全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 23(5)：450— 452 2003年 9月
广西蜘蛛抱蛋中一种甾体皂甙定性定量研究
王恒 山1，谭 明雄2，龚崇松1，
(1．广西师范大学化学化工系 ，， 西桂林 511004；2
市药品检验所，广西桂林54102；4． 籍
陈伟胜1，黎 霜3，李光 照
广西玉林师院化生系 ，广西玉林 537000；3．桂林
广西植物研究所 ，广西桂林 541006)
摘 要 ：为了进 一步开发和利用广西 甾体药源植物奠定基础 ，对广西 蜘蛛抱 蛋(Aspidistra retusa K．Y．Lang
et．S．Z．Huang)块 茎甾体皂 甙化合物进行 了提取分离 。在分离得 化合物 中含量最 高 的甾体皂甙 化合 物 4经
鉴定为 ：偏诺 甾体 四糖 皂 甙 ，即 pennogenin一3一口一()_口一【)g1ucopyranosy1[一a—L—rhamno—pyranosyl(1—2)]一a—L—rh—
amno—pyanosyl(1—4)一a—L—rhamnopyranosy1(1—4)，该化合物 为首次从蜘蛛 抱蛋属植 物 中分离得 到。经 HPLC
测定其在广西蜘蛛抱蛋 中的含量 为 1．595 。
关键词 ：广西蜘蛛抱蛋 ；甾体皂甙结构 ；含量
中图分类号 ：Q946 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3142(2003)05—0450—03
Quality and quantity determination of one
steroidal sapogenin of Aspidistra retuda
W ANG Heng—shan ，TAN M ing—xiong ，GONG Chong—song ，
CHEN W ei—sheng ，LI Shuang0，LI Guang—zhao
(1．Department of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi Nomal U i^vcrIity，Guilin 541004，China；
2．Department of Chemistry and Biology，Yulin Normal Colege，Yulin 537000-China；3．The Inspector of
Medicine Department of Guilin，Guilin 541002，China；4．Guangxi n~stitu*e of Botany，Guangxi
Zhuangzu Autonomous Region and Academia Sinica，Guilin 541006，China )
Abstract：In order to establ ish the basis of the exploration of the pharamaceutic plants in Guangxi，we isolated
the rhizomes of Aspidistra retusa K．Y．Lang et．S．Z．Huang． Among isolated compounds，the chief one of
them was identified as pennogenin一3一B—o-t3一D-glucopyranosyl[一a—L—rhamnopyranosyl(1一z)3一a—L—rhamnopyano—
syl(卜4)-a—L—rhamnopyranosyl(1-4)． It had been isolated for the frist tim e from Aspidistra． Analysed by
HPLC，its content was 1．595 in Aspidistra retusa．
Key words：Aspidistra retusa；steroid sapogenin；content
蜘蛛抱 蛋 (Aspidistra elatior)亦 称 蛇 退 ，系 百
合科(Liliaceae)蜘蛛抱蛋属植物，主要分布于我国、
