全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 24(2)：144～ 145 2004年 3月
黄皮愈伤组织诱导及其对不同激素的响应
潘小平 ，李美茹，杨 谦
(中国科学院华南植物研究所，广东广州 510650)
摘 要：通过对黄皮不同外植体进行离体培养，初步获得了愈伤组织。结果表明：腋芽、花芽容易诱导绿色愈
伤组织，且愈伤组织较细密。叶柄的愈伤组织诱导率很低，时间长，生长缓慢。愈伤组织的增殖继代培养的初
步研究表明：花芽愈伤组织在继代培养基上形成白色、较松散的愈伤组织 ，质地较差；而腋芽及叶柄产生的愈
伤组织生长极缓慢 ，难以继代 。
关键词 ：黄皮 ；外植体 ；愈伤组织；诱导
中图分类号 ：Q945 文献标识码：A 文章编号 ：1000-3142(2004)02—0144—02
Callus induction and respond to different
phytohormone 0f Clausena lansium
PAN Xiao—ping，LI Mei—ru，YANG Qian
(South China Institute of Botany，The Chinese Academy of Sciences，Guangzhou 510650，China)
Abstract：Different explants of Wampee(Clausena lansiura)were used to induce callus．The preliminary results
showed that the explant axillary bud and flower bud could be induced green，tighten callus in short time while
the calus obtained from the explant petiole had lower induction rate，longer induction time，and grew much
slowly．Subculture result indicated that white，friable calus could be obtained by subcultured calus from the
explant of flower bud．However，the callus induced from the explant axillary bud and petiole grew much slow
and it was difficult to subculture them．
Key words：Clausena lansium ；explants；callus；induction
我国南方资源丰富的芸香科黄皮属植物黄皮
(Clausena lansium(Lour．)Skeels)是一种果树。不
仅能食用，其根、叶、果、核还能人药，能解表行气、健
胃止痛。民间用其叶煮水、洗浴，治疗疥癞、消风肿
等。黄皮叶的水浸膏治疗急性黄疸型病毒性肝炎有
一 定疗效(杨明河等，1987)。黄皮叶中的黄皮酰胺
类似脑复康对脑起保护作用，改善脑血液循环和抑
制脂质过氧化反应(刘云等，1991)。目前关于黄皮
的组织培养报道较少(宁正祥等，1987)，其愈伤组织
诱导形成的研究未见报道。本工作对黄皮进行了愈
伤组织诱导和继代培养的研究，并考察了植物激素
对黄皮不同外植体愈伤组织形成的影响，为进一步
筛选合适的愈伤诱导培养基及继代培养奠定基础。
1 材料和方法
黄皮果树购买于广州市果树研究所，以 MS为
基本培养基，附加不同浓度的 6-BA(苄基腺嘌呤)、
2，4一D(二氯苯氧已乙酸)、NAA(萘乙酸)、IAA(吲
哚乙酸)。琼脂 0．7％，蔗糖 3％，pH5．8～6．0，121
℃灭菌 15--20 min。黄皮幼茎、叶柄及刚刚萌出的
花蕾(圆球形)。将材料用 自来水洗净，置于 7O 酒
收稿 日期 ：2003-01-27 修订 日期 ：2003-07—14
基金项目；中科院留学经费择优支持回国工作基金；国家自然科学基金资助项目(30270158)。
作者简介；潘小平(1969一)，女，湖北通城县人，助理研究员 ，主要从事植物次生代谢研究。*为通讯作者
维普资讯 http://www.cqvip.com
2期 潘小平等：黄皮愈伤组织诱导及其对不同激素的响应 145
精中浸泡 30 s，吸千。转入 0．1 升汞溶液中浸泡 4
～ 5 rain，最后用无菌水冲洗 5次。在无菌条件下接
种于不同培养基上进行愈伤组织的诱导，在 27士3
