全 文 ： 6 芋茎尖离体培养和快速繁殖
毕可华 赵建 萍 蒋小满 柏新付
’—1。面吾师 i 瓦物系，蝈☆264025) ． 3
摘 要 对芋优 良品种莱阳毛芋头进行茎尖培养和快速繁殖。试骑表明、外植体表面灭菌的最佳方
案是乙醇一新洁尔灭一剥幼叶一丹汞．在较软的培养基中，茎尖大于 n6 mm， 成活率 为 90％
上。 不定芽分化的虽适培养基 为 MS+BA 1(mg／L以下单位相 同)+NAA 0．2+Spm 20，其分
化率 为 100％。不定芽在 MS+BA 2+NAA0．1+Spm 50的培养基 中，可实现继代繁殖和诱导生
根一步完成，月增殖系数达 7．3，生根率 88．3％。芋试管苗穆栽于沙壤 土基中，成活率 为 9o％ 以
上，且生长健壮，根系发达。
关睦词 芋：茎尖培养：快速繁殖
In vitro shoot——tip culture and rapid propagation of
Colocasia esculenta
Bi kehua Zhao lianping Jiang Xiaoman Bai Xinfu
(Departn~nt ofBiology．YantaiTeacber~Colege．Yaltai 264025】
Abstract The methods ofshoot— tip culture and rapid propagation ofColocasia escutenla were stu—
died．The most suitable procedure for surface sterilization of expiants was；ethanol~ saponation of
cresol~ stripping tender leaves~ sublimate．On softer media，survival rate of shoot—tip．over 0．6
mm in diameter
,
was over 90％ ．The frequency of adventitious buds differentiation was 100％ on
MS medium supplemented with 1 mg／L BA．D_2 mg／L NAA and 2O mg／L spermine．The
subculture and the rooting induction were simultaneity when adventltous buds were cultured on M S
med ium supplemented with 2 