全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 26(4)：451— 452 2006年 7月
RP-HPLC测定红丝线中香豆素的含量
蒋小华，谢运昌 ，黄永林
( 羹 要广西植物研究所，广西桂林54106)
摘 要：采用反相高效液相色谱法 ，测定红丝线中香豆素的含量。色谱柱为 ZORBAX XDB—Cls(4．6 mm×
150 mm，5 m)；流动相 ：V(甲醇)：V(0．01 mol／L磷酸二氢钠溶液(pH5．4))一45：55；流速 ：1 mL／min；检
测波长 278 nm。香豆素的线性范围为 2．5～30 rag／L(r一0．999 8)，回收率 97．5 ～101 。该法简便、准确，
重复性好，适用于测定红丝线 中香豆素的含量 。
关键词：反相高效液相色谱法；爵床科；红丝线；香豆素
中图分类号 ：Q946 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3142(2006)04—0451-02
Analysis of coumarin in Peris trop he
bap hica by RP—-HPLC
JIANG Xiao—hua，XIE Yun—chang ，HUANG Yong—lin
(Guangxi Institute of Botany，Guangxi Zhuangzu Autonomous Region and Academia Sinica，Guilin 541006，China)
Abstract：To establish a method for the determination of coumarin in Peristrophe baphicn，RP—HPLC Was con-
ducted on a ZORBAX XDB—Cl8(4．6 mm×150 mm，5／~m)with MeOH—NaHzDO4(0．01 mol／L，pH：5．4)一45
：55，flow rate 1．0 mL／min，the detection wavelength was set at 278 nm．The linear range of coumarin Was 2．
5～30 mg／L(r=0．999 8)．The recoveries were 97．5 ～ i01 ．The method is simple，and accurate with good
reproducibility，it is suitable for determination of the content of coumarin in P
． baphicn．
Key words：RP—HPLC；Acanthacea；Peristrophe；coumarln
红丝线(Peristrophe baphica)为爵床科观音草
属植物，主要分布于我国南部，药用全草，有清肺热、
止咳、凉血止血、消肿止痛等功效(国家中医药管理
局中华本草编委会，1999)。香豆素又称邻羟基桂酸
内酯和 1，2一苯并吡喃酮，在爵床科观音草属植物中
有分布，它曾被用作治疗淋巴水肿的药物，有消肿作
用(周荣汉，1988)。我们从红丝线中分离鉴定了香
豆素，但红丝线中香豆素含量测定方法未见报道。
为制定药材的质量标准提供依据，本文建立了测定
红丝线中香豆素的反相高效液相色谱方法。
1 仪器与材料
Agilent一1100分析型高效液相色谱仪(配备二
极管阵列检测器、四元梯度泵、在线真空脱气机、
7725i手动进样器、HP化学工作站，Agilent公司)；
R一3000型旋转蒸发仪(瑞士 Bachi公司)；超纯水仪
(Milipore公司)。
香豆素为分析纯(佛山市化工实验厂)，甲醇为
色谱纯(上海生生化工助剂厂)，水为超纯水(自制)，
收稿 日期：2005—07-14 修回日期 ：2005—10-17
基金项目：国家自然科学基金(30360117)；广西 自然科学基金(0342002—2)；国家科技攻关计划课题(2005BA901A10)(“西部开发”
重大项目)资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China(30360117)；Natural Science Foundati0n 0f Guangxi
(0342002—2)；National Key Technologies Research and Development Program of China(2005BA901AlO)]
作者简介：蒋小华(1977一)，女 ，广西临桂人，研究实习员 ，从事天然药物研究
通讯作者(Author for c0rresp0ndence，E-mail：yuc018@163．corn)
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其它试剂均为分析纯。
红丝线分别采 自广西宜州、靖西、宁明，经广西
植物研究所韦发南鉴定。采集其枝叶部分，置于室
内通风处阴干，再置于内装变色硅胶干燥器中存放。
2 实验方法
2．1色谱条件
色谱柱：ZORBAX XDB—C18柱(4．6 mm×150
mm，5 m)；柱温：室温；流动相：V(甲醇)：v(o．01
mol／L磷酸二氢钠溶液 (pH5．4))，流速：1 mL／
min；三维光谱扫描确定检测波长 278 nm；进样量：
2O L。定量方法：外标法。在上述条件下香豆素色
谱峰与其它组分达到了良好分离(陈捷等，1999)。
2．2供试品的制备
精密称取经粉碎的红丝线样品(过二号筛)1．0
g，置于 100 mL具塞锥形瓶中，精密加入石油醚 100
mL，密塞 ，称定质量 ，超声提取 40 min，取出，待冷