℃，暗培养 。
形成愈伤组织的外植体是指形成了肉眼可见的
愈伤组织的外植体，愈伤组织形成频率：形成愈伤
组织的外植体数／接种的未污染 的外植体数 ×
i00 ，所有数据均于外植体接种 1个月后统计。
2 结果与分析
2．1愈伤组织形成的观察
以 MS为基本培养基，配置一组含激素 2，4一D、
NAA、6-BA、IAA的培养基。各种外植体分别接种
表 I 植物激素对黄皮不同外植体愈伤组织形成的影响
Table 1 Effects of phytohormone on calus production from different explants of Clausena lansium
激素
Auxin(mg·L『‘) E xpla
体
nt。 产毒 问 G愈r伤ow组th织st的a eof ca生lu长s forma s fo珊tion(d) ca1us forIation uon
6-BAt
．
0+ NAAo
．
5+ lAAo．5
6-BAt
．
5+ NAA1
．
o+ lAAlJ o
2．4-Dl+ 6·BA1． 0+NAAo． 5
+IAA1
． 0
2．4-D1+ 6-BAt
．
5+NAAlJ 0
2，4-Dl+ 6一BAo
．
5+lAAo．5
幼茎 Stem
叶柄 Leaf
幼茎 Stem
叶柄 Leaf
叶柄 Leaf
花芽 Flower
叶柄 Leaf
花芽 Flower
叶柄 Leaf
花芽 Flower
叶柄 Leaf
花芽 Flower
叶柄 Leaf
花芽 Flower
叶柄 Leaf
花芽 Flower
11 80
11 5O
绿色，颗粒状 ，较细密 ，质地好
绿色．颗粒状 ，较细密 ，质地好
白色，较松散 ．质地一般
白色
白色．透明
白色．透明
白色．透明
白色，较松散 ，质地一般
浅绿色(花基部膨大成球状)较细密．
颗粒状 ，质地好
浅绿色(花基部膨大成球状)较细密，
颗粒状 ．质地好
浅绿色，质地一般
在表 1所示的八种不同培养基上观察脱分化时间，
并计算愈伤组织的诱导率。从表 1可见黄皮各种外
植体中，愈伤组织出现的时间，以花芽脱分化较容
易，腋芽可诱导出愈伤组织，而叶柄较难产生愈伤组
织．夕卜植体在各种培养基上的诱导率，相对以花芽诱
导率较高，其次为腋芽，最后为叶柄。愈伤组织生
长，以花芽、腋芽等的愈伤组织为绿色、较细密，质地
较好；而叶柄的愈伤组织为白色、较松散，质地较差。
2．2愈伤组织的继代培养
待愈伤组织长到一定大小，从外植体上移出进
行继代培养。花芽愈伤组织生长较好，以MS+2，4一
D-+6一BA。+NAA。和 MS+2，4一Do．5+6一B ．5+
NAA。作为继代培养基，其愈伤组织在继代培养基
上培养了 10 d后形成白色、较松散的愈伤组织，质
地较差。而腋芽及叶柄产生的愈伤组织生长极缓
慢，难以继代。可见适合于愈伤形成的激素配比并
不适合于愈伤组织的生长。
3 讨 论
从黄皮外植体诱导产生愈伤组织，可以进一步
以组织培养手段生产和提高黄皮中活性成分黄皮酰
胺，通过次生代谢途径诱导其活性成分增加，本文首
次报道黄皮愈伤组织的诱导。
在利用植物细胞培养技术生产有用次生代谢产
物的研究中，诱导愈伤组织的形成是其重要的一步，
诱发的愈伤组织质量的好坏直接影响着其后的培养
与筛选、悬浮细胞系的建立、大规模生物反应器的培
养。虽然从黄皮花芽、腋芽、叶柄中都能诱导愈伤形
成，但目前其生长量很低，花芽略高，腋芽、叶柄的愈
伤生长量很低，生长非常缓慢；而且生长质地不同，
花芽 、腋芽生长质地较好 ，而叶柄 的较差。同时，花
芽继代培养产生的愈伤组织质地不好，腋芽和叶柄
(下转第 151页 Continue on page 151)
^ ／O ∞ 一 ∞ M 加
3 2
一 ∞ u n n n
h
4 4 B
2 2 6
维普资讯 http://www.cqvip.com
2期 于维华等 ：植物细胞程序性死亡(PCD)的研究进展 151
Morgan PW ，Drew MC，Jordan WR，et a1．1997．Ethylene
signal transduction and programmed cel death during acre-
nchyma formation in maize roots[J]．Plant Physiol，114：
31 003．
Orzaez D。Granel A．1997．DNA fragmentation is regulated
by ethylene during carpel senescence in Pisum satirum[J]．
P 。ll：137— 144．
