全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 2l(3)：273— 276 2001年 8胃
提高沙田柚茎尖嫁接成活率的研究
董高峰，李耿光，张兰英，黄 涛
(中国科学院华南植物研究所，广东广州 510650)
摘 要：研究了可以影响沙田柚茎尖嫁接成活率的部分因索．结果表明：当抄田柚接穗选择带 4个叶原基的茎
央、枳壳砧术选择黑暗培养 14 d的实生苗或培养基中蔗糖浓度选择7．5 时各自的嫁接成恬宰较高．若在茎尖
嫁接切口外缠绕 parafi|m胶可令成活率明显增加。若在培养基中加^GA，、6-BA和 1BA则明显抑制嫁接成恬
率。GA 、6-BA和IBA处理接穗和砧术均可提高嫁接成活率，其中以10 mg／I GA，处理效果最好，嫁接成恬率可
达45 ；6-BA和1BA处理虽然也可提高嫁接成活率．但是同时又增加了接穗的脱落死亡率。
关键词：沙田柚；茎尖嫁接；激索；成活率
中圈分类号：Q945 文献标识码 ；A 文章编号 ：1000-3142(2001)03—0273·04
Studies on improving the successful frequency of
shoot—tip grafting of Shatian Pomel o
DONG Gao—feng，LI Geng—guang，ZHANG Lan—ying，HUANG Tao
(Sotth China Insti~uce of B~any，Aca~ a Sinlca，GuanKzhou 510650，Chins)
Abstract：Some factors can affect the successful frequencies of shoot—tip gra[ting of Shatian Pometo were studied．It
is suggested that the more successful frequency of grafting was respectlve|y obtained by using the merlstems plus 4
Leaf primordia as scions．using 2-week—old dark grown seedlings as rotstocks or choosing liquid culture media with
7．5 sugar concentration．The successful frequency of grafting could be hc~ased obviously if we twisted the
grafting—incisions with parafitm．It was obviously restrained if we put GA3，6-BA Or IBA into liquid culture media．
Those treatments with GA，，6-BA and 1BA 0n scions and rootstocks all increased the successful frequency of graft·
ing．The efect of 10 mg／1 GA】was the best，and its successful frequency of grafting reached 45％．6-BA and 1BA
COuld also advanced the succesful frequency of grafting．but increaseed the shedding rate inducing death at the
sar眦 time．
Key words：Citrus grandisOsheck cv．ShatianyouI shoot—t grahing hormone；successful frequency
柑桔病原体病害在全世界 4O多个柑桔生产国普
遍都有发生，它们的病原体(如病毒、类病毒和类菌原
体)通常存在于长期进行无性繁殖的老系品种中，能
使植株长势减弱、产量和品质降低，严重威胁着柑桔
生产。目前最常见的培育柑桔无病原体苗的方法主要
包括热处理法、珠心胚培养、茎尖培养及茎尖嫁接等
4种 热处理法虽然能有效地去除大多数病原体．但
对于那些基本的病毒如裂皮病毒、顽固病毒的脱除却
非常困难。 。珠心胚培养已被证明会产生童期性状．
且多变异 一。茎尖培养则存在着增殖和生根极其困
收藕13期 {2000—07—17
作者筒介 董高峰(1971．)，男 ．湖北荆门^，博士生，主要从事植物细胞工程研究工作 a
基金硪目；国家自髂科学基金(39870539)；广东省自然科学基叠(930473)；广寐省百项刨新工程(99)资助项目a
