L_
芝麻脂素进行了含量的测定，结果发现广西百色的
表 5 三个不同产地的两面针样品中氯化两面针碱
在 日内测量值的标准偏差和相对误差
Table 5 RSDs and REs of nitidine ch1oride content of
Zanthoxylum nitidum in three different growing areas
表 6 L一芝麻脂素日内含量的标准偏差和相对误差
Table 6 RSD and RE of of L-sesamin in one day
content measuredin content measured
表 7 加标回收率实验结果
Table 7 Recovery rate of nitidine chloride
in the samples(n一 3)
表 8 L一芝麻脂素加标回收率实验结果
Table 8 Recovery rate of l-seamin in the samples(n= 3)
两面针中氯化两面针碱的含量最高，为0．467 9／6，其
次是天峨，为 0．383 oA，含量最低的是金秀样品，为
0．049 。同样，发现采 自广西百色的两面针中 L一
芝麻脂素含量最高，为 0．160 ，其次是龙州，含量
为0．111 ，金秀样品的含量最低，为 0．037 oA。因
此，可以确定，生长在广西桂西、桂南一带的两面针
中氯化两面针碱和 L_芝麻脂素含量较高。这为两
面针在抗肿瘤药物和镇痛等方面的最佳原料产地的
选择和两面针的开发利用提供了可靠的理论依据，
具有重要应用价值。
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