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罗汉果叶中黄酮甙元的研究



全 文 :广 西 植 物 Guihaia 26(2):217— 220 2006年 3月
罗汉果叶中黄酮甙元的研究
陈全斌,杨建香,义祥辉,程忠泉
(广西师范大学 资源与环境学系,广西 桂林 541004)
摘 要 :以罗汉果叶为原料提取出黄酮,黄酮经水解 、溶剂萃取、柱层析等手段,得到高纯度甙元;经 TLC、液
相色谱、红外光谱、核磁共振法等分析手段进行结构鉴定,证实甙元分别为山奈酚、槲皮素。
关键词 :罗汉果叶;分离提纯 ;山奈酚 ;槲皮素;鉴定
中图分类号 :Q946.83 文献标识码:A 文章编号 :1000—3142(2006)02-0217—04
^ -● ●n● ● 1 1 J ‘ J● beparation,puritlCatl0n ancIeleterm inatl0n
of flavone aglycones from M omordica
gros venori leaf
CHEN Quan—bin,YANG Jian—xiang,
YI Xiang—hui,CHENG Zhong—quan
(Department of Natura Resources and Environmen,Guangxi Nowina Universty,Guilin 541004。China)
Abstract:Flavone is extracted from M omordica grosvenori leaf.Flavone aglycones is abtained from hydrolyza—
tion and purified by solvent extraction,column chromato—gramphy.Then the flavone aglycones is identified by
M olting-Point,TLC,HPLC,UV and M S,the results show that the flavone aglycones is kaempferol and quer—
citin.
Key words:M omordica grosvenori leaf;purify;kaempferol;quercitin;identify
罗汉 果 [Momordica grosvenori(Swingle)C.
Jeffrey],植物学名为“光果木鳖”,是葫芦科(Cucur—
bitaceae)罗汉果属植物的成熟果实,俗名汉果、长寿
果 ,为我国特产。罗汉果营养价值高 ,含有丰富的果
糖、蛋白质、氨基酸和多种维生素,其性凉味甘,无
毒 ,有润肺止咳、凉血、润肠通便的功效,特别是用作
祛痰剂,在治疗百日咳、慢性气管炎、咽喉炎、胃肠疾
病方面疗效显著(广西壮族 自治区卫生厅,1983)。
前人对罗汉果的研究针对果实中 的甜甙(Tsurtem—
atsu等,1983;刘钟栋,1999)、黄酮(斯建勇等,1994;
陈全斌等 ,2003a)、块根药用成分的药理 (陈全斌等 ,
2003b)及块根淀粉 (陈全斌 等,2002)等进行 了系统
的研究,但至今 尚未有人对罗汉果叶进行研究。为
此 ,罗汉果叶的研究 ,对罗汉果 植株的化学成分分
析 、开发罗汉果 系列产品具有重大 的意义。我们 以
罗汉果叶为原料进行提取、水解、萃取、柱层析、重结
晶等手段,得到高纯度的黄酮甙元;用熔点、TLC、液
相色谱 、红外光谱 、核磁共振法等分析手段进行了结
构鉴定。
1 试验部分
1.1原料与试剂
罗汉 果 叶:2003年 采 于 广 西 临 桂 茶 洞 乡。
收稿 日期:2004—08-21 修回日期 :2005—02—20
基金项 目:广西科学研究与开发项 目(桂科能 0443012)资助[-Supported by Foundation of Scientific Research and Development of
Guangxi(O443O12)]。
作者简介:陈全斌(1957一),广西北流人 ,高级工程师,从事天然产品开发与研究
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218 广 西 植 物 26卷
LSA一10大孔吸附树脂 (西 安蓝深交换 吸附材料有
限责任公司),95 乙醇(食用级),薄层层析用硅胶
