全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 25(5)：469— 471 2005年 9月
益智有效抗氧化成分的分离条件的研究
刘 红1一，郭祀远 ，韩长 日2，纪明慧 ，李 琳
(1．华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510641；2．海南师范学院化学系 ，海南海口 571158)
摘 要 ：探讨了干柱层析法分离益智渣及益智乙醇提取物的抗氧化成分。实验中采用乙酸乙酯／环己烷(3；
7)、氯仿／甲醇(9：1)为展开剂依次二次干柱层析分离 出抗氧化物质 。结果表明，益智渣及益智 乙醇提取物均
有较强的抗氧化性 ，益智渣的 H2O2清除能力强于益智乙醇提取物。
关键词 ：益智；抗氧化剂 ；自由基
中图分类号 ：Q946 文献标识码 ：A 文章编号：100O一3142(2005)05-0469-03
Separation of the antioxidative ingredient
from Alpinia OXYphylla M ique[ P ox l
LIU Hong 一，GUO Si—yuan1，HAN Chang—ri ，JI Ming—hui2，LI Lin1
(1．College of Light Industry and Food，South China University of Technology，Guangzhou 510641．
China；2．Department of Chemistry，Hainan Normal University，Haikou 571158，China)
Abstract：In this paper，we extracted the antioxidative substance from Alpinia oxyphylla Miquel by using
column chromatography．In the process of experiment，we separated better efficient antioxidative fractions by
silica gel column chromatography with different extensible reagent，ethyl acetate：hexane(3 l 7)and chloro—
form：methanol(9 l 1)．The results show that the ethanol extracts from the seeds of A．oxyphylla Miquel and
its residue after hydrodistiling have better antioxidant activities，particularly，the capacity of scavenging on
Hz Oz is higher in the resiclue of A．oxyphylla Mique1．
Key words：Alpinia oxyphylla M iquel；oxidation inhibitor；radical
益智(Alpinia oxyphylla Mique1)为多年生热
带雨林半荫性草本药用植物，是姜科(Zingiberace—
ae)山姜属植物的干燥成熟果实。其果实性温和，味
辛辣且香浓。主要用于治疗“温脾止泻摄唾，暖肾固
精缩尿”(中国卫生部，1985)。
益智是海南四大南药之一，也是卫生部 1998年
公布的既是食品又是药品的一种天然植物，具有广
泛的生物活性，如抗 氧化性 、抗衰老 、抗肿瘤 、抗菌
等，其中最为重要的是抗氧化活性，它能抑制脂肪氧
化和清除自由基。众所周知，羟自由基(·OH)和
HzOz是致癌物(郑荣梁，1998)。本研究以清除羟
自由基(·OH)和 HzOz为指标分离从益智提取物
中分离具有极强抗氧化性的化合物。
1 材料与实验
1．1试验材料与设备
1．1．1试验材料 益智(万宁新中农场)。薄层层析
硅胶 H(化学纯)、30 过氧化氢(分析纯)、乙酸乙
酯(分析纯)、环己烷(分析纯)、甲醇(分析纯)、乙醇
