全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 21(3)：281— 283 2001年 8 月
AFLP在芒果品种鉴定中的应用
房经贵，乔玉山，章 镇
(南京农业大学园艺学院，江苏南京 210095)
摘 要：利用 AFI P分子标记技术对 l6个芒果(Mangifera indica L．)品种以及 7个芒果砧术材料进行了初步
研究，6对AFI P选择性引物共产生 204条清晰谱带。同时利用品种闻共有谱带率(Band—sharing)对某些品种问
的遗传关系进行了分析。16个栽培品种间的平均共有谱带率为 83 ，变异幅度为7O ～94 ．7个砧术间的平
均共有谱带率则为 8O ，变异幅度为53 ～96 。
关键词：芒果 ；AFI P；品种鉴定
中圈分类号 ：Q75 文献标识码：A 文章编号：i000 3142(2001)03 0281—03
Appl ication of AFLP in the cul tivar
identification of mango
FANG Jing—gui，QIAO Yu—shan，ZHANG Zhen
(Colege of Horticulture，Nan加g Agricultwrat University，Nanjing 210095t China)
Abstract：AFI P was first used to StUdy 16 mango cuhivars and 7 mango rootstocks，and 6 AFLP selective primer
pairs devoted 204 clear bands．The genetic relationships of some mango cuitlvar pairs an d those of$ome mango root—
stock pairs were studied by tha[r Band Sharing．The Band Sharing average of the mango cultivars was 83 ，and
their variant rangewas 70 ～ 94 ．Forthe rootstocks，theBand Sharing average andthe variant rangewere 80
and 53 ～ 96 ，respectively．
Key words：Mango；AFI P；cuhivar identification
尽管形态性状标记与同工酶等均可用于果树的
品种鉴定与标记辅助选择等“ ，然而这些标记的不
足(如标记数量有限、多态性水平低等)，往往限制了
它们的应用。而正是由于DNA分子标记在这些方面
所表现出的优势 ，使其应用为果树遗传育种学开辟
了崭新的研究和应用领域。它有助于直接从分子水平
上了解果树品种间的差异，也使育种过程更直观，目
的性更强，对于选择合适的杂交组合以保持或获得更
好的重组优良品种显得极为有效与准确。
芒果是热带重要果树树种之一，为进一步开展芒
收翦 日期1 2000—05—30
作者简介：房经贵(1968一)，博士．副教授 ，主要从事果树学研究。
基金项目；国家留学基叠资助项目(G200002)
果分子遗传学的研究，加快 DNA分子标记技术在芒
果育种实践中的利用，达到育种水平的提高，人们已
成功地将 RAPD(随机扩增多态 DNA)、SSR(简单序
列重复)技术应用于芒果的遗传关系、品种鉴定等方
面的研究 ，这不仅提供了进一步利用某些芒果品
种材料的理论依据，而且建立了新的技术系统及获得
了应用这些技术的经验。尽管如此，利用 AFLP(扩增
片段长度多态性)技术对芒果的研究报道尚不多。由
于AFI P技术具有可同时对多位点进行检测、重复性
好、信息量大、符合孟德尔遗传的特点，因此，开展
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AFI P技术在芒果领域的应用，对于芒果分子遗传学
的深入研究将具有积极的推动作用。根据杂种优势显
性假说和超显性假说的基本点是参与杂交的双亲具
备一定的遗传差异的理论 ，结合实际研究工作的需
要，我们首次利用AFI P技术有针对性地对部分芒果
栽培品种以及砧木材料彼此间的遗传关系进行了尝
试性研究，以期为芒果遗传关系、品种鉴定提供更多
的方法，同时也为进一步构建芒果品种的杂种优势群
提供一定的理论准备。
l 材料与方法
1．1材料
研究中所用的 l6个芒果品种为：Austin、Caraba。
Haden lrvin，Edward， Keltt， Langra，Kensington，
Mabruka，Manzanilo，Maya，Navmi，Palmer，Tango，
Shely、Tommy；7个砧木材料为：Gumera 1、Colombo
Kidney、Gumera 3、Gumera 4、Sabre、7／32、1 3／1。取其
嫩叶供提取叶片基因组DNA所用。
1．2方法
1．2，1 DNA提取 参照Muray和Thompson方法。 。
1．2．2 AFI P技术 参照Vos和Hogers法“ 。具体技
术路线、所用 的接头、引物等如同以前 的研究报
道。 。本实验中共随机选用了 6对 AFI P选择性引
物：E—AAG／M—CTG、E—AGG／M—CAT、E—AAc／M—