GF,乙酸乙酯 (A.R),甲醇 (A.R),甲苯 (A.R),氯
仿(A.R),丙酮(A.R)。槲皮素及山奈酚对照品(中
国药品生物制品检定所)。
1.2仪器与装置
RE一52A型旋 转蒸 发仪 (上海亚生化 仪器厂),
WS210S型电子天平 (北京塞多利斯仪器系统有限
公司),P200Ⅱ型高压液相色谱仪(大连依利特分析
仪器有限公 司),红外光谱仪(5-DX美国尼高利),超
导核磁共振仪 (Bruker AV4O0MHZ/DRX5O0瑞士
Bruker公 司 )。
硅胶层析柱 :4.0 cm×40 cm 称取一定量硅胶 ,
加入乙酸乙酯中,不断搅拌待空气泡除去,混合均
匀。将上述吸附着 乙酸 乙酯的硅胶湿法装柱 ,不断
轻敲管壁 ,使硅胶压紧 ,保持浸泡状态 ,备用 。
1.3罗汉果黄酮的提取
提取按下列工艺进行 :罗汉果 叶一煮 沸(3次)
一 过滤一合并滤液一柱层析一水洗至无色一75 乙
醇洗脱一洗脱液干燥一粗黄酮一无水乙醇溶解一过
滤一千燥一精制黄酮。
称取破碎罗汉果叶 100 g,置人 1 000 mL圆底
烧瓶 ,再加 500 mL蒸馏水 ,煮沸 20 min,冷却过滤 ,
重复 3次,合并滤液。将滤液 以 10 mL/min的速度
过大孔吸附树脂柱 (4.0 cm×60 cm)。吸附完毕后 ,
首先用蒸馏水洗柱 ,至流出液无色 ,然后用 75 的
乙醇洗脱。洗脱液用旋转蒸发仪旋干 ,得到粗黄酮
6.0 g,颜色为灰黄。粗黄酮再经无水乙醇溶解、过
滤(重复 3次),弃残渣,将滤液干燥得浅黄色精制黄
酮 2.85 g。
1.4罗汉果黄酮的水解及黄酮甙元的分离
黄酮甙一水解一浓缩成浸膏状一 甲醇溶解一过
硅胶柱一收集洗脱液一 甲醇溶水析一过滤一 甲醇重
结晶一浅黄绿色结晶 A和浅黄色结晶 B。
称取精制黄酮 8.0 g,加入 甲醇 200 mL,盐酸
(1:1)100 mL,加热 回流水解 2 h,然后浓缩成浸膏
状 ,用甲醇溶解 。将制备好样 品的甲醇溶液加于硅
胶柱顶 ,以氯仿 :甲醇 (15:1~1:5)进行 洗脱(2
mL/min),每 25 mL收集一份 。将收集的溶液分别
用液相色谱检 验,分 别合并仅 有保 留时 间为 8.57
min、15.05 min单一峰的洗脱液,浓缩成膏状 ,将浸
膏状物加入甲醇溶解,再加入一定量的水,析出浅黄
色物质,过滤。重复上述过程 ,重结晶,最后得到 72
mg浅黄色结晶 A、41 mg结晶 B。
2 样 品分析
2.1熔点的测定
取少量结晶 A样 品,采用齐 氏熔点管熔点测定
仪进行熔点测定 ,5次测定结 果 mp:277.5℃与山
奈酚熔点相符(滑艳等,2003)。同理,结晶 B样品
测定结果 mp:316.5℃与槲皮素熔点相符(战旗等,
2000)。
2.2薄层层析分析
(1)甙元薄层层析:分别将上述两晶体及槲皮
素 、山奈酚对照品进行薄层层析分析 ,所用的展开剂
为:甲苯/氯仿/丙酮一40/25/35,实验结果证实结晶
A Rf值与山奈酚一致 ,Rf值 一0.736;结晶 B Rf值
与槲皮素一致 ,Rf值一0.520。
(2)糖的薄层层析分 析 :取 1.3中所得精制黄
酮,水解后点样鉴定黄酮甙中的糖。展开剂:正丁醇
/乙酸/乙醚/显 色剂 =:=9/6/3/1。显 色剂 :4 g二苯
胺 、4 mL苯胺 和 20 mL磷 酸 ,用丙酮 稀释 至 200
mL(于棕色瓶 中保存)。可明显鉴定有葡萄糖和 鼠
李糖 ,其 Rf值分别为 :Rf(葡萄糖)一0.55,Rf(鼠李
糖)一0.75。
【Minutes】
图 1 结晶 A色谱图
Fig.1 Crystal A (tR一 15.05 min)
2.3 HPLC分 析
将 1.4所得两晶体及槲皮素、山奈酚对照品溶
于甲醇进行 HPLC分析 ,采用保留时间定性 。
色谱条件:色谱柱:Turner YWG Cl8(5 m,
4.6 mm×250 mm);流动相 :V(甲醇):V(水):V
(磷酸)一60:40:0.3;流速 :1.0 mL/min;检测波
长:360 nm;灵敏度:0.08;柱温 :室温 。
结晶 A色谱图见图 1,结晶 B色谱图见图 2。
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2期 陈全斌等 :罗汉果叶中黄酮甙元的研究 219
结果表明结晶 A与标样山萘酚的出峰时间一
致,结晶B与标样槲皮素的出峰时间一致。
图 2 结晶 B色谱图
