全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 27(1)：127～ 131 2007年 1月
巴戟天组织培养和快速繁殖研究
黄宁珍 ，付传明，赵志国，唐凤鸾，李 锋
( 要广西植物研究所，广西桂林54106)
摘 要：以巴戟天顶芽及嫩茎节段为外植体，以 MS为基本培养基，通过不同的激素种类和浓度配比，建立巴戟
天组培快繁体系。结果表明，外植体表面消毒以7o 酒精预处理 60 S，再用 0．1 HgCIz浸泡 10 min，效果较
好，茎节为外植体优于顶芽。培养基 MS+BA 1．0 mg／L+IBA 0．05 mg／L利于诱导出芽，可用于初代培养；MS
+BA 1．0 mg／L+IBA 0．2 mg／L利于形成丛生芽，用于继代增殖，繁殖系数 6．0／50 d；1／2Ms+IBA 0．4～o．8
mg／L适宜诱导生根获得再生植株，生根率 100 ；生根苗移栽于排水良好的火土或砂土中，成活率90 。
关键词 ：巴戟天 ；顶芽及嫩茎节段 ；组织培养与快速繁殖
中图分类号 ：Q943．1 文献标识码 ；A 文章编号 ：1000—3142(2007)01—0127—05
Tissue culture and rapid proliferation
of Morinda officinalis How
HUANG Ning—Zhen，FU Chuan-M ing，ZHAO Zhi—Guo，
TANG Feng—Luan，LI Feng
(Guangxi Institute of Botany，Guangxi Zhuangzu Autonomous Region
and the Chinese Academy of Sciences，Guilin 541006，China)
Abstract：The tissue culture and rapid proliferation techniques of Morinda officinalis How were studied by U—
sing apical buds and tender stems as explants．The explants were cultivated in different M S medium with dif-
ferent types and concentrations of plant hormones．The results showed that the most suitable procedure for
sterilization was to soak,explants into 0．1 HgClz solution for 1 0 minutes after pretreatment with 7o％ alco—
hol for 60 seconds．The tender stems were superior tO apical buds in vitro culture procedure．The medium MS
+IBA 0．05 mg／L+BA 1．0 mg／L was effective to induce shooting and suitable for the first generation cultiva—
tion；MS-{一IBA 0．2 mg／L+BA 1．0 mg／L could effectively induce fasciculate buds and be suitable for subcul—
ture and proliferation，the propagation coefficient was 6．0 every 50 days；the most optimum rooting medium
was 1／2MS+IBA o．4～O．8 mg／L，and the rooting rate was 100 ．The rooting seedlings were transplanted
in sand or burnt soil with plant ash．The highest survival rate was 90 ．
Key words：Morinda officinalis How；apical buds and tender stems；tissue culture and rapid proliferation
巴戟天(Morinda officinalis How)又名巴戟 ，
为茜草科多年生木质藤本植物，肉质根入药，根皮含
蒽醌化合物、环烯醚萜甙、植物甾醇及多糖、低聚糖
等药用成分。具有补肾壮阳、强筋骨、祛风湿等功
效，主治虚劳内伤、肾虚阳痿、月经不调、尿频遗尿、
宫寒不孕等症，同槟榔、益智、砂仁一起，被称为中国
四大南药。后来研究发现，巴戟天除了传统的治疗
功效外，还具有抗癌(付嘉等，2005)、提高免疫力(陈
忠等 2003；徐超斗等，2003)、抗抑郁 (梁建辉等，
2002；张中启等，2000)、抗衰老(李斐菲等，2005)、增