Pan JW ，Chen H，Gu Qt et a1．2002．Environmental stress-
induced programmed cel death in higher plants[J]．Genet-
ics，24(3)：385—383．
Raz V。Fluhr R．1993．Ethylene signal is transduced via pro-
teins phosphorylation events in plant[J]．Plant cell。5(5)；
523—530．
Roberts AW ，Haigler CH． 1989．Rise in chlorotetracycline
fluorescene accompanies tracheary element differentiation
in suspension cultures of zinnia[J]．Protoplasma，152(1)：
37— 45．
Rosl F．1992．A simple and rapid method for detection of ap—
optosis in human cellsFJ]．NucleicAcidRes，20：5 243-5
244．
Sun YL(孙英 丽)．Zhao Y(赵 允 )，Liu CX(刘 春香 )，et
a1．1999．Cytochrome c can induce programmed cel death
in plant cels(细胞色素 c能诱导植物 PCD)[J]．Acta Bot
Sin(植物学报)，41(4)：379—383．
Wacker PR。Sikorska M．1997．New aspects of the mecha-
nism of DNA fragmentation in apoptosis[J]．Biol。75：287
— — 299．
Wang H，Li J，Bostoek RM，以a1．1996．Apoptisis：a func-
tional paradigm for programmed plant cel death induced by
a host-selective phytotoxin and invoked during development
[刀．PlantCell，8：375-391．
Wang YQ(王雅清)，Cui KM(崔克明)．1998．Programmed
cel death during the vessel element differentiation of the
secondary xylem in Eucommia ulmoides shoots(杜仲次生
木质部导管分子分化中的程序性死亡)[J]．Acta Bot Sin
(植物学报)，40(12)：1 102—1 107．
Yeung EC。 Meinke DW ． 1993． Embryogenesis in anglo-
sperms：development of the suspensor[J]．Plant Cel1．5：
1．371— 1 381．
You RL(尤瑞麟)．1985．Uhrastructral studies on the degen-
eration processes in wheat nucellar cells(小麦珠心细胞衰
退过程的超微结构观察)[J]．Acta Bot Sin(植物学报)，27
(4)：345—353．
Zhou J(周 军)，Zhu HZ(朱海珍)，Jiang XF(姜晓芳)，et
a1．1999．Ethylene induction of apoptosis in carrot proto—
plasts(乙烯诱导胡萝 卜原生质体凋亡)[J]．Acta Bot Sin
(植物学报)。41(7)：747—750．
(上接第 145页 Continue from page 145)
继代培养仍然很困难。因此，选择培养愈伤组织的
激素配方不能仅依据愈伤组织诱导率来确定，还要
对愈伤组织生长量进行统计分析。这方面的工作正
在进行。
参考文献：
宁正样，黄昌贤．1987．黄皮的茎段培养与试管繁殖[J]．植
物生理学通讯 ，6：41-48．
刘 云，石成璋，张均 田。1991。黄皮酰胺的抑制脂质过扩
氧和脑保护作用[J]．药学学报，26(3)：166—170．
杨明河，曹延怀，李伟勋，等．1987．黄皮叶中黄皮酰胺的
分离和结构测定[J]．药学学报，22(1)：33-40．
维普资讯 http://www.cqvip.com