全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 27(3)：466—468 2007年 5月
贯叶连翘总提取物对致病细菌的抗茵作用
李 宏l，姜怀春2
(1．重庆教育学院 生命科学和化学系，重庆 400067；2．重庆工商大学 ，重庆 400067)
摘 要：用平板抑菌法检测了贯叶连翘总提取物对细菌的抗菌谱范围，用最低抑菌浓度(MIC)检测法、最低
杀菌浓度(MBC)检测法检测了其抗菌作用的强弱。结果表明提取物对供试革兰氏阳性菌菌株均有较强的抑
菌和杀菌作用，对极少数革兰氏阴性菌菌株有较弱的抑菌作用，无杀菌作用。该结果提示提取物抗菌作用可
能与细菌细胞壁的结构与组成相关。
关键词：贯叶连翘总提取物；致病细菌；抗菌作用
中图分类号 ：Q949．96 文献标识码：A 文章编号 ：1000-3142(2007)03—0466—03
Antibacterial effects of the total extract of Hyp ericum
p er foratum clinicaly isolated bacteriarn on C a o
LI HongI，J IANG Huai-Chun2
(1．Department of Life Sciences and Chemistry，Chongqing Colege of Education，Chongqing 400067，
China；2．Ch ongqing Technology and Busines University，Chongqing 400067，China)
Abstract：The antibacterial spectrum of the total extract of Hypericum perforatum L．and the extents of its antibae—
terial effects on clinicaly isolated bacteria were investigated． Inhibition zones，minmum inhibitory concentrations
(MIC)and minimum bactericidal c0ncentrati0ns(MBC)were tested．The results showed that the total extract had
strong inhibitory and bactericidal effects on the clinicaly isolated Gram-positive bacteria but had weak inhibitory
efects on a few Gram-negative bacteria．These results indicate that its antibacterial effects might be mainly relevant
tO the structure and constituents of bacterial cel wal1．
Key words：total extract of Hypericum perforatum ；clinically isolated bacteria；antibacterial effect
贯叶连翘(Hypericum perforatum L．，HPL)
总提取物 (total extract of Hypericum perforatum
L．，TEHPL)已被西方国家用作临床抗抑郁药，用
于治疗中度和轻度抑郁症(Hubner等，l994；Hippi—
US，l998)，因此其安全性 已得到认可。光照时 HPL
还可抗病毒和肿瘤(Ebermann等，l996；Weler等，
l997；Miccoli等，l998；Prince等，2000)，但因在光
照时 HPL可能产生光敏化副作用 (Gulick等，
1999；Jacobson等，2001)，使这两种作用的应用受
到限制。笔者以非致病性细菌菌株为代表研究了
TEHPL的抗菌作用和抗菌条件，证明了其抗菌作
用不需光照(李宏等，2002，2005)，因此证明了其抗
菌作用的安全性。但临床致病菌株与非致病菌株的
生理、生化特征不同。因此为探讨 TEHPL对临床
分离致病菌的实际抗菌效果，笔者探讨了其对致病
菌株的抗菌作用，以期为 HPL临床抗菌的可行性
提供一些实验数据。现将结果报道如下。
1 材料和方法
1．1实验材料
1．1．1 TEHPL的制备 按李宏等(2005)的方法提
收稿日期：2005一10—10 修回日期：2006—1o-22
基金项目：重庆市教委科研基金(021501)[supported by Research Foundation of Education Commission of Chongqing City(021501)]
作者简介：李宏(1963一)，女，重庆市人，在读博士，副教授，研究方向：微生物学 生物化学与分子生物学。
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3期 李宏等：贯叶连翘总提取物对致病细菌的抗菌作用研究 467
取 TEHPL，用 40 9，6乙醇作溶剂将其配成不同浓度
储备液。
1．1．2供试菌种 临床分离致病细菌源于第三军医