(分析纯)、氯仿(分析纯)。
1．1．2设备 KDW 型调温电热套(山东省城永兴仪
器厂)；721型分光光度计(上海精密科学仪器有限
公司)；CS5Ol型超级恒温器(重庆试验设备厂)。
收稿日期 ：2004—07—13 修订 日期 ：2005—02—2O
基金项 目：海南省 自然科学基金资1／(20301)(Supported by the Natural Science Foundation of Hainan Province，Grant No．20301)。
作者简介：刘红(1 967一)，女，山东诸城人，副教授，博士生，主要从事天然产物分离研究。E—mail；lhyd123@sohu．com
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47O 广 西 植 物 25卷
1．2实验方法
1．2．1有效抗氧化成分的工 艺流程 (1)益智 乙醇
提取物的分离：将干燥的益智粉碎，取一定量的益智
粉 ，用无水乙醇浸泡 1 d，过滤 ，将 乙醇提取液加热蒸
馏 ，得到粘稠的深褐黄色的树脂油。然后用乙酸 乙
酯／环 己烷(3：7)展开分得五层 。测定每层的抗氧
化性 ，接着将效果好的一层用氯仿／甲醇(9：1)展
开 ，继续分离得到 3层 ，并测定每层抗氧化性。
(2)益智渣的有效成分提取分离 ：将益智粉水蒸
汽蒸馏，蒸馏后的余渣用无水 乙醇浸泡 1 d，得到 乙
醇提取液 ，减压浓缩。然后用乙酸乙酯／环己烷 (3：
7)展开分得 4层。
1．2．2抗氧化作用的测定 (1)H O 清除能力实验
(宁正祥等，1995；王巨存等，1994)。样品溶液的制
备 ：把各层 色带分别用 2O mL无 水 乙醇分 3次提
取 ，萃取 液 蒸 发 乙醇 ，得 各 层 的 益智 挥 发 油，称
0．300 0 g，用乙醇定溶 到 1O mL。H O 清除能力
测定 ：H O 清除量测定采取碘量法，在碘量瓶中加
入 l mL样品溶液 ，0．1 mol／L柠檬酸缓冲液 5 mL
定溶到 25 mL，加入 0．1 mol／L H O2(用时配制)2
mL置 37℃ 恒温 水浴 中保 持 20 min取 出，加入
1O KI溶液 2 mL，2 mol／L H PO 1 mL暗处反
应 120 min，从 反 应液 中取 2 mL溶 液，用 0．002
mol／L Na S O 溶液滴定 ，同时做空 白试验 。
H O2清 除 量 (mmol／mL 样 品 )一 C(V空一
V样)／V
式中：C-NazSzO 标准液 的浓度 (mol／L)；V空一
空白试验消耗标准液的体积(mL)；V样一样品试验消
耗标准液的体积(mL)；V一所取样品体积(mL)。
(2)羟 自 由基 的 清 除 率 的 测 定 (王 巨存 等 ，
1994)：50 mmol／L Na2 HPO4一Nail2PO4缓冲液 2
mL，40／~g／mL蕃红花红 2 mL，样品溶液 1 mL，3
H2O2溶液 2 mL(用 时配制)，0．001 moL／L EDTA-
Fe(Ⅱ)2 mL(用时配制)，混匀 ，37℃恒温水浴 中保
持 30 rain，在 520 nm测吸光度。空白则 以 1 mL无
水乙醇代替样品溶液 ，对照 以 1 mL无水 乙醇和 2
mL蒸馏水代替 EDTA—Fe(Ⅱ)和供试样品。
清除率一(A样品一A空白)／(A对照一A空白)×100％
2 结果与分析
2．1益智渣提取物抗氧化性分析
2．1．1益智渣提取物清除 H O 活性 以乙酸乙酯
／环己烷(3：7)为展开剂，柱色谱分为 4层：1层为
黄色 ，对 H2O2清除量为一2．13 mmol／mL；2层、3层
为浅黄色 ，对 H O 清除量分别为 0．1 mmol／mL和
一 0．1 mmol／mL；4层 为棕黄色 ，对 H2O2清除量为
1．8 mmol／mL。不 同色带对 H O 的清除率各不相
同。其中 4层清除能力较强 ，而 1和 3层没有清除
作用，而且有促进氧化作用。本实验结果表明只有
4层(呈棕黄色)清除能力较强。
2．1．2益智渣提取物清除羟自由基活性
上述各层羟 自由基清除率见图 1。
1 2 3 4
图 1 不同色带对羟基 自由基的清除率