●
收稿 日期 ：2006-04-25 修回 日期 ：2006—08—16
基金项目：广西科技攻关项 目 (桂科攻 0322024—3B)[Supported by Key Technologies Research and Development Program of
Guangxi(0322024—3B)]
作者简介 ：黄宁珍(1968一)，女，广西大化县人 ，副研究员，从事药用植物生物技术研究 ，(E-mail)huangnz@gxib．cn。
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强记忆力(谭宝璇等，2000)、补血及促进造血干细胞
的增殖和分化 (陈忠等 ，2002)等一系列新的功能 ，用
途十分广泛 ，是我 国目前 出口创 汇的主要 中药品种
之一。由于市场需求量大，近年来巴戟天的栽培规
模不断扩大。因此，本研究以种质快速繁殖为目的，
对巴戟天进行组培快繁研究，为巴戟天快速繁殖和
工厂化育苗提供技术和方法。
1 材料与方法
1．1材料及外植体消毒
植物材料采自广西宁明县中越边境地区及广西
药用植物园，引种于广西桂林植物园内。当新梢生
长至 30~50 ClTI时，选择晴好的天气，于 9：00左右
剪下新枝，除去叶子，用 自来水清洗干净，然后在超
净工作台上，剪成约 3 cm长的带节的小段，用 7O
的酒精浸泡60 S，再用 0．1 HgC12处理10 rain，以
无菌水冲洗 5次，用无菌吸水纸吸干表面水分，剪去
带有残余 HgC1。两端伤口，接种于诱导培养基上。
1．2培养基
以 MS为基本培养基，根据实验 目的添加不同
种类和浓度配比的 6-BA(6-Benzyl—aminopurine)、
IBA(Indol一3一butyric acid)、NAA(Naphthalene ace—
tic acid)、BR(2，4一EpIbrassinolide)，并附加 3．0 蔗
糖和 0．5 的琼脂，pH5．8。配制分装后，于温度
121℃、压力 1．1 kg／cm的条件下灭菌 20 rain。
1．3培养条件
材料接种后，在平均照度 2 000 Ix的光照下培
养，光照时间12 h／d,温度(28±3)℃。
1．4培养过程及方法
将经表面消毒的外植体接人诱导培养基上，一
般经过约 10 d的培养，开始形成新芽；20 d左右新
芽长成 1～3 cm的健壮小芽。将新长出的小芽剪
下，接人继代增殖培养基中，经 40 d的培养，形成丛
生芽，将丛生芽分割并剪成 1 cm长的带节小段，再
次接入继代增殖培养基中，每瓶接种外植体 3～5
个，继代的次数和量根据需要而定。当继代增殖的
芽苗长到 3 cm高、具 4～6片叶时，将芽苗从基部分
开，整枝接人生根培养基中，每瓶接种 5～7枝。
1．5生根苗的移栽
根据巴戟天的生长特性及对环境条件的要求，
以火土或沙土为移栽基质。将生好根的试管小苗，
移出培养室后，在室外炼苗 3 d，洗净根系上的培养
基，移栽至装好基质的营养杯中，在荫蔽度 7O 塑
料大棚中培养，40 d后统计成活率。
2 结果
2．1外植体的选择和消毒方法
用 0．1 HgC12处理 10 min，顶芽和嫩茎节的
死亡率相差不大，均为 1O 左右；但污染率和生长
情况却大不相同。以顶芽为外植体，出芽率较高，生
长也比较快，2周可长 1～2 cm，但污染率比茎段高，
成功率仅为 22 ，抽出的新芽也比较细弱，在继代
增殖过程中易死亡，因此，选用顶芽作为外植体并不
理想。以嫩茎节为外植体，消毒成功率为 6O ，腋
芽的萌发率稍低，生长速度也比较慢，但诱导出的芽
比较壮，在继代培养过程中，生长情况比顶芽好。因
此，通常情况下以嫩茎节段为外植体比较理想。
2．2外源激素对初代芽形成的影响
在培养基中添加合适的激素种类和浓度对初代
芽的萌发和芽苗的质量非常重要。经多次试验发
现，在培养基 MS+BA 1．0 mg／L+IBA 0．05 mg／L
中，出芽率较高，诱导出的新芽粗壮，生长速度也比
较快。BA浓度对抽芽速度和出芽率的影响较大，
在 O～1．0 mg／L范围内，出芽率、出芽速度随着 BA
浓度的升高而升高；当BA浓度达到 2．0 mg／L时，
出芽率反而降低，同时芽苗弱化，生长速度缓慢。低
浓度的 IBA或 NAA利于初代芽的形成和生长，最
适浓度为0．05 rag／L,浓度过高，形成较多的愈伤组
织，芽的生长则受到抑制。比较 IBA和 NAA在不
同浓度下诱导芽的频率和芽的生长情况，结果表明，
IBA更利于形成健壮的芽苗。
2．3激素种类和浓度对继代繁殖的影响
2．3．1 BA浓度对继代增殖的影响 在 巴戟天继代
培养中，增殖率主要受 BA浓度的影响，丛芽的数量
随着 BA浓度的升高而增多，而且较高的 BA浓度
可以使形成丛芽的时间提前 5～1O d；比较不同BA
浓度对增殖率的影响，结果表明，BA浓度为 1．0
mg／L时，单个外植体的最高增殖率为 8．0个／块，
平均繁殖系数为 6．0／50 d，芽苗健壮；BA升高至
2．0 mg／L时，单个外植体的最高增殖率达 10．0个／