大学，包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。其中革
兰氏阳性菌菌株和革兰氏阴性菌中的非发酵菌菌株
的耐药性见表 1。此外供试革兰氏阴性致病菌还有
洛菲氏不动杆菌(Acinetobacter lzooffi)，肺炎克雷伯
氏菌(Klebsiela pneumoniae)，普通变形杆菌(Proteus
vulgaris)，大肠 杆菌 (Escherichia coli)，产气肠杆菌
(Enterobacter aerogenes)，嗜 麦 芽 窄 食 单 胞 菌
(Stenotrophomonas maltophilis)，阴沟肠杆菌(Enter—
obacter cloacae)，卡他莫拉氏菌(Moraxella catarrha—
lis)，食酸丛毛单胞菌(Comamonas acidovorans)，铜绿
假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，奇异变形杆菌
(Proteus mirabilis)。
1．1．3培养基、试剂和仪器 用 LB培养基，其余同
表 1 供试革兰氏阳性菌菌株和非发酵菌菌株的耐药性
Table 1 The resistance of clinically isolated Gram-·positive and Non。-fermentive bacteria
SXT：复方新诺明；OX：苯唑西林；E：红霉素；DA：克林霉素；MEM：美罗培南；CAZ：头孢他定；CXM：头孢呋新；CTX：头孢噻肟；TZP
哌拉西林／他唑巴坦；KZ：头孢唑啉；IPM：亚胺培南；VA：万古霉素；P：青霉素；AZM：阿齐霉素；CFP：头孢哌酮；CN：庆大霉素。
李宏等(2005)。
1．2 TEHPL抗菌作用的检测方法
(1)TEHPL对供试菌株的平板抑菌检测：活化
各菌株至对数期，用液体培养基调整 CFU为 1×
10。／mL后，取 0．5 mL涂平板。每株菌涂 6个平
板，3个点接 TEHPL浸膏(每板点接 2点，每点 20
rag)，另 3板不点接 TEHPL作对照。将所有平板
置4℃过夜，然后于 37℃培养 24 h，检测抑菌圈有
无并测量抑菌圈直径。出现抑菌 圈的菌株才作
MIC和 MBC检测 。
(2)MIC检测：参照祖若夫等(1993)的方法。
在 14支分别盛 3．8 mL无菌液体培养基的试管中
分别加不同浓度 TEHPL储备液、40 乙醇(作溶剂
对照)、液体培养基(作空白对照)各 100 L，使加
TEHPL的各管中 TEHPL终浓度分别为：6．400、
3．200、1．600、0．800、0．400、0．200、0．100、0．050、
0．025、0．012、0．006、0．003 mg／mL。再在各管 中
分别加 100 L菌悬液(1×10。CFU／mL)，每株菌
按此操作做 5组重复。另取 14支分别盛 3．9 mL
无菌液体培养基的试管，除不加菌悬液外，其余加样
量同上，这 14管作为判定加菌悬液、且含相同浓度
TEHPL的试管中菌株是否生长的比色对照标准。
所有试管于 37℃(60 r／min)培养 24 h，以加菌悬液
管中澄清度与未加菌悬液管中澄清度一致(通过检
测 OD 。nm值确定)的试管中 TEHPL最低浓度为
MIC浓度。
(3)MBC检测：先用 二倍稀释 法 (刘健 等，
2000)，在 15支分别盛 1．9 mL对数期菌悬液(1×
i0 CFU)的试管中分别加不同浓度 TEHPL储备
液、40 乙醇(作溶剂对照)、液体培养基(作空白对
照)各 100 L，使加 TEHPL的各管中 TEHPL终
浓度分别为：12．800、6．400、3．200、1．600、0．800、
0．400、0．200、0．1O0、0．050、0．025、0．012、0．006、
0．003 mg／mL，每株菌按此操作重复 5组。将所有
试管置 37℃(60 r／min)培养 24h，取 25 L菌悬液
涂布于不含 TEHPL的平板上培养 24 h，无菌生长
的平板所对应的最低 TEHPL浓度即分别为 TEH—
PL对各株菌的大致最低杀菌浓度。再按浓度梯度
法检测 1次，此时各管中TEHPL的终浓度不是二
倍稀释，而是每次递增 0．05 mg／mL，最低为 0．10
mg／mL，最高浓度为已测出的TEHPL对各株菌的
大致最低杀菌浓度，以检测 TEHPL对每株菌的较
准确最低杀菌浓度(mg／mL)。每次检测时，每株菌
做 5组重复。
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468 广 西 植 物 27卷
2 结果
2．1 TEHPL对供试细菌平板抑菌检测结果
从表 2可知 TEHPL对各供试革兰氏阳性菌菌
株以及革兰氏阴性菌中非发酵菌菌株有抑菌作用。
但 TEHPL对其余供试革兰氏阴性菌菌株无抗菌作
用，抑菌圈直径为零。
2．2 MIC和 MBC的检测结果
从表 2可知，MIC的检测结果：对于供试革兰
氏阳性菌菌株和革兰氏阴性菌中的非发酵菌菌株，
TEHPL均在 MIC浓度以及高于 MIC浓度时完全
抑制这些菌株生长。MBC的检测结果：TEHPL在
一 定浓度时，均对各供试革兰氏阳性菌菌株有杀菌
作用。对于非发酵菌菌株 1647523、1703934，由于
在 TEHPL浓度高达 l2．80 mg／mL时，试管中仍有