Ft本等地。其根茎人药 ，具有止血、镇痛 、消炎和滋
阳补肾等功效，民间广泛用于治疗跌打损伤(陈昌祥
等，1994；杨庆雄等，2000)。该属植物富含甾体化合
物 ，许多甾体化合物都具有药理活性 。自 1982年，
日本学者对该属化学成分做了研究(Hiraj等 ，l982；
Mamoru等，1996)，在 国内，对本种植物也多有研
究，分离得到若干甾体皂甙化合物，已报道的产于我
国的蜘蛛抱蛋其 主要成 分均 为 蜘蛛抱 蛋甙 (陈昌祥
等 ，1994；杨 庆 雄 等，2000；陈 梦 菁，1994，l995，
1999)。作 者 从 广 西 蜘 蛛 抱 蛋 (Aspidistra retU5n
K．Y．Lang et．S．Z．Huang)块 茎 中 ，经 乙醇提取 和
硅胶柱层析分离得 8个甾体皂甙化合物，并用现代
收稿日期：2002—08—16； 修订 日期 ：2002—12-20
基金项 目：广西区自然基金 (桂科 白 0146008)；广西师范大学 自然科学基金资助项 目。
作者简 介 ：王恒 山(1 965一)，男 ，浙江 温州 人 ，博士 ，副研究 员 。
维普资讯 http://www.cqvip.com
5期 王恒 山等 ：广 西蜘蛛抱蛋 中一种 甾体皂甙定性 定量研究 451
物理 光 谱 技 术 (”CNMR、 HNMR及 FAB—MS)对
得率最高的甾体皂甙化合物 4的结构作 了鉴定 ，并
用 HPLC对 其含 量进 行 了测 定 。本 文 报 道对 该 化
合 物的研究 结果 。
1 仪器 和试剂
1．1仪 器
核磁共振谱 (氢谱 、碳谱及 DEPT谱 )用 Bruker
AM一400型 核磁 共振 谱 仪 测定 ，TMS为 内标 ；质 谱
用 VG Auto spec型质谱仪测定；LC-IOATVP高效
液相 色谱仪 (日本 岛津 )及 色谱 工 作站 (日本 岛津 )；
亚沸水 器(江苏 宜兴勤华玻璃 仪器厂)；BS110S电子
天 平 (北 京 Sartorius)；CG16一w 高 速 微 量 离 心 机
(北京 医用离 心 机厂 )；lO L Microliter#701型进
样 ；ZF-I型三用 紫外分 析仪 (上海顾 村 电光仪器
厂)；RE一52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
1．2样品材料 、试剂
蜘蛛 抱蛋植 物样 品 于 2001年 7月采于 广西桂
林 ，原植 物 由广西植物研 究所研究员李 光照鉴定 ；提
取试剂为 95 乙醇 ；层析用硅胶为青岛海洋化工出
品；其他试剂为分析纯 ；偏诺甾体四糖皂甙对照品通
过以下方法分离和波谱分析鉴定 ，由高效液相法测
定其纯度高于 99 ；水(亚沸水)；甲醇为色谱纯(中
国医药 (集 团)上海 化学试剂公 司产 品)；其他试剂为
分析纯 。
2 提取分 离
蜘蛛 抱 蛋块 茎 4．5 kg，切碎 ，95％ 乙醇 回流 4
次，每次 1．5 h。合并提取液，减压 回收乙醇。浓缩
液加水稀释，用乙醚萃取 3次后 ，将水溶液部分，再
用正丁醇萃取 3次．合并正丁醇部分，减压回收正丁
醇，得正丁醇部分(总甙)26．5 g。将总甙溶解在氯
仿 中 ，经硅胶柱层析 ，以 CHC1 一MeOH(20：1～5：
1)梯度洗脱 ，分段收集 ，用薄层层析法鉴定每份洗脱
液，将含有同一组分 的部分合并 ，分离得 8个部位，
浓缩 ，冷却后析出固体 ，乙醇重结晶后得到 8个化合
物 ：化合物 1，0．5 g；化合 物 2，1．7 g；化 合 物 3，1．2
g；化合物 4，7．1 g；化合物 5，2．0 g；化合物 6，1．4 g；
化合物 7，0．6 g；化合物 8，1．5 g。
3 结构鉴定
甾体皂甙化合物 4为白色针状晶体 ，其结构鉴
定如下 ：FAB—MS m／z：1030(M 1O0)，884FM一(a—
L—Rha)] (29)，737[M一2×(a—L—Rha)] (16)，451
[C： H O +Na] (1)。数据表明该化合物为甾体
四糖皂甙 ，其 中有 三个 鼠李 糖 (质量数 差 146)和 一
个葡萄糖(质量数差 164)；而且 由各 个碎 片峰可知 ：