块，平均繁殖系数为 6．5／50 d，芽苗下部叶片黄化。
综合增殖率及芽苗的生长情况，我们认为，巴戟天继
代增殖的BA浓度以 1．0 mg／L为宜。
2．3．2不 同浓度 的 NAA和 IBA对继代增殖的影响
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继代培养基中，BA浓度不变，NAA或 IBA浓度
变化对增殖率影响很大(表 1)。其中，NAA浓度的
变化对巴戟天增殖率的影响较 IBA大。NAA浓度
为0．1～O．2 mg／L时，增殖率为 5．0；随着 NAA浓
度的升高，增殖率明显下降；当 NAA浓度升到 1．6
mg／L，每块外植体只形成单一的芽，芽苗的高度也
受到一定的影响。IBA浓度的改变对增殖率的影响
不如NAA明显，在 0．1～O．4 mg／L之间，增殖率为
6．0；随着浓度的升高，丛芽数量有所下降，但下降的
幅度不大 ；当 IBA浓度升到 1．6 mg／L时，每块外植
体也能萌发 4个新芽；高浓度的IBA与 NAA一样，
在一定程度上抑制芽苗长高。比较 NAA和IBA在
最适浓度条件下材料的增殖率和植株的生长数据，
结果证明，IBA比 NAA更适合用于巴戟天继代增
殖 ，最适浓度 0．2 mg／L。
因此，巴戟天继代增殖的最适培养基为 MS+
BA 1．0 mg／L+IBA 0．2 mg／L，在此培养基上，形
成丛生芽的频率较高，芽苗生长速度快，植株相对健
表 1 不 同 NAA或 IBA浓度下的繁殖 系数及生长状况
Table l Propagation coefficient and growth condition of buds under different concentrations of NAA or IBA
MS培养基
Medium(mg／L)
培养时间 观测瓶数 繁殖系数 平均高度 生长状况
Culture time(d) Number of bottles Propagation coefficient Height(crI) Growth condition
BA1．0+ NAA0．1
BA1．0+ NAA0．2
BA1．0+ NAA0．4
BA1．0+ NAA0．8
BA1．0+ NAA1．6
BA1．0+ IBA0．1
BA1．0+ IBA0．2
BA1．0+ IBA0．4
BA1．0+ IBA0．8
BA1．0+ IBA1．6
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
中等粗壮
图 1 继代培养
Fig．1 Subculture and proliferation
壮(图 1)，繁殖系数达 6．0／50 d。
2．4外源生长素种类和浓度对再生苗生根的影响
不同浓度的 NAA、IBA、BR对再生植株生根的
影响见表 2。实验结果表明，IBA和 BR较 NAA对
诱导巴戟天再生植株生根更有效。其中 IBA、NAA
的最适浓度为 0．4～0．8 mg／L，BR为 0．02 mg／L。
在最适浓度下，IBA和 BR诱导的生根率达 100 ；
NAA稍低，为 76 。低于最适浓度，NAA诱导的
生根效果较差，生根率偏低；IBA和BR诱导形成根
的效率虽然较高，达 100 ，但根系较细。高于最适
浓度，生根率下降，生根部位从培养基表面的茎节部
长出，或者先在外植体与培养基表面的交接处形成
愈伤组织，再从愈伤组织上长出根，而且在高生长素
浓度下形成的根多为白色成团的气生根。
尽管IBA和BR在最适浓度下诱导的生根率相
同，但比较两者根的形态后发现，BR诱导形成的根
多为须根、较细，重复效果不够稳定；而由 IBA诱导
形成的根相对较粗 ，根系主次分明，多次重复效果稳
定，因此，IBA诱导巴戟天的生根效果最好。比较
MS和 1／2MS对生根 的影响发现 ，1／2MS更利于生
根及小苗的生长。因此，巴戟天的最佳生根培养基
为 1／2MS+IBA 0．4～O．8 mg／L，一般培养 45 d后
新根长成，主根相对粗壮 ，须根较多，效果见图 2。
2．5再生苗的移栽
将长好根的试管苗开盖炼苗 2 d，移栽于装有火
土的营养杯或消过毒的沙床中，移栽成活率 9O 。
由于前一种移栽方式更利于大田定植，因此，我们以
火土为基质、营养杯移栽为主，见图3。
3 讨论
3．1外植体类型对消毒效果和组培苗质量的影响
根据我们的实验结果，以嫩茎节为外植体消毒
O O 5 5 5 O 5 O 5 5
4 4 3 3 3 4 4 4 3 3
O O 5 O O O O O O O
5 5 3 2 1 6 6 6 5 4
∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞
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效果最好，污染率较低，这可能与顶芽带有嫩叶等附
属器官、难以彻底消毒有关。外植体的类型对继代
增殖过程中苗的质量有一定的影响，顶芽为外植体，
初代培养中萌发快、出芽率高，但由于污染率较高，