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3期 董高峰等：提高沙田柚茎尖嫁接成活率的研究 274
难的问题“
茎尖微嫁接技术 自Navarro等首次应用于柑桔
脱毒后，在近2O a内得到了迅速的发展。由于它既不
会产生变异，也不带童期性状，如结合适当的热处理
又很容易脱除绝大多数病原体，因此已成为最有效的
获得柑桔无病原体苗的途径“ 。沙田柚作为目前柑
桔发展最为迅速的一个品种，正越来越多地受到如黄
龙病等病原体病害的侵袭，快速培育沙田柚无病原体
苗已成为生产中极为迫切的问题。本文以广东梅州成
年沙田柚树为材料，初步研究了提高沙田柚茎尖嫁接
成活率的一些因素，以期为今后大规模生产沙田柚无
病原体苗提供一些有益的借鉴。
1 材料与方法
1．1材料
供试接穗品种为成年沙 田柚树(Citrus grandis
Osbeck cv．Shatianyou)，栗自广东梅州；砧术为枳壳
(PoncirustrifotlataRaf．)，采 自广西桂林。实验时间为
1999年 9～10月。
1．2方法
1．2．1材料准备 从成熟枳壳果实中取出种子洗净，
用双层棉纱包住置于 55～58。C热水中处理 50 min，
0．1 HgC1：消毒 10～1 5 mln，无菌水冲洗 3～4次，
剥去内外种皮，然后接种于 1／2 MS培养基上进行黑
暗培养，温度保持在于25～28。c。采摘约1～2 cm健
康的成年沙 田柚嫩芽，剥去较大叶片，切取 0．5～1
cm茎尖，75 酒精浸泡约 30 s，0．1 HgC1 消毒 6～
』min，无菌水冲洗 3～4次后用作接穗。
1．2．2嫁接方法 基本的嫁接方法采用李耿光等“
的方法，略作修改。将接穗在显微镜剥至带2～3个叶
原基的茎尖(约 0．14～0．18 ram)，将其置于去顶的枳
壳实生苗上，再整株移人带滤纸桥的液体培养基上进
行培养，基本培养基采用 MS(蔗糖浓度 7．5 ，pH
5．8)。培养温度保持在于 26士2℃，光照为 2 000 ix，
每天 14～1 6 h。培养 1周后，除去砧木上长出的不定
芽以减少对接穗萌发的影响。待接穗长出2～3片叶
后将植株转人更大的试管继续培养，同时蔗糖浓度减
至 2 ，此时计算成活的嫁接苗(1个月左右)。
1．2．3外源激素处理 不 同浓度 的 GA 、6-BA及
IBA用 FA0．45 m微孔滤膜过滤消毒后待用。将已
准备好的接穗及砧木切 口部分 9置于上述溶液中程
泡约3O s后进行嫁接，嫁接方式采用传统的倒“T”字
形 。
1．2．4嫁接苗的移栽 带3～4片伸展叶片的嫁接苗
从培养室中移出，在室内自然光下进一步培养 1周左
右，然后取出用蒸馏承洗净，再置于 5 mg／I IBA溶
液中浸泡 24 h后单株移人营养钵中。营养土采用
5O 塘泥 ：50 黄泥混合，嫁接苗在外罩遮阴网的网
室中正常生长，其移栽成活率高达 90 以上。
2 实验结果
2．1砧木的不同苗龄对沙 田柚茎尖嫁接成活率的影
响
黑暗培养的枳壳实生苗分成 1O、12、14、2O、25 d
五种，接穗大小为带 2个叶原基的茎尖，采用传统的
倒“T 字形嫁接。由表 1可知：砧木的苗龄以 14 d时
沙田柚茎尖成活率最高，此后随着苗龄的增加，嫁接
成活率逐渐下降。苗龄较小的幼苗，其嫁接成活率也
较低。尽管所采用的砧木及接穗品种有所不同，但是
我们的结果与Navaro等 及李耿光等” 是基本一致
的 。
2．2接穗大小对沙田柚茎尖嫁接成活率的影响
茎尖嫁接时所采用的接穗大小直接影响到嫁接
成活率，以前一般认为当采用较大的接穗时成活率较
高 我们的结果表明：带 4个叶原基的茎尖嫁接成活
率最高，为 28．6 ，此后若接穗过大也会降低嫁接成
活率。考虑到接穗太大会影响到嫁接苗的脱毒效果，
因此我们认为接穗大小仍以带 2～3个叶原基的茎尖
为最佳。
2．3不同嫁接方式对沙田柚茎尖嫁接成活率的影响
由表 1可知，不同的嫁接方式对茎尖嫁接成活率
也具有一定的影响。常规的倒“T”字形嫁接法与后来
改进的中间三角形嫁接法并没有太大的区别，它们的
嫁接成活率均为 2O ，这点与蒋元晖的结果不太一
致 。但若在嫁接后采用 parafilm胶缠绕固定切口
处，可显著提高嫁接成活率(达到 35 以上)，而且这
种影响与切口的形状关系并不太大。
2．4不同培养基对沙田柚茎尖嫁接成活率的影响
由表 1可知，液体培养基中蔗糖浓度对茎尖嫁接
成活率的影响非常显著。当蔗糖浓度为 7．5 时沙田
柚苗的嫁接成活率最高，达 1 9 。当蔗糖浓度低于
7．5 时，幼苗则极难成活，我们还观察到既使在嫁接
初期接穗萌发一段时间(1周左右)，但因后期营养跟
不上也会导致整株苗 干枯死亡；若蔗糖浓度升至
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1O 时也会降低嫁接成活率，我们分析可能是由于蔗
