全 文 ： 广 西 植 物 Guihaia 25(4)：362— 365 2005年 7月
贯叶连翘总提取物对黄色短杆菌的抗菌作用
李 宏1，姜怀春2
(1．重庆教育学院生命科学和化学系，重庆 400067；2．重庆工商大学 ．重庆 400067)
摘 要：报道了贯叶连翘总提取物作用于黄色短杆菌并经光照和未光照处理后对该菌的抗菌作用，目的是探
讨贯叶连翘总提取物在光照和非光照处理时抗茵作用的异同。采用光密度(OD)值、活菌数(CFU)、最低杀菌
浓度(MBC)值检测方法，测定了在 12 h的培养过程中，提取物作用时黄色短杆菌的 OD640nm值、CFU、MBC
值。结果表明提取物对该菌有很强的抑菌和杀菌作用，且这两种作用与其浓度有关，不需光照。
关键词：贯叶连翘提取物 ；黄色短杆菌；抗菌作用
中图分类号 ：Q949．95 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2005)04—0362—04
Antibacterial effect of the total extract of Hyp
ricum perforatum on Brevibacterium flavum
LI Hong1，JIANG Huai-chun2
(1．Department of Life Sciences and Chemistry．Chongqing College of Education．Chongqing 400067．China；
2．Chongqing Technology and Busines University．Chongqing 400067．China)
Abstract：The effects of the total extract of Hypericum perforatum L．on Brevibacterium ftavum with and
without illumination in the course of 12 hours’incubation were studied，the purpose of which was to determine
the conditions in which Hypericum perforatum L．could show its most effective antibacterial efects．The op—
tical density(0D64o m)，colony forming unit(CFU)and minimum bactericidal concentration(MBC)were tested．
The results showed that it had strong bactericidal and inhibitory effects on Brevibacterium ftavum and its
effects depended on its concentrations but was independent ofⅢl umination．
Key words：extract of Hypericum perforatum L．；Brevibacterium ftavum；antibacterial effects
在西方 国家 ，贯 叶连翘 (Hypericurn perfora—
turn L．，HPL)总提取物(TEHPL)为广泛使用的临
床抗抑郁药(Hubner等，1994)，其研究人员还证明
HPL中的金丝桃素经光照处理后可抗肿瘤及 HlV
(Ebermann等，1996；Prince等，2000)，但金丝桃素
无抗菌作用(Kubin等，1999)。迄今为止，尚无 TE—
HPL抗菌作用的报道。因 TEHPL已用作临床抗
抑郁药(Hippius，1998)，如果还能抗菌，将会增加其
临床应用价值。现以黄色短杆菌(Brevibacterium
fl“ “ )研究其对革兰氏阳性无芽孢杆菌的抗菌作
用 ，结果报道如下。
1 材料和方法
1．1材料
黄色短杆菌(B．flarum)AB92062，源于中国典
型培养物保藏中心(CCTCC)。培养基：范秀容等
(I989)的配方。53WB分光光度计：上海光学仪器
厂 。
1．2 TEHPL的制备
采花期 HPL、干燥、粉碎。按北京大学生物系
所编教材(1979)的方法用无水乙醇提取，得褐色膏
收稿 日期 ：2004-08-16 修订 日期 ：2005—0卜12
基金项 目：重庆市教委科研基金项 目(编号 ：021501)
作者简介 ：李宏(1963一)．女 ．重庆市人 ．硕士 ．副教授 ．研究方 向：微生物学 、生 物化学与分子生物学 。
维普资讯 http://www.cqvip.com
4期 李 宏等：贯叶连翘总提取物对黄色短杆菌的抗菌作用 363
状 TEHPL。精确称取 TEHPL，用 40 乙醇配成
浓度分别为0．1、1．0和 10．0 mg／mL的TEHPL储
备液。
1．3 TEHPL抗菌作用的检测
1．3．1处理设计 取该菌对数期培养物(0Ds 一
0．2)各 660 mL分别加入 5个 l 000 mL三角瓶中，
其中 3瓶分别加入浓度为 0．1、1．0、i0．0 mg／mL的
TEHPL储备液各 40 mL，另 2瓶中分别加 40 乙
醇、液体培养基各 40 mL分别作溶剂、空白对照。