表 2 TEHPL对革兰氏阳性菌菌株和非发酵菌菌株的平板抑菌、MIC和 MBC的检测结果
Table 2 The results of inhibition zones，MIC and MBC of TEHPL on the strains of
clinically isolated Gram—·positive and Non—-fermentive bacteria
菌存活，说明其对这两株菌没有杀菌作用。
3 讨论
由于笔者已证明TEHPL抗菌不需光照，所以
所有检测均未光照处理。实验中所有供试细菌菌株
全部为医院直接从患者身上分离的致病菌菌株，
TEHPL对其中革兰氏阳性菌菌株均有较强抑菌和
杀菌作用，只是对不同菌株(包括同种菌的不同菌
株)，其 M1C和 MBC不同；TEHPL只对其中的非
发酵菌菌株有抑菌作用，对其余革兰氏阴性菌菌株
无抗菌作用。这些结果提示 TEHPL可主要用于抗
l临床革兰氏阳性致病菌菌株所致感染。
因为所有供试菌株均进行过临床抗生素药敏检
测，以选择敏感抗生素用于对患者的治疗，所以供试
菌株均有相应的l临床常用抗生素耐药性检测记载
(表 1)。例如表皮葡萄球菌菌株 1658276对 OX、E
有耐药性，金黄色葡萄球菌菌株 262对 OX、VA、
AZM、P、SXT、DA有 耐药性，类 白喉杆 菌菌株
400146对 KZ，CFP，CAZ，CXM，CTX有耐药性，而
TEHPL对这些菌株均有抑菌和杀菌作用，这表明
TEHPL可用于控制l临床上对多种抗生素有耐药性
的革兰氏阳性致病菌菌株引起的感染。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的主要区别在于
其细胞壁的组成和结构不同，因此结果提示 TEHPL
抗菌机制有可能与细菌细胞壁的结构和组成有关。
参考文献 ：
祖若夫，胡宝龙，周德庆．1993．微生物学实验教程[M]．上海：
复旦大学出版社 ：192—193
Ebermann R。AIth G。Kreitner M，et nf．1996．Natural products de—
rived from plants as potential drugs for the photodynamic destruc—
tion of tumor cels[J-]．J Photochem Photobiol B，36(2)：95—97
Gulick RM，McAulile V，Holden-Wihse J，以 a1．1999．Phase I
studies of hypericin。the active compound in St．Johns Wort．as
an antiretmviral agent in HIV-infected adults．AIDS Clinical tri—
als group protocols 150 and 258 EJ]．Ann Intern Med。130(6)：
510— 5l4
Hippius H．1998．St John’S Wort(Hypericum perforatum)-a
herbal antidepressant[J]．Curt Med Res Opin，14(3)：171—1 84
Hubner WD，Lande S，Podzuweit H．1994．Hypericum treatment
of mild depressions with somatic symptoms[J]．J Geriatr Psy—
chiatry Neurol，7(Suppl 1)：12—14
Jacobson JM，Feinman L，Liebes L，eta1．2001．Pharmacokinetics，
safety，and antiviral effects of hyperidn，a derivative of St．Johns
(下转第 465页 Continue oi1 page 465)
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3期 黄永林等：鲜罗汉果果汁脱色方法研究 465
要高，因此从生产成本与生产效率综合考虑，选择 2
水平则更适宜于工业化生产；B因素对脱色率、总甙
收得率影响都不大，适于微滤过滤液固形物含量前
后不一致的连续生产工艺流程 ，验证 了生产可连续
性；C因素中对脱色率影响较少，随着洗水量的增加
总甙收得率越高，初步浓缩时采用高效膜技术，对生
产成本影响很少，因此可选择 3水平。因此综合考
虑各方面因素，确定最优脱色工艺为：A BC。，树脂
重量 3倍的鲜罗汉果果汁、果汁固形物含量为工艺
流程中的任意含量、洗水量为脱色材料的4倍重量。
3．3工艺验证试验
为考察上述优选所得鲜罗汉果果汁脱色工艺的
稳定性，按该工艺条件进行 3次中试试验 (每次投
鲜罗汉果 60 kg)，分别检测罗汉果果汁脱色脱率、
总甙收得率，结果见表 4。
中试试验结果表明，按优化工艺条件脱色，各项
指标均达到或超过正交试验表中的较高值，RSD值
仅为 1．5 与 1．1 ，因此可以认为优化是成功的，
得到的工艺稳定可行，适宜于工业化生产。
4 讨论
通过正交试验对罗汉果果汁脱色工艺条件进行
了优化，并按最佳工艺进行了验证性中试试验，结果
证明该工艺用于罗汉果果汁脱色处理时工艺简单
(易操作、易控制)、稳定性好、脱色效果好、总甙收得