两个 鼠李糖相连 在甙 的糖链 末 端 ，另一 个 鼠李糖与
葡 萄 糖 相 连 ，并 通 过 葡 萄 糖 连 接 在 甙 元 的 末
端 。 HNMR(400 MHz C。D。N)化 学 位移 值 如下 ：
一 0．68(3H ，s)，l_00(3H ，d)，1．10(3H ，s)，1．25
(3H，d)，1．5O— 1．90(2H，多 重 峰 )，2．05— 2．28
(2H，多 重 峰 )，3．50— 3．60(1H，多 重 峰 )，3．84
(2H，d)，4．05(1H，多重 峰)，4．20—4．68(糖 Cl_5)，
5．86(1H ，s)。“CNM R (DEPT，C5 D5N ；100 M Hz)
：37．4(CH2，C-1)，30．3(CH2，C-2)，8O．0(CH ，C一
3)，38．8(CH ，G 4)，140．7(CH2，C-5)，121．7(CH ，
C_6)，32．2(CH2，G 7)，31．7(CH ，C-8)，50．1(CH，
C-9)，37．0(C，C一10)，20．8(CH 2，C—l1)，32．0(CH2，
C_12)，45．0(C，C_13)，52．9(CH2，C_14)，2．0(CH2，
C-15)，89．6(CH2，C一16)，89．5(CH ，C一17)，17．0
(CH ，C一18)，19．3(CH。，C一19)，44．7(CH ，C-20)，
9．6(CH。，C-21)，109．7(C，C-22)，31．9(CH2，C一
23)，28．7(CH2，C-24)，30．3(CH ，C一25)，66．6
(CH2，C-26)，17．2(CH2，C_27)，100．2(CH，Glc C一
1)，78．0(CH ，Glc C一2)，77．6(CH ，Glc C一3)，78．0
(CH ，Glc C-4)，76．9(CH ，Glc C-5)，61．1(CH，，Glc
C-6)，102．1(CH ，Rhal C一1)，72．7(CH ，Rhal(2-2)，
72．4(CH ，Rhal C-3)，73．9(CH ，Rhal C-4)，69．4
(CH ，Rhal C一5)，18．7(CH ，Rhal C-6)，103．2
(CH ，Rha2 C一1)，72．5(CH ，Rha2 C-2)，72．7(CH ，
Rha2 C一3)，80．3(CH ，Rha2 C一4)，70．3(CH 。Rha2
G 5)，18．3(CH ，Rha2 C-6)，102．1(CH ，Rha3 C-
1)，72．4(CH ，Rha3 C一2)，72．4(CH ，Rha3 C一3)，
73．9(CH ，Rha3 C-4)，69．4(CH ，Rha3 C一5)，18．7
(CH。，Rha3 C一6)。以上波谱数据与偏诺 甾体 四糖
皂甙，即 pennogenin一3一p—O—p—D-glucopyranosyl[一a—
L—rhamno—pyranosyl(1-2)]一a—L-rhamno—pyanosyl
(1-4)一a—L—rhamnopyranosyl(1-4)的文献 值 (Eggert
和 Djerassi，1975)完全相符。基 于以上结果，化合
物甙 4确定为：其结构如图 1所示，其他化合物结构
还在鉴定 当中。
4 含量测定
4．1色谱条件
色谱 柱 ：Shim—pack Vp—ODS柱 (150 mm×4．6
维普资讯 http://www.cqvip.com
452 广 西 植 物 23卷
mm，5 m)；流动相 ：75 甲醇 ；流 速 ：0．5 mL／min
柱温 ：室温 ；检 测波长 ：210 nm。
图 1 化合物 4的结构式
Fig． 1 The structure of compound 4
4．2标准 曲线
准确称量偏诺 甾体 四糖皂甙对照品 25 mg，用
流动相(75％甲醇)定容于 25 mL容量瓶 中，超声振
荡使之充分溶解 ，分别吸取 1．0 mL，3．0 mL，5．0
， 。 1—]一 —————．T—广]——T————————～
2 3 4 5 6
mL。7．0 mL，9．0 mL于 10 mL容量瓶 中，加 75 甲
醇至标线。按上述色谱条件，采用外标法分别进样
5 L，以浓度对峰高作图，得标准工作曲线，计算 回
