全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 24(1)：37—39 2004年 1月
马可波罗百合的组织培养和离体快繁
丁 兰，赵庆芳，刘瑞梅
(西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州 730070)
摘 要：以马可波罗百合的鳞片、茎段卡u茎尖为外植体，成功建立了快速无性繁殖系。诱导鳞片产生丛芽的
最佳培养基为：MS+0．3～O．8 mg／L BA+0．05 mg／L NAA；茎尖的最佳诱导培养基为：MS+2 mg／L BA+
0．05 mg／L NAA；茎段的最佳诱导培养基为：MS+0．8 mg／L BA+0．1 mg／L NAA。丛芽增殖培养基：MS+
0．2 mg／L BA+0．1 mg／L NAA和 MS+0．2 mg／L BA+0．1 mg／L IAA。生根诱导最佳培养基为 1／2 MS+
0．2 mg／L KT+0．O5～ O．5 mg／L NAA。
关键词：马可波罗百合；组织培养；无性繁殖系；激素
中图分类号 ：Q943．1 文献标识码 ：A 文章编号：1000—3142(2004)01—0037—03
Study 0n tissue culture and propagation
0f M aroco polo in vitro
DING Lan，ZHAO Qing—fang，LIU Rui—mei
(College of Life Sciences，Northwest Normal University，Lanzhou 730070，China)
Abstract：The clone propagation of Maroco polo is developed through culture of scales and stems in vitro．In—
duction medium of shoots are MS+0．3，一O．8 mg／L BA+0．05 mg／L NAA，MS+0．8 mg／L BA+0．1 mg／L
NAA and MS+2 mg／L BA+0．05 mg／L NAA．Proliferation medium are MS+0．2 mg／L BA+0．1 mg／L
NAA and MS+0．2 mg／L BA+0．1 mg／L IAA．Induction of roots are better in medium of 1／2 MS+O．2 mg／
L KT+O．O5～O．5 mg／L NAA active charcoa1．
Key words：Maroco polo；tissue culture；clonal；phytohormone
百合(Lilium)为百合科(Liliaceae)的多年生草
本植物，根据用途可分为药用百合、食用百合和观赏
百合，对其研究报道涉及到离体快繁、脱毒复壮，单
倍体培养、细胞遗传研究等诸多方面(丁兰等，2002；
王红霞等，2000；陈小兰等，2000；黄敏玲等，1988，
1993；杨承德等，1988；谷祝平等，1982，1983；贾敬芬
等，1981)。
本研究选用马可波罗百合，属东方百合系，由天
香百合(L．auratum Lind1)、药用百合(L．speciosum
Thunb．)百合品种杂交获得的著名百合品系，花硕
大，白色，花香幽雅。目前国内主要通过进口种球进
行繁殖，由于分株繁殖系数低，不能满足市场需要。
加之进口百合种球由于长期营养繁殖，已有病毒积
累，引种两年后，品质开始下降，花色变淡，花冠变
小，不形成花蕾或形成畸形花蕾，影响其观赏价值和
经济价值。通过组织培养技术的手段，可有效解决
以上问题，不但在短期内能获得大量种苗，还可以通
过茎尖脱毒技术得到品质优良的脱毒苗。
本实验以马可波罗百合鳞片、茎段、茎尖为材
料，成功建立了快速无性系，对其芽的诱导、增殖、生
根及移栽进行了较深入的研究。探讨了不同激素浓
度、培养基等因素对芽的生长、增殖及生根的影响，
收稿日期：2002—12—31 修订日期：2003—04—15
基金项目：国家星火计划资助(2001A86005)；甘肃省计划委员会基金项目资助(5002／126)。
作者简介：丁兰(1964一)，女，四川德阳人，博士生，副教授，主要从事植物细胞工程及天然产物研究。
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38 广 西 植 物 24卷
为马可波罗百合种苗大规模生产及品种复壮提供了
可靠的技术路线和理论依据 。