将所有三角瓶于 4℃静置 3 h以便 TEHPL进入细
菌细胞。然后，将每瓶混合物等分为 l0份(每份 70
mI )。其中 5份(5组)光照处理(37℃水浴，180 W
光照 l h)，另 5份(5组)不光照处理 (37℃黑暗恒温
箱中静置 l h)，以探讨 光照对 TEHPL抗 菌作用的
影响。
各样 品均 置黑暗摇床上 (150 r／rain，37℃)培
养 12 h，其间每隔 2 h测 1次 OD6 。 ，每隔 3 h测 1
次CFU／mL，在培养 2 h和 12 h时检测 TCC／mL。
1．3．2 TEHPL抗茵作用参数的检测方法 OD
值检 测：为 消 除 TEHPL颜 色 的干扰，各样 品
OD 的空白对照为含相同浓度 TEHPL储备液
的无菌液体培养基。最后求出 5个重复样品的平均
OD6{0 值 。
CFU检测：十倍稀释法(范秀容等，l989)，取
CFU在 30～300的平板计数 CFU／mL。
TCC(Total Cel Count，总菌数 )检 测：美蓝染
液(祖若夫等，1993)离心(5 000 r／rain，20 min)取上
清液。各样 品取 稀释 度为 l0一、l0～、10 菌悬液 5
mL于无菌试管中，沸水浴加热 10 rain杀死细菌。
再取 0．5 mL已加热的各菌悬液于不同试管中，分
别加 4．5 mI 美蓝上清液混匀。染色 10 min，取各
混合菌液于血球计数板中，将计数板于垫湿滤纸的
加盖白瓷盘中静置 20 rain，计数 TCC／mL(祖若夫
等，1993)。
MBC检测：按照刘健等(2000)的方法稍加改
进，在一系列 0．95 mL培养物(OD =0．2)的试
管中分别加不同浓度(表 2)TEHPL储备液各 50
I ，同时分别做溶剂、空白对照。按 1．3．1进行光
照和不光 照处理 ，每处 理重 复 5组。置黑 暗摇床
(150 r／min，37℃)培养 24 h，取 25 L培养液涂布
无 TEHPL的培养基平板，培养48 h，无菌生长的平
板所对应的最低 TEHPL试管浓度即为最低杀菌浓
度(MBe，mg／mL)。
2 结果
用 A、B、C分别代表加 0．1、1．0、10．0 mg／mL
TEHPL储备液的样品，D、E分别代表溶剂、空白对
照 。
0 2 4 6 8 l 0 l2
ftiJTime dh
图 1 光照处理时，TEHPL处理黄色
短杆菌后的 ODs4o 值
Fig．1 OD640 nm values of Brevibacterium flavum
samples containing TEHPL at different
concentratiOns with ilumination
2．0
1．8
1．6
1．4
1．2
1．0
0．8
0．6
0．4
0．2
0
0 2 4 6 8 l 0 l 2
I时I／jJ Ti1lie t／h
图 2 未光照处理时 ，TEHPL处理黄色
短杆菌后的 ODs4o 值
Fig．2 OD64o nm values ot Brevibacterium flavum
samples containing TEHPL at different
concentratiOns without illumination
2．1 TEHPL处理黄色短杆菌后的OD值
在图 l、2中，培养相同时间时，OD值从大到小
的顺序是：ODE>ODD>OD >^ ODH>ODc，表明
40 乙醇在一定程度上抑制该菌生长，TEHPL可
抗该菌，且浓度增加作用增加。详细情况是：ODA
一 直缓升，说明低浓度 TEHPL只抑制该菌；光照与
8 6 4 2 0 8 6 4 2 )
一： ： Q0一∽。三 Q0 Q0
维普资讯 http://www.cqvip.com
364 广 西 植 物 25卷
不光照的0【)B均在 8 h时回升，说明较高浓度 TE—
HPL使该菌延迟期变长，随时间推移作用消失。图
1中光照 oD 在 12 h时降至零 ，图 2中未光照 ODc
在 10 h时降至零，表明高浓度 TEHPL对该菌有杀
菌作用，且不需光照。重复 5次的结果表明，不同浓
度 TEHPL处 理 A、B、C 各样 品后，各样 品的
OD 。 之间以及 A、B、C分别与 D、E之间存在显
著差异(P<0．05)。
2．2 TEHPL作 用时培养 3、6、9、12 h的 CFU数和
n／n,比
结果见表 1。
表 1表明，培养时间相同时，A、B、C的 CF~J／
mL分别均比D的 CFU／mL少(相应的 n／ <1)，
表明 TEHPL抑制该菌生长；并且 TEHPL的浓度
表 1 TEHPL处理黄色短杆菌后的 CFU
Table 1 CFU of Brevibacterium flavum samples treated with TEHPL
注：“n”表示在光照和未光照处理两种情况下用 TEHPL处理的样品(A、B、c)和 E的 cFU／mL数#no表示两种情况下样品(D)的 cFU／mL
数；n／no表示两种情况下样品(A、B、C、E)的相对 CFU数．
Note：“n”means the CFU／mL numbers of the samples(A。B。C)treated with TEHPL with and without ilumination and of the sample E．no