归方程为 ：Y一0．000 193 759X+0．003 495 96(Y
为浓度，x为峰高)，相关系数 为 0．998 5，线性范围
为 0．05～0．45 P-g。
4．3样品 的供试 液的制备
分别取 已干燥 的广西 蜘蛛 抱蛋植 物样 品适 量 ，
粉碎 ，过 20目筛 ，准确称取各样 品粗粉 10 g，装入小
滤纸筒内，放人索氏提取器中，以 95 的乙醇提取 4
h，减压回收乙醇，膏溶于水 ，以乙醚萃取脱酯，水层
再用正丁醇萃取，减压 回收正 丁醇将 提取物转入
100 mL容量瓶 中 ，加 入适 量 流动 相 (75％甲醇)，超
声振荡使之充分溶解 ，冷却后定容，吸取 5 mL高速
离心 5 min。取上层清液 1 mL于 10 mL容量瓶中，
加 75 甲醇至标线，作为待测样液，进样前用 0．45
m 滤膜过滤 。
2 4 6 t／min
图 2 对照 品(A)及广西蜘蛛抱蛋(B)的色谱 图
Fig．2 The HPLC chromatogram of standard(A)and Aspidistra retusa (B)
4．4样 品的测定
取前面配好 的样 品供试液 ，按上述色谱条件分
别进样 5 L，各样 品及对照 品的色谱 图如 图 2所
示。由测定结果计算得出化合物 4在广西蜘蛛抱蛋
中的含量为 1．595 。
参考文献 ：
Chen CX(陈 昌 祥)，Zhou J(周 俊 )．1994．Stereidal sapo—
nins from Aspidistra elatior(蜘 蛛 抱 蛋 根 茎 中 的 甾 体 皂
甙)[J]．Acta Botanic ⅡYunnanica(云 南植物 研究)，16
(4)：397— 400．
Chen MJ(陈梦菁)．1994．Steroidal glycosides from Aspidistra le—
shanensis K Y．Lang et Z．Y．Zhu(乐 山蜘蛛 抱蛋 的甾体皂 甙)
[J]．Acta Botanica Sinica(植物学报)，36(7)：568—571．
Chen MJ(陈梦菁)．1 9 9 5．Steroidal glycosides from A pidis—
tra sichuanensis K．Y．Lang et Z．Y．Zhu(四川 蜘 蛛抱 蛋 的
甾体皂甙)[J]．Natural Product R& D(天然产物研究与
开发 )，7(1)：1 9—22．
Chen MJ(陈梦菁)．1999．Steroidal glycosides from conval—
larieae(铃兰族 的甾体皂甙)[J]．ChineseBulletin ofBota—
ny(植物 学通 报 )，16(1)：37—43．
Eggert H，Dierassi C．1975．Assignment of the structure of
steroids by nuclear spectroscopy[J]．Tetra Lett，31：3
635— 3 637．
Hira JY，Konishi T，Sanada S．1982．Studies on the constit—
uents of Aspidistra elatior Blume I：on the steroids of the
underground part[J,]．Chem Pharm Bull，30(10)：3 476
— 3 484．
Mamoru K，muji K，Tokehiko Y．1996．Quantity determi—
nation of the constituents of Aspidistra elatior[J]．Agric．
Food．Chem．，44(1)：301— 303．
Yang Qx(杨庆雄)，Yang CR(杨崇仁)．2000．Steroidal con—
stituents of Aspidistra elatior from Yongshan，Yunnan(云
南永善产蜘蛛抱蛋的 甾体成分 )[J]．Acta Bota”i ⅡYu”一
nanica(云南植 物 研究 )，22(1)：109一 l15．
维普资讯 http://www.cqvip.com