1 实验材料与方法
1．1实验材料
马可波罗百合(商品名：Maroco polo)由甘肃临
洮新兴花卉公司提供。
1．2实验方法
将百合的鳞片和茎段分离，挑选无病斑的材料，
在洗涤剂水中用刷将材料上的泥土刷净。流水冲洗
10～12 h后，在超净台上用 75 乙醇消毒 30～60
min，投入 0．1 升汞溶液(滴加 2～3滴吐温)中消
毒 14～17 rain(大约 5 min更换 1次消毒液)，最后
用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的鳞片横切成上、
中、下三部分，约0．8 cm×0．8 cm方块，茎段切成长
约 1 cm小段，并将 0．8～1 mm的茎尖分离出，接种
于MS附加不同种类和浓度激素的培养基中进行初
代培养。
1．3培养条件
以MS培养基为基本培养，培养基的pH5．6，均
用0．9 的琼脂固化。光照强度为2 000 lx；光照时
间为 12 h／d。培养温度为(23±2)℃。每组 7～10
个处理。
2 实验结果及讨论
2．1鳞茎培养
2．1．1鳞片不同部位的培养 将每个鳞片分切成
上、中、下三段，接种培养基见表 1。10 d后鳞片开
始变绿，18 d后鳞片凹面出现白色突起，30 d后突
起形成小芽或根。小芽长大后形成鳞茎，部分小芽
基部有白根长出，并具有丰富的根毛。
实验结果表明，鳞片产生芽的能力从强到弱顺
序为：鳞片基部(95 )、中部(36 )、上部(0)。其结
果与杨成德等(1988)对兰州百合的实验结果一致，
因此，鳞片基部近基盘处是初代进行芽诱导培养的
最好外植体。
2．1．2激素对鳞片产芽的影响 鳞片接种45 d后统
计实验结果(表 1)，BA浓度在 0．3～0．8 mg／L之
间，NAA浓度与此相对应在 0．05～1．0 mg／I 之间
对鳞片的诱导效果较好，诱导率为 60 ～66．7 ，
平均每个外植体上可诱导出 4个以上的小芽；BA
浓度低于 0．3 mg／L时，芽的诱导率不高，且每个外
植体上新生芽数少；BA浓度在 1．2 mg／L以上时，
尽管诱导率较高，芽平均数也不低，但通过近5个月
的观察表明，随着 BA浓度的升高，芽的生长受到了
抑制，表现为后期的小鳞茎数增多但芽的形态呈矮
胖状，不长高。因此，3～8号培养基是较好的初代
培养基，其中7号培养基最理想，不但诱导率高，而
且平均每个外植体的新增芽数也多，诱导产生的小
芽数也多，为 11．5个。当NAA浓度比BA浓度高
时，如 3、4号培养基，诱导产生小芽的基部有 2～5
个白色小根，可一次成苗。
表 1 激素对鳞片产生芽的影响
Table 1 Effects of different phytohormone
compositions on the buds formation
攀 罢Inducing T娶he numbe Growth
35
45
60
65
61
67
67
67
63
64
2 好 ，无根
2 好，无根
4．5 好 ，有根
5．0 好 ，有根
4．5 好 ，无根
5．0 好 ，无根
11．5 好，无根
5．5 好，无根
6．0 芽丛生长慢
5 芽丛生长慢
2．1．3激素对芽增殖的影响 将初代培养基中诱导
产生的2．0～4．0 cm小芽分别移入表 2所列的培养
基中，2O d后在芽的基部出现新生小芽，逐渐形成
芽丛。60 d后统计实验结果(表 2)。
表 2 激素对芽增殖的影响
Table 2 Effects of different phytohormone
compositions on propagation of buds
从初代可知，BA浓度过高将抑制芽的正常生
一 1 5 O 1 2 5 1
O O 1 O O O O
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1期 丁 兰等：马可波罗百合的组织培养和离体快繁 39
长，在继代培养中，我们选择了较低的浓度配比。表
2的实验结果表明，在相同浓度的条件下 IAA 比
NAA更利于芽的增殖，较高浓度的 NAA利于根的
生长。1、2、6号培养基是较好的芽增殖培养基。观
察表明，随 BA浓度的增高，丛芽矮化明显。BA浓
度保持不变时，NAA浓度增高，芽的增殖率降低，
当NAA的相对浓度高于 BA浓度时，丛芽基部出
现了异常粗壮的根，当BA浓度达到 1．0或高于1．0
时，丛芽基部出现大量愈伤组织 。由此可知，1、2和
6号培养基是较好的丛芽增殖培养基。
另外，观察发现低于 2．0 em或高于 5．0 em的
芽移入继代培养基中，生长迟缓，不产生新芽，而芽