means the CFU／mL numbers of the sample D with and without ilumination‘n／no means the relative CFU numbers of the samples(A．B。C，E)
with and without illumination．
越大，n／n。越小 ，说明抑制作用越强(P<0．05)。经
光照和未经光照的样品C的CFU／mL和n／ 在培
养至 12 h后降至零，说明高浓度 TEHPL对该菌有
杀菌作用，并且与经光照时的各样品相比，未经光照
时 TEHPL的杀菌作用稍强(P<0．05)。
3
{
墨
吾
吕
A B C D E
样lI^SamPl e s
团： 光J!《处川! 2 h 2 h Iltt i【1l utIiIt⋯【1 it h illIJ¨Ii『1jIti c1I
皿：术 光照处 ． 乔2h 2h．If【 ilt【lblIiflI1 wi【hout ill u
Ini⋯Iti【lI1 囡： 光!(1处 乔I 2 h 1 2h|lIt i u 【i⋯1
wi【h i1 mi n ti⋯I．口 ：未纤光照处 ．蚺柞1 2h I 2 h af．t e r
i n cIh Iti on II hlIuI iII uIl Li n Iti cln
图 3 黄色短杆菌各样品的 TCC
Fig．3 TCC of al lthe samples of Brevibacterium flavum
2．3培养 2、12 h时黄色短杆菌的 TCC
结果见图3。无论是否光照，在培养至12 h时，
TCC‘=TCC几乎下降至零；这进一步证明低浓度 TEHPL
对该菌有抑制作用，而高浓度 TEHPL对该菌有杀
菌作用。5组重复样品的检测结果表明，在培养 12
h后，不同浓度 TEHPL处理的样品 A、B、C的
TCC／mL之间，A、B、C分别与 D的 TCC／mL之间
存在显著差异(p<0．05)。
2．4 MBC检测结果
光照处理后 TEHPL抗该菌的 MBC是 0．300
mg／mL，未光照处理 时 MBC是 0．275 mg／mL，该
检测结果说明 TEHPL对该菌的杀菌作用不必光照
(表 2)。
3 讨论
由于各处理样品体积均为 7O mL，所以A、B、C
样品中TEHPL实际浓度分别是 0．005 7、0．057 1、
0．571 4 mg／mL，前 2种浓度在 OD6．。 、CFU 和
TCC检测中对黄色短杆菌有抑菌作用，后 1浓度有
杀菌作用，这与 TEHPL对该菌 的 MBC分别是
0．300 mg／mL和0．275 mg／mL的结果一致。各项
检测均表明 TEHPL对该菌的抑杀作用依赖于其浓
维普资讯 http://www.cqvip.com
4期 李 宏等 ：贯叶连翘总提取物对黄色短杆菌的抗 菌作用 365
度且不需光照。
由于 HPL中金丝桃素的抗肿瘤和抗病毒(包
括 HIV)作用需要 光照条 件来增强 (Ebermann等，
1996；Miccoli等，l998；Weler等，1997)，但金丝桃
素在强光照射下可能引起光敏性皮炎(Gulick等，
l999)，这一副作用使其抗肿瘤、抗病毒作用的发挥
受到一定限制。但因 TEHPL的抗抑郁作用不依赖
于光照，避免了光敏化副作用，所以在临床上得到了
广泛应用(Ernst等，1998)。例如，德国每天处方在
1996年一年中就开出 131．5百万剂 TEHPL用于
治疗轻度到中度抑郁症(Orth等，1999)，表明 TE—
HPL在临床上应用的安全性已得到证实。而笔者
表 2 MBC检测结果
Table 2 Result of MBC measurement
黄色短杆奠
Brevibarteri
H，n Jla．,ra
TEHPI 储备液浓度 Concentrati。ns 0f TEHPL stock soluti。ns(rag／raL) Co对
nt
照
roI。
光照处理
Illumination
来光照处理
Dark
注 “+”表示经培养后试管中有存活的细菌；“一”表示经培养后试管中无存活的细菌。
Note：“+ ”There were survival bacterial cels in the test tubes after incubation；“一”There were not any survival bacterial cells in the test
tubes after incubation．
实验发现TEHPL具有抗菌作用且不需光照，因此，
将其用作临床抗菌药对人体既安全，又可避免可能
出现的光敏化副作用，还可控制病人因细菌感染可
能引起的抑郁症状，具有较好的临床应用前景。我
国HPL资源丰富，如果能将此资源开发成抗菌和
抗抑郁药物，既可有效利用植物资源，还可对我国医
药事业做出一份贡献。
参考文献 ：
北京大学生物 系生物化学 教研室．1979．生 物化学实验指 导
[M]．北京：人民教育出版社．43—45．
范秀容．李广武。沈 萍．1989．微生物学实验[M]．北京：高
等教育出版社 ．260—261。138—141．
祖若夫．胡宝龙，周德庆．1993．微生物学实验教程[M]．上
海 ：复旦大学 出版杜 ，119—125．
Ebermann R，Ahh G，Kreimer M ，et a1．1996．Natural prod-