糖浓度过高影响到植株对其它养分的吸收。著在培养
基中分别加入GA 、6-BA及IBA，都会极大地抑制茎
尖嫁接的成活率 三者都是浓度越高，其接穗越易干
枯死亡，其中GA 的抑制作用最为明显，IBA相对较
弱。我们还发现尽管嫁接时在培养基中加入 GA，会
袁 1 不同因素对沙田抽茎尖嫁接成活辜的影响
Table l Influence of different factors on the successful~equency of shoot-tip grafting of
Citrus grandis Osbeck CV．Shatianyou
除不同的嫁接切口方式趾理外，其余趾理均采用倒 T 字形嫁接。Almosttreatmentswere adoptedinverted-T graftingmode exceptthetr∞t—
n％ent with different grafting-incision mode．
袁 2 不同激素处理对沙田抽茎尖嫁接成活辜的影响
Table 2 Influence of treatments with hormone on the succe~ful frequency of shoot—tip grafting
of Citrus grand~Osheck CV Shatimayou
采用传统的倒“T 字形嫁接．对照为无苗水处理。Adoptingtraditionalinverted-T graftingmode r the contr~wastr~ted with steriLewa r
阻碍接穗与砧木的愈合，但是在接穗已长出2～3片
叶后再加入 0。1 mg／I GA；会促进嫁接苗叶片的转
绿和伸展
2．5不同激素处理对沙田柚茎尖嫁接成活率的影响
由表 2可知，适当的外源激素处理可以影响茎尖
嫁接的成活率。一定浓度的GA。浸泡接穗及砧术，可
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3期 董高峰等：提高沙田柚茎尖嫁接成活率的研究 276
令嫁接成活率明显提高，其中以 10 mg／L GA，的处
理效果最佳，嫁接成活率为 45 ，比对照上升 26 ；
若 GA。的浓度过高或过低，则对嫁接成活率的促进
作用则相应降低。0．5 mg／I，及l mg／L IBA处理对最
终的嫁接成活率影响较小，仅从对照的 I9 上升到
2O ，主要是由于IBA处理后极易导致萌发的接穗
脱落枯死，从而在很大程度上影响了后期成活率，而
且随着 IBA浓度的提高，嫁接苗的脱落率急剧上升。
6-BA处理也能提高嫁接苗 的成活率，在 5、2及 l
mg／l，三种浓度中以 l mg／I 效果最佳，其成活率达
33．3 。与 IBA一样，6-BA处理也极易导致嫁接苗
后期接穗产生离层脱落，且随着 6-BA浓度的提高，
嫁接苗的脱落率也明显增加。在 GA 、IBA和 6-BA
这 3种激素中，只有GA 处理在提高嫁接成活率的
同时又可保持着嫁接苗的正常生长。
3 讨 论
我们采用传统的倒“T”字形茎尖嫁接方式，沙田
柚嫁接成活频率一般不超过 2O ，与其它柑桔品种
相比存在着较大的差距。张秋胜等以枳壳为砧木，碰
柑为试材，其嫁接成活频率可达 7O 。 。蒋元晖以枳
橙为砧木，蕉柑和植柑为试材，其嫁接成活频率分别
可达 33．3 和 42．9 ，若采用中间三角形切口方式，
其成活频率还可提高至 57．1 和 45．5 。我们认
为，不同的砧木以及不同的柑桔品种都可能导致嫁接
成活率产生差异。李耿光等曾做过对比，将红江橙嫁
接到枳壳、福桔、酸桔及柠檬上，嫁接成 活率可在
lO ～76．5 之间波动“ 。我们还发现倒“T”字形切
口与中间三角形切口对沙田柚嫁接成活频率的影响
并没有明显差异，但若在切口外缠绕 parafilm胶则可
明显提高成活频率，我们分析外缠 parafilm胶可 以有
效地减少接穗的蒸发失水，从而可以促进接穗与砧木
的愈合，提高成活频率。
自从 Navarro等“ 首次应用茎尖嫁接来获得脱
毒柑桔苗以来，国内外都已做了大量的工作，但主要
还是集中在改进茎尖嫁接的一些具体操作方式上，如
改变嫁接切口、缩短嫁接步骤等。我们采用外源激索
处理沙田柚茎尖及砧术嫁接部位则效果比较明显，操
作也更为容易。适当浓度的 GA：、IBA及 6-BA处理
均可提高茎尖嫁接成活频率，但 IBA和 6-BA处理在
提高成活频率的同时也增加了脱落率，如何解决这两
者的矛盾是今后进一步提高茎尖嫁接成活频率的关
键 另外，通过浸泡处理嫁接苗究竟能吸收多少量的
外源激素以及其体内的激素水平与嫁接成活频率的
相互关系还有待于进一步研究。
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