高为2．0～4 em的芽生长旺盛，产生丛芽数多，为较
好的继代培养材料。
2。1。4生根培养 将增殖培养基中已长至 5 em以
上的丛芽切离成单芽后移入表 3所列培养基中，15
d后观察记录小芽的生根情况，新增小芽平均数为
60 d后统计结果(表 3)。
表 3 激素对芽丛生根的影响
Table 3 Effect of different phytohormone composition on rooting of shoots
100
100
1OO
100
1OO
1O0
12 3．0
9．3 2．3
8．O 1．O
8．O 1．O
3．0 0
2．O O
实验结果表明，1～6号培养基均对根有较好的
诱导率(100 )。其中以1～4号培养基生根效果最
好，其生根平均数达到 8～12条，尤其是 1号和 2
号，在生根培养的同时，生根苗基部可新增出带根的
小鳞茎，平均芽数可达 3．0，可一次性成苗。简化培
养步骤，降低培养成本。
另外，当KT浓度为0．2 mg／L时，百合小植株
生长良好，形态与自然生长态一致，但随 KT浓度逐
渐增高，出现植株矮化及鳞片叶化的现旁。因而 1、
2号为较理想的增殖及生根培养基，尽管增殖率较
低(3倍)，但一次成苗既缩短了培养时间，又简化了
培养程序、降低了成本。
2。2茎尖培养
茎尖是进行脱毒的最佳首选材料。在解剖镜下
分离出带 2个叶原基的茎尖，接种于表 1所列的培
养基中，每瓶一个茎尖，8周后统计实验结果。
实验表明，仅在 MS+2．0 mg／L BA+0．05
mg／L NAA培养基上的茎尖有丛芽形成，诱导率
100％，芽丛平均数为 9．5个。1～3号培养基上的
茎尖存活4周后死亡，4～8号培养基中的茎尖只有
膨大无分化。可见较高浓度的细胞分裂素利于茎尖
的分化诱导及丛芽的形成。
将茎尖产生的丛芽分离，分别移入表 2的 1～2
号培养基中：MS+0．2 mg／L BA+0．1 mg／L NAA
和 MS+0．2 mg／L BA+0．1 mg／L IAA，增殖效果
理想。
将增殖培养基中已长至 5 em以上的丛芽切离
后移入表 3的 1～2号培养基 中：MS4-0。2 mg／L
KT4-0．05 mg／L NAA 和 MS4-0．2 mg／L KT 4-
0．5 mg／L NAA，生根效果同样好。
2．3茎段培养
将切成 1 em的带芽茎段接种于表 1所列的培
养基中，仅 MS+0。8 mg／L BA4-0．1 mg／L NAA
培养基上的茎段诱导成功，其它培养基中的茎段褐
化严重。6周后统计结果：诱导率为 66．7 ，每个茎
段可诱导出5个以上的芽；诱导出的芽在 MS+0．2
mg／L BA+0．1 mg／L IAA培养基中增殖后，分离
并移入培养基 MS+0．2 mg／I，KT4-0．05 mg／L
NAA和MS4-0。2 mg／L KT4-0．5 mg／L NAA中
进行生根，其结果同茎尖培养。
2．4试管苗移栽
在生根培养基中，待根长至2～3 em时，开瓶炼
苗 3天后移入腐殖质土和珍珠岩之比为 1：1的土
中，保持 75 的湿度，5O 的自然光，移栽成活率达
100 。
3 小 结
本实验以马可波罗百合的鳞茎、茎尖和茎段为
(下转第 80页 Continue on page 80)
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80 广 西 植 物 24卷
Kong XS(孔祥生)，Guo XP(郭秀璞)。Zhang MX(张妙霞)．
1999．Effect of cadmium stress on seedling growth and
physiology chemistry of maize(镉 胁迫 对玉 米幼 苗生 长及
生理生化的影响)EJ]．华中农业大学学报，18(2)：l11—
113．
Lin DH(刘东华)，Jiang WS(蒋梧生)．1995．Toxic effects of
aluminium on plants(铝对植物的毒害)EJ-I．Chinese Bulle—
tin of Botany(植物学通报)，12(1)：24—32．
Luo GH(罗广华)，Wang AG(王 爱国)，Shao CB(邵从 本)，
et a1． 1989． The damage tO rice seedling under high con—
centration oxygen and protective enzymes of active oxygen
(高浓度氧对水稻幼苗的伤害与活性氧的防御酶)EJ-I．Ac—