因此，成功率偏低；而且 ，由顶芽萌发 的新芽 比较细
弱，在继代培养中容易死亡。嫩茎节为外植体，萌发
出的新芽较壮，活力高，比顶芽更利于继代增殖。
表 2 不同浓度 NAA或 IBA再生苗的生根率
TabLe 2 Rooting rates under different concen-
trations of NAA，IBA or BR
培养基
M edium
(mg／L) ture
零 。
ber of
。
r豸ate。ch aract。e b。tles(％) 叫oS
图 2 试管苗生根
Fig．2 Rooting plantlets in test-tube
图 3 冬季移栽 100 d的试管苗
Fig．3 Plantlet transplanted for 100 d in winter
3．2外源细胞分裂素对增殖率和生长的影响
在继代增殖培养中，细胞分裂素是影响繁殖系
数和组培苗质量的主要因素。赵玉辉等(2005)在对
巨玫瑰葡萄试管苗扩繁增殖试验中发现，随着 BA
浓度的升高，增殖系数有增加的趋势，当 BA浓度过
高时，发出的新芽呈簇生状，难以分清具体芽数，且
枝条拔节困难，伸长变慢。而王爱勤等(2002)在研
究BA浓度对芦荟组培苗增殖和玻璃化的影响时也
发现，随着 BA浓度的增加，芦荟增殖系数增大，玻
璃化苗的数量也随之增多。不同的植物品种，外源
细胞分裂素对增殖率和芽苗生长的影响也有所不
同，对于巴戟天而言，邓沛东等(1991)在早期的组织
培养研究中，增殖培养所用的 BA浓度为 0．7 rag／
L，但增殖率不高。后期的实验中(贺红等，2000)，
BA浓度用 1．0 mg／L，但未在继代增殖这一环节进
行系统的研究和分析。在本实验中，在 O～2．0 mg／
L范围内，巴戟天的繁殖系数随 BA浓度的升高而
增高，但当超过 1．0 mg／L时，增殖率虽然有所增
加 ，芽苗也未见玻璃化 ，但出现下部 叶片黄化 ，苗长
高的速度变慢等症状。由此可见，高浓度的BA容
易引起组培材料异常，影响组培苗的质量，甚至还可
能导致某些性状变异(吴丽芳等，2001)。因此，组培
快繁中一般采用达到扩繁目的的最低适合浓度。我
们的结果表明，巴戟天继代增殖培养中，BA的最适
浓度为 1．0 mg／L。
3．3外源生长素种类和浓度对生根的影响
比较 IBA、BR和 NAA诱导巴戟天的生根效
果，结果表明，IBA诱导的生根率最高，达 100 ，根
的质量也最好；BR诱导的生根率与 IBA相同，但根
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系的质量稍差；NAA诱导的生根率则较低，仅为
76 。几种激素的最适浓度也相差较大，其中，IBA
与 NAA接近，均为 0．4～0．8 mg／L；BR则很低 ，为
0．02～0．05 mg／L。贺红等(2OOO)在 巴戟天的生根
培养中，添加 NAA 0．4 mg／L，生根率 80 。而邓
沛东(1991)则采用复合的生长素组合 (IAA 0．2
mg／L+NAA 0．4 mg／L)，生根率 84．6 。我们也
曾尝试采用复合的生长素组合，在培养基中添加不
同浓度(0．2～0．8 mg／L)组合的 NAA和IBA，进行
类似的实验，最高生根率仅为 60 。因此，不论是
NAA，NAA与 IAA组合，或 NAA与 IBA组合，其
生根效果均不如 IBA或 BR理想 ，而 IBA则更利于
形成粗壮均匀的根系。
外源生长素促进根生长的最佳浓度约为5～10
mol／L，过高则起抑制作用(曹宗巽等，1980)。不同
的植物种类对外源生长素的最适反应浓度有所不
同。外源生长素浓度与巴戟天生根率和根的形态密
切相关，在低浓度条件下，生根率较低，根为浅褐色，
较细，生根的部位为插植于培养基中的茎基部；随着
浓度的升高，生根率上升；但当浓度过高时，生根率
反而下降，生根的部位也随之改变，主要从培养基与
茎交接处上部的茎节处长出，或者先在培养基表面
形成愈伤 ，再从愈伤上长出，且多为 白色绒毛状气生
根，有时交结成团。崔广荣等(2005)在研究生长素
浓度对矮牵牛生根的影响时也有类似发现。由此可
见，生根率下降、生根部位的改变及根外部形态的畸
形化与外源生长激素浓度过高有关。
参考文献：
吴丽芳 ，杨春梅，蒋亚莲 ，等．2001．非洲紫 罗兰组培快繁技术
i-J-]．云南农业科技 ，3：19—2O
赵玉辉 ，郭印山．2005．巨玫瑰葡萄试管苗扩繁增殖试验i-J-]．中
外葡萄与葡萄酒，5：42—43
曹宗巽，吴相钰．198o．植物生理学[-M-]．北京 ：高等 教育出版
社 ：277
Chen Z(陈忠 )，Fang DN(方 代 南)，Ji MH(纪 明慧 )．2003．
Efleet of Morinda ol licinalis How decoction on immune fune—
tion in mice(南药巴戟天水提液对小 鼠免疫功能的影响)[-j-]．
Bull Sci Tech(科技通报)，19(3)：244—246
Chen Z(陈忠)，Xu T(涂涛)，Fang DN(方代 南)．2002．A pre—