却后称重，用石油醚补足减失质量，摇匀静置。精密
吸取上清液 1O mL于 4O℃水浴上真空浓缩干，放
冷，精密加入甲醇，水分别 1 mL，9 mL，超声 20 S使
溶解，用微孑L滤膜过滤后，取续滤液备用。视香豆素
含量高低，酌情稀释或加倍取样。
2．3线性关系考察
精密称取香豆素对照品 50．0 mg，置于 5O mL
棕色容量瓶中，用甲醇溶液(V甲醇 ：V水=9：1)
的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，此溶液 A质量浓
度为 1．O0 g／L。准确吸取溶液 A 5．0 mL于 50 mL
棕色容量瓶中，用甲醇溶液(V甲醇 ：V水一9：1)
溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品溶液，质量浓
度为 0．10 g／L。精密吸取对照品溶液 0．25、0．50、
1．0、2．0、3．0 mL分别置于 1O mL棕色容量瓶中，
加入甲醇溶液(V甲醇 ：V水=9：1)稀释至刻度，
摇匀，制成系列浓度的对照品溶液。微孔滤膜过滤，
取滤液按上述色谱条件进行测定。以峰面积 Y对
进样质量浓度 X(mg／L)绘制标准曲线。计算得回
归方程为：Y一61．016X+0．2585，R一0．9998，结果
表明：香豆素质量浓度在 2．5～30 mg／L范围内线
性关系良好。
2．4精密度试验
精密移取上述对照品溶液，按上述色谱条件进
行测定。连续进样 5次，测定峰面积积分值，代人回
归方程，计算香豆素含量，考察仪器精密度。结果表
明仪器精密度良好。其 RSD为 0．92 。
2．5重复性试验
精密称取 5份红丝线(宜州)样品，按“2．2”项方
法制备后，在上述色谱条件下进行分析，计算香豆素
含量，考察方法重复性，结果表明方法重复性良好，
其 RSD值为0．31 。
2．6回收率试验
精密称取红丝线(宜州)样品 3份，分别精密加
入高、中、低 3种浓度的对照品溶液，按“2．2”项方法
制备后，在上述色谱条件下进行分析，计算回收率，
结果见表 1。
表 1 回收率测定结果 (n一3)
Table 1 Determination results of recovery
2．7稳定性试验
取红丝线(宜州)供试品，放置 24 h后，按上述
色谱条件进样分析，记录色谱峰面积，结果表明样品
在 24 h内稳定性 良好。
2．8最低检测线
在选定色谱条件下，当信噪比为3时，香豆素最
低检测限为0．05 mg／L。
3 结果
取供试品按上述色谱条件进行分析，记录色谱
图(图 1)，计算香豆素的含量。测定结果见表 2。
0 1．0 2．0 3 0 4．0 5 0
T i me(m i n)
图 1 红丝线中香豆素的 HPLC分析
Fig．1 Analysis of coumarin in Peristrophe
baphica by HPLC
A．香豆素Coumarin；B．红丝线 P．baphica；C．空白Contro1．
(下转第 455页 Continue on page 455)
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4期 黄永林等：不同部位艾纳香中总黄酮的含量测定 455
定吸收值，测得平均回收率为99．7 ，RSD为 2．3 。
表 3 重复性实验结果
Table 3 Results of parallel tests
编号 No
含量 Content(％)
平均含量 Average(％)
RSD ( )
3 讨论
(1)在总黄酮提取时，有人采用乙醚提取后再用
甲醇提取药材中的总黄酮(单鸣秋等，2002)，本实验
曾采用乙醚提取后再用甲醇提取药材中的总黄酮与
用甲醇直接提取药材中的总黄酮制备供试品溶液进
行含量检测比较，结果表明两者相差较小，因此本实
验选用操作简便的单一甲醇作提取溶剂。
(2)从显色稳定性试验可见其吸收值在 30 min
内基本稳定，提示吸收值的测定在显色后 30 min内
完成较好，本实验选用显色后 15 min检测。本实验
方法简便、可靠、准确，可作为艾纳香中不同部位及
提取物的检测方法。
(3)从表 2的结果来看，艾纳香中三个不同部位
叶、小枝条、茎中总黄酮的含量有比较大的差别，其
中叶中总黄酮的含量最高，达 2．94 ，小枝条的含
量最低只有 1．21 9，6，只要通过叶、小枝条、茎的药理
试验结果，可以初步判断黄酮类成分与临床功效之
间的相互关系，为今后对艾纳香中黄酮类成分与临
床功效间相互关系的深入研究奠定了基础。
参考文献：
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(上接第 452页 Continue from page 452)
表 2 红丝线中香豆素的含量测定结果
Table 2 Contents of coumarin in Peristrophe baphica
编号 采集地 香豆索含量(g／kg)
No． Locality Coumarin content
4 讨论
(1)曾对提取溶剂(石油醚、甲醇)、提取方法(超
声处理、回流提取、浸渍)、提取时间(20，40，60 min)
作了对比试验，结果以本文提取方法为最佳。
(2)本试验用二极管阵列检测器对香豆素色谱
峰在 200~600 nm范围内进行光谱扫描，在 278 nm
处有最大吸收，选择 278 nm作为检测波长。
(3)测定结果表明，香豆素在观音草属植物中分
布是不均匀的。爵床科植物是分类难度很大的植
物，该 3种植物现在作为同名植物，但有分类学家认
为该 3种植物为不同的种。本研究结果支持了宜州
产红丝线不同于其他两种红丝线的分类学观点。
参考文献：
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