ta Botanica Austro Sinica(中国科学院华南植物研究所集
刊)。4：169—176．
Peng JG(彭嘉桂)，Chen CR(陈成榕)，Lu HD(卢 和顶)．
1995．Preliminary studies on Al stress of maize(玉米铝胁
迫研究初报)[JJ．Tropical and Subtropical Soil Science
(热带亚热带土壤科学 )，4(2)：97—101．
Qin RJ(秦瑞君)，Chen FX(陈福兴)．1999．The aluminium
toxicity of some crop seedlings in red soil of southern hunan
(湘南红壤作物苗期铝中毒的研究)EJ-1．Plant Nutrition
and Fertilizer Science(植物营养与肥料学报 )，5(1)：50—
55．
Van Assche F，Clijsters H．1990．Effects of metal on an—
zyme activity in plantsVJ]．Plant Cell Environ，13：1 95—
206．
Xu QS(徐勤松)，Shi GX(施 国新)，Du KH(杜开和)．2002．
Effects of Cr(VI)on physiological and ultrastructural chan—
ges in leaves of otelia alismoides(L．)pers(六价铬污染对
水车前叶片生理生化及细胞超微结构的影响)EJ]．Guiha一
(广西植物 )，22(1)：92—96．
Yang Q(杨 庆)，Jin HB(金华斌)．2000．The effect of alu—
minium stress on N．P．and Ca absorption of peanut varie—
ties(铝胁 迫对 花生吸收氮、磷、钙 的影响)EJ]．Chinese
Journal of Oil Crop Sciences(中国油料 作物学报)。22
(2)：68— 73．
(上接第 39页 Continue from page 39)
材料，较成功的建立了快速的无性繁殖系。在初代
和继代培养中，使用较高 BA浓度，尽管有较高的小
芽增殖率，但小植株矮化明显，表现为植株矮胖，与
自然百合生长状态相比，鳞片叶化，生长受到明显的
抑制，有时芽基部还产生大量的愈伤组织。另外，
BA的诱导活性明显高于KT，但在含有 BA的培养
基中，几乎所有的小植株的鳞片叶化，而 KT培养基
中的小植株生长健壮，鳞茎呈紫色与 自然生长的植
株一致，尽管增殖率较低，但能一次成苗，简化了培
养程序，降低了成本，而且可保持较低的变异率，对
品种优良性状的保持有利。
有关百合组织培养的文章很多，但以东方百合
系为材料的组织培养尚未见报道，不同于其它百合
组织培养，在实验中，我们分别选择了鳞片、茎尖及
茎段为初代培养材料，筛选了继代增殖培养基，建立
了2种简单有效的无性繁殖途径：
茎段1
鳞片} 芽或芽丛 芽丛 完整植株
茎尖J
鳞片 再生植株 丛生小苗
参考文献：
丁 兰，刘国安，杨 红．2002．新铁炮百合组织培养和快
速繁殖研究 EJ]．西北师范大学学报，37(1)：8o一82．
王红霞，等．2000．通江百合的组织培养)EJ]．植物生理学
通讯 ，36 (2)：132．
陈小兰，等．2000．金百合的离体快速繁殖 EJ]．离体快速
繁殖 ，36 (4)：334．
杨承德，等．1988．百合鳞茎不同部位的小鳞茎分化与激素
调节研究 EJ-1．兰州大学学报，28(3)：95—99．
Gu ZP (谷祝 平)，Zheng GC (郑 国 昌)．1982．Studies on
induction of pollen plantlets from the anther coltures of lily
(从百合花药诱导花粉植株的研究) EJ]．Acta Botanica
Sinica (植物学报 )，24：28—32．
Gu ZP (谷 祝平)，Zheng GC (郑 国昌)．1983．In vitro in—
duction of haploid plantlets from unpolinated young ovaries
of lily and its exbryological observations(百合未授粉子房
的组织培养及胚胎学观察) EJ]．Acta Botanica Sinica
(植物学 报)，25：24—30．
维普资讯 http://www.cqvip.com