Fig.2 Crystal B (tR一 8.57 min)
2.4红外光谱分析
采用 KBr压片法 ,在波数为 5 000~400 cm 范
围分别对结晶 A和山奈酚对照品进行扫描,其图谱
见图3、图4,对结晶B和槲皮素对照品进行扫描,其
图谱见图 5、图 6。
结晶 A与山奈酚对 照品的红外谱 图在指纹 区
各峰的波数一致,结晶B与槲皮素对照品的红外谱
图在指纹区各峰的波数一致 。
2.5 NMR分析
(1)结晶 A C¨—NMR图谱分析 :¨ C-NMR(500
M Hz,DM SO) :l76.2(S,C-4),l63.9(S,C-7),
l6O.98(S,C一5),l59.46(S,C-4 ),157.04(S,C_9),
145.9l(S,C_2),l35.6(S,C-3),l29.5l(d,C一2 ,6 ),
4(RN).I) 36OO 320O 2XO0 24(X) 2000 l Ht)I) I 600
cm‘’
图 3 结晶 A红外光谱
Fig.3 IR Spectrum of Crystal A
IRv/cm (KBr):3398,2926,1659,1610,1560,1510,1454,1376,1306,1251,1220,1173,1125,1088,1008,977,882,832,820,797。
/一
\/
7W
,_jt/2_ ll
4000.0 3600 3200 2800 24oo 2000 l800 l600 l400 l200 1000 800 600 450
.0
cm’l
图 4 山奈酚对照品红外光谱图
Fig.4 IR Spectrum of Sample Kaempferol
IRv/cm。(KBr):3317,2813,1660,1614,1568,1505,1440,1374,1315,1257,1236,1169,1126,1089,1008,977,884,832,819,797。
122.52(S,C—l ),115.86(d,C一5 3 ),101.79(S,C_
l0),99.83(d,C一6),94.43(d,C一8)。
(2)结晶B C-NMR图谱分析:”C-NMR(500
M Hz,DMS0) :176.29(S,C一4),164.34(S,C_7),
l61.18(S,C-5),156.60(S,C一9),148.16(S,C一4 ),
147.28(s,C一2),145.52(S,C-3 ),136.18(S,C_3),
122.42(S,C—l ),120.45(S,C一6 ),l16.06(S,C-5 ),
115.52(S,C一2 ),103.47(S,C-10),98.64(S,C-6),
93.82(S,C-8)。
结晶 A、结晶 B样 品的 C¨—NMR图谱显示各化
” 钙 铊∞弘 加
5
船 铊∞ ¨ 弱
4 L :
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220 广 西 植 物 26卷
61.6
6O
56
52
48
44
E--
4O
36
32
28
24.O
3700.0 3200 2800 2400 2000 l 800 l600 l400 l200 l000 800 600 400.0
cm ’l
图 5 结晶 B的红外图谱
Fig.5 IR Spectrum of Crystal B
IRv/cm。 (KBr):3411,2851,1658,1611,1560,1520,1449,1382,1319,1262,1200,1169。
41.2
40
36
32
28
24
20
l6
l2
8.0
40oo 0 3600 3200 2800 2400 2000 l800 l600 l400 l200 l000 800 600 400 0
cm 。I
图 6 槲皮素对照品红外 图谱
Fig.6 IR Spectrum of Sample Quercitln
IR~/cm-(KBr):3409,2845,1662,1613.1562,1521,1449,1383,1319,1263,1199,1168。
学位移数值分别与山奈酚、槲皮素相同(肖宗厚,
2002)。
3 结论
实验结果表明罗汉果叶中含有黄酮甙,其甙元
为山奈酚和槲皮素,这与果实含有甙元(陈全斌等,
2003)一致。
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