率高、适合于工业化生产。
本试验首次采用 D900型树脂对鲜罗汉果果汁
进行脱色处理，较好地去掉了易褐变物质与色素，经
脱色处理后的果汁在后序加工中，不会因受热及长
表 4 工艺验证试验结果 (n一3)
Table 4 Result of technology certification test
时间存放发生褐变而产生颜色变化，极大地改善了
鲜罗汉果果汁品质，增加了产品的附加值。通过本
实验的成功试验，该技术工艺可广泛应用于类似的
果汁脱色生产中，具有较大的应用价值。
参考文献：
中华人民共和国卫生部药典委员会．2005．中华人 民共和 国
药典FM]．北京：化学工业出版社：147—148
李锋，李典鹏，蒋水元，等．2003．罗汉果栽培与开发利用
[M]．北京：中国林业出版社 ：123—128
苏瑞君 ，王晓岩，王秋芝．1997．罗汉果咽喉片治疗慢性咽炎
的临床研究[J]．吉林中医药，17(6)：38—39
陈馥馨．1996．新编中成药手册FM]．北京：中国医药科技出
版社 ：326
Jin CH(金春花)，Jiang XL(姜秀莲)，Ke MZ(柯美珍)，et a1．
1 997．Pharmacological studies of Luohanguo Yanhou tablet
(罗汉果咽喉片的药理研究)[J]．Chin Trad Med(中药材)，
20(11)：574— 577
Li DP(李典鹏)，Zhang HR(张厚瑞 )．2000．Studies and uses
of Chinese medicine Luohanguo—— a special local product of
Guangxi(广西特产植物罗汉果的研究与应用)[J]．Guihaia
(广西植物)，20(3)：270—276
Wang M(王密)，Song ZJ(宋志军 )。Ke MZ(柯 美 珍)，et a1．
1 994．Efects of different doses of Momordica grosvenori
Swingle on the immune function of rats(不同剂量 的罗汉果
对大 鼠免疫功能的影响)I-J]．Acta Acad Med Guangxi(广
西医科大学学报 )，11(4)：428～430，163～167
(上接第 468页 Continue from page 468)
wort plant，in patients with chronic hepatitis C virus infec—
tion[-J-1．AntimicrobAgents Chemother，45(2)：517—524
Lj H(李宏)，Jiang HC(姜怀春)．2005．Antibacterial effect of
the total extract of Hypericum perforatum L．on Brevibac—
terium flavum(贯叶连翘总提取物对黄色短杆菌的抗菌作
用)EJ]．Guihaia(广西植物)，25(4)；362—365
Lj H(李宏)，zou GL(邹国林)．2002． Antibacterial effect of
the total extract of Hypericum perforatum L．on Bacillus
subtilis(贯叶连翘总提取物对枯草 杆菌的抗菌作用)I-J]．J
Southwest China Normal Univ(西南师范大学学报)，27(3)：
404——407
Liu J(刘健)．Chen Y(陈扬)，Hou F(侯芳)，et a1．2000．Com—
parative in vitro activity of Ceftibuten(头孢布烯体外抗菌作
用)I-J]．Chin J Clin Pharm (中 国临床 药理 学杂 志)，16
(4)：243—250
Miccoli L，Beurdeley-Thomas A，De Pinieux G，et a1．1998．Light—
induced photoactivation of hypericin affects the energy metabolism
of human glioma cels by inhibiting hexokinase bound tO mito—
chondria[J]．CancerRes，58(24)：5 777-5 786
Prince AM，Pascual D，Meruelo D，et a1．2000．Strategies for evalua—
tion of enveloped virus inactivation in red cel concentrates using
Hypericin[J]．Photochem Photobiol，71(2)：188—195
WelIer M。Trepel M，Grimmel C，et a1．1997．Hypericin-induced
apoptosis of human malignant glioma eel is light-dependent．in—
dependent of be1—2 expression，and does not require wild-type
pS3EJ]．Neurol Res，19(5)：459—470
维普资讯 http://www.cqvip.com