ucts derived from plants as potential drugs for the photody-
namic destruction of tumor cells[j]．J Photochem Photobiol
B．36(2)：95—97．
Ernst E，Rand jI。Barnes J，el a1．1 998．Adverse efects profile
of the herbal antidepressant St．john。s Wort(Hypericum
perforatum L．)[J]．Eur J Clin Pharmacol。54(8)；589—
594．
Gulick RM ，McAuliffe V．Holden—Wiltse J．et a1．1999．Phase
I studies of hypericin．the active compound in St．john。s
Wort，as an antiretroviral agent in H IV—infected adults．
AIDS clinical trials group protocols 150 and 258[J]．Ann
Intern Med．130(6)：510—514．
Hippius H． 1 998． St john’s Wort(Hypericum perfora—
tun)——a herbal antidepressant[J]．Curr Med Res Opin，
l4(3)：171— 184．
Hubner WD．Lande S，Podzuweit H．1994．Hypericum treat—
ment of mild depressions with somatic symptoms[J]．_，
Geriatr psychiatry Neurol，7(Supp 1)：12—14．
Kubin A，W ierrani F，Jindra RH，et a1． 1999． Antagonistic
effects of combination photosensitization by hypericin，meso-
tetrahydroxyphenylchlorin(mTHPC)and PhotofrinⅡ on
S￡n户^ yzocDcc“ n“r “s[J]．Drugs Exptl Clin Res，25(1)：13
— 21．
Liu J(刘 健)。Chen Y(陈 扬 )，Hou F(侯 芳 )．et a1．
2000．Comparative in vitro activity of Ceftibuten(头孢布烯
体外抗菌作用)[J]．Chin J Clin Pharmacol(中国临床药理
学杂志)．16(4)：243—250．
Meruelo D，Lavie G．Lavie D．1 988。Therapeutic agents with
dramatic antiretroviral activity and little toxicity at efective do—
ses t aromatic polycyclic diones hyperiein and pseudohypericini-j]．
PrDfNatl Acad Sci USA，85(14)：5 230—5 234．
Miccoli L，Beurdeley-Thomas A，De Pinieux G，et a1． 1 998．
Light—induced photoactivation of hypericin affects the energy
metabolism of human glioma cells by inbibiting hexokinase
bound to mitochondria[j]．Cancer Res．58(24)：5 777—5 786．
Orth HC，Rentel C，Sehmidt PC．1999．Isolation．purity analy—
sis and stability of hyperforin as a standard material from
Hypericum perforatum L．[J]．J Pharm Pharmaco1．51
(2)i 193—200．
Prince AM ，Pascual D，Meruelo D，et a1．2000．Strategies for
evaluation of enveloped virus inactivation in red cell concen—
trates using Hypericin[J-I．Photochem Photobio1．71(2)：188
— — 195．
Welhr M ，Trepel M ，Grimmel C，el a1． 1997． Hypericin-in—
duced apoptosis of human malignant glioma cell is light—·de·-
pendent，independent of bcl一2 expression．and does not re—
quire wild—type p53[j]．NeurolRes，19(5)：459—470．
维普资讯 http://www.cqvip.com