liminary report on the influence of Morinda officinalis decoc-
tion on hemopoietic function in mice(南药 巴戟天水提液对小
鼠造血功能的影响研究初报)[-j-]．Chin J Trop Agric(热带农
业科学)，22(5)：21—22，52
Cui GR(崔广荣 )，Ye XY(叶选 怡)，Liu YC(刘跃成)，et a1．
2005．The types and concentrations of hormone influence the
rate of shoot propagation and rooting of Petunia hybrida(激素
种类及其浓度对矮牵牛试管苗增殖及生根率的影响)[-j-]．J
Wuhan Bot Res(武汉植物学研究)，23(4)：389—392
Deng PD(邓沛东)，Xu HC(徐鸿材 )．1991．Research on test-
tube plantlet culture of Morinda 0，厂icinalis How(巴戟天试管
苗培养研究)[-j-]．J Guangzhou Univ Trad Chin Med(广州中
医药大学学报)，8(2)：227—230
Fu J(付嘉)，Xiong B(熊彬)．2005．Study on anti-tumour appli-
cation of Bajitian in tumour mice(巴戟天对荷瘤小鼠抗肿瘤作
用研究)[-j-]．Chin J Practical Chinese with Modern Medicine
(中华实用 中西医杂志)，18(16)：729—730
He H(贺红)，Xiao SE(肖省娥)，Xian JC(冼建春)，et a1．2000．
In vitro culture and plant regeneration of Morinda officinalis
How(巴戟天离体培养及植株再生的研究 )[-j-]．J Guangzhou
Univ Trad Chin Med(广州 中医学院学报)，17(4)：353—354
Liang JH(梁建辉)，Shu I (舒 良)，Luo SP(罗质璞)，et a1．2002．
Primitive study on antidepressant effect of the decoction of
Morinda offcinalis(巴戟天水提物治疗抑郁症临床疗效初探)
[-j-]．China J Chin Mat IVied(中国中药杂志)，27(1)：75-78
Li FF(李斐菲)，Wu YJ(吴拥军)，Qu LB(屈凌波)，et a1．2005．
Study on anti-radical activity of Chinese medicine MoHnda of-
flcinalis How(中药巴戟天抗 自由基活性的研究)[-j-]．Chin J
Spectroscopy Lab(光谱实验室)，22(3)：552—554
Tan BX(谭宝璇)，Su w(苏文)，Chen JW(陈洁文)，et a1．2000．
Improvement effect of Bajishin on spatial learning and memory
ability of rats(巴戟索对衰老大鼠空间学习记忆力改善作用)
[-j-]．New Chinese Medicine and Clinic Pharmacology(中药新
药与临床药理)，11(2)：95—97
Wang AQ(王爱勤)，He LF(何龙飞)，Pei RM(裴润梅)，et a1．
2002．Study on the vitrification of Aloe varieties plantlet in tis—
sue culture组培条件对 不同品种 芦荟试 管苗玻璃化的影响
i-J-]．Chin Agric Sci Bull(中国农学通报)，18(5)：46—49
Xu CD(徐超斗 )，Zhang YX(张永祥)，Yang M(杨明)，et a1．
2003．Immunopotentiating efect of Morinda officinalis oli—
gosaeeharides(巴戟天寡糖的促免疫活性作用)[-j-]．Pharm J
Ch in PLA(解放军药学学报)，19(6)：466—468
Zhang ZQ(张中启)。Yuan I (袁莉)，Zhao N(赵楠)，et a1．2000．
Antidepressant effect of the ethanolic extracts of the roots of
Morinda offcinalis in rats and mice(巴戟天醇提物的抗抑郁
作用)[-j-]．Chin Pharm J(中国药学杂志)，35(II)：739—741
维普资讯 http://www.cqvip.com