CTG、E—AAG／M—CAT、E—AAC／M—CTA、E—Aco／M—
CAC，其中E、M 分别表示 EcoRI与Msel引物的共同
序列；E、M 后的3个碱基为选择性碱基。
1．2．3资料分析 随机选取了 1 4对芒果品种组合和
6对砧木组合的 AFI P标记资料进行分析。在统计标
记资料时，为确保准确性与可靠性，只计清晰谱带。共
有谱带率(BS—Band sharing)的计算公式 为：
Bs
Ⅳ 表示 A与 B两品种的共同谱带数量， 、M
则分别表示 A与B两品种各自的总谱带数。
2 结果与分析
2．1 AFLP技术的效果
本实验选用 6对 AFI P选择性 l物对 16个芒果
品种及 7个砧木材料进行的 AFI P分析，都得到了清
晰的指纹，并且所有品种表现出多态性，这可从引物
组合(E—AAG／M—CAT)的指纹(图 1)情况得到反映，
说明了AFI P技术在芒果品种鉴定中的可行性。6对
引物共获得了 204条清晰谱带。
图 1 十六个芒果品种的 AFI P指纹图谱
Fig．1 The AFLP fingerprinting 0f 16 mango cultivars
2．2AFLP指纹的分析
2．2．1十六个芒果品种的分析 根据 6对 引物的指
纹情况以及研究所需，在确保差异最大的2个品种
(Mubruka，Edward)和差异最小 的2个品种(Maya，
Kelt)被选择的前提下，又随机选择了 1 2个品种组合
进行比较。14对芒果品种间 BS值大小的分析结果
(表 1)表明，这些芒果品种间 BS大小的变化范围为
7O ～94 ，平均为 83％。其中，Mabruka与 Edward
的BS为 70 ；Maya与 Keit间的BS则为 94 。根
据以往的报道，应该说 BS越大则其遗传关系越近，
而BS越小则遗传关系越远。遗传差异大的品种更适
于作为育种亲本材料。该实验结果证明了AF[ P筛选
芒果亲本的有效性。
2．2．2砧木材料的分析 根据实际研究的需要，从 7
个芒果砧木材料中选择了 6对进行 BS值大小的分
析，其结果(表 2)：BS的变化范围为 53 ～96 ，平
均值为 8o 。其 中Sabre与 7／32的 BS值最低，为
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3期 房经贵等：AFI P在芒果品种鉴定中的应用 283
j3 ，而13／1与Sabre的BS值最高，为96 与前面
1 6个芒果品种的分析结果相比，芒果砧木材料 BS的
变化范围较大，BS平均值较小，表明芒果砧木材料的
亲缘关系偏远，进行遗传改良的潜力更大
表 1 14对芒果品种(共 16个品种)间的共有谱带率
Table 1 Band—Sharing values of 14 pairs of
mango cultivars(16 mango cultivars)
品种组台
Cuhivar pMrs
A B
总带
tge o
数
f bAvera ands l二二 ：
—__—了 bands
共有谱
带率
Band
sha~ng
表 2 六对芒果砧术(7种砧木)问的共有谮带率
Table 2 Band—Sharing values among six pairs of
mango rootstocks(7 various rootstocks)
3 讨 论
由于受方法本身某些因素、技术条件、环境等的
影响“ ，形态学、同工酶技术、RAPD标记对芒果品种
进行鉴定的结果尚存在不少的歧义问题，从而影响到
对芒果材料的进一步利用与研究 AFI P技术的应用
有望能解决芒果品种鉴定中某些遗留的问题。本宴验
的成功尝试为此提供了可靠的技术方法
杂种优势与育种亲本间的遗传距离有关，遗传距
离越大，则杂种优势的效果越明显 迄今，已有很多利
用 DNA标记来辅助亲本选择以提高后代杂种优势
的报道 ，如 Dunnington等。 和HilM 等“ 利用 DNA
指纹资料计算个体或 品种间的 BS，以此估 计它们之
间的遗传距离，作为育种亲本选择的参考。本研究的
初步分析结果表明，不同芒果栽培品种间及砧木间
AFI P指纹的 BS值存在明显差异，因此，有望借此分
析路线和分析资料进行芒果杂交优势群的构建以及
辅助杂交亲本的选择。
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(下转第 286页 Continue on page 286)
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286 广 西 植 物 21卷
2．3纯度鉴定
z．3．1紫外光谱法 辣椒索样品和标准品的紫外光
谱特征及文献值。 见表 3，结果和标准品及文献值基
本一致。
10 0 20 0 30．0
T[ME《 ，瑚intlte)
图 2 辣椒素的 HPI C图谱
Fig．2 HPLC of capsaicin
f从左至右 3十蜂分别为辟二蠹辣|茸素，薄糍亲和=氢擗般亲)
peaks(1eft to right)l r,ordih~xlroeapeaiein．ca~aiein and dIhydr0cnp lcin
2．3．2 HPI C法 经柱层析和结晶纯化的辣椒索样
(上接第 283页 Continue from page 283)
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