Fig．1 Scavenging effect of extracts of Alpinia
oxyphylla Miquel without distilled oil from different
chromatography layer on hydroxyl free radicals
由图 1可以看 出，不同色带对羟 自由基 的清除
率各不相 同。其 中 2层、4层较好 ，而 1层、3层较
差。从清除 H 0 自由基 和清除羟 自由基活性看 ，
利用柱层析分出第 4层有抗氧化活性 。
2．2益智乙醇提取物抗氧化性分析
2．2．1益智乙醇提取物清除 H O 活性 以乙酸乙
酯／环己烷(3：7)为展开剂，柱层析共分 5层色带：
I层为棕黄色，对 H O 清除量为一2．84 mmol／mL；
Ⅱ层 、Ⅲ层为浅黄色 ，对 H O 清除量分别为一0．43
mmol／mL和 0．1 mmol／mL；lV层 为 深 黄 色，对
HzOz清除量为 0．41 mmol／mL；V层为黑褐色，对
H O 清除量为 0．48 mmol／mL。其中V层清除能
力较强，而 I层、Ⅱ层没有清除能力。
2．2．2益智乙醇提取物清除羟自由基活性 以乙酸
乙酯／环 己烷(3：7)为展开剂共分 5层色带，各层羟
自由基清除率见 图 2，其中 V层 (5层)最好，而 I层
(1层)、Ⅱ层(2层)较差。
2．3益智乙醇提取物进一步分析抗氧化作用
取第一次层析的抗氧化性最好的V层，以氯仿
∞ ∞ ∞ 0
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5期 刘 红等：益智有效抗氧化成分的分离条件的研究 471
／甲醇(9：1)为展开剂。共分为 3层色带，V。为深
黄色，V：黄色 ，V 为黑褐色。
2．3．1 H：O：清除量 共分为 3层色带：V。对 HzOz
清除量为 1．57 mmol／mL~Vz对 H：O：清除量为
0．93 mmol／mL~V3对 H2O2清除量为 2．17 mmol／
mL。其中 V 层最好 ，V。次之，V：较差。
2．3。2羟自由基的清除率 各层羟自由基清除率见
图3，其中V 层最好，V。次之，Vz较差。
镣
延
2 3 4 5
图 2 不同色带对羟基 自由基的清除率
Fig．2 Scavenging effect of extracts of Alpinia
oxyphylla Miquel without distilled oil from different
chromatography layer on hydroxyl free radicals
1∞
g 80
蔓 60
∞
蜓
昌 20
U
∽ 0
V1 v2 v3
图 3 羟自由基的清除率
Fig．3 Scavenging effect of extracts of Alpinia
oxyphylla M iquel from the second chromatography
on hydroxyl free radicals
3 结论
益智渣 乙醇提取物在第一次 的干柱层析中，以
乙酸乙酯／环己烷(3：7)为展开剂展开 的干柱层析
为4层，测其各层抗氧化性中得出 4层最好。由于
各层受到的极性不同而分为 4层，极性小的 4层则
在最底层，其颜色从 1到 4层分别为棕黄色、浅黄
色、浅黄色、棕黄色；其味道都有甜药味，而4层的辛
辣味浓。
益智乙醇提取物第一次展开分为 5层，V层抗
氧化性最好。其颜色从 I到V层分别为棕黄色、浅
黄色、浅黄色、深黄色、黑褐色；其味道都有甜药味，
而 V层的辛辣味浓。
为了分离的清除 H：O：的物质，益智乙醇提取
物第二次干柱层析选择展开剂改为氯仿／甲醇(9：
1)。由于展开剂中的甲醇极性大能使 V层提取物
迅速分层。从柱中颜色看出分 3层，从 V。到 V 层
的颜色分别为深黄色、黄色、黑褐色，并测其抗氧化
性中得出 V 层最好 。可能的抗氧化性物质是益智
酮 A、益智酮 B。
结果表明，益智乙醇提取物和益智渣具有较强
能清除过氧化氢、羟自由基的性能，有抗氧化作用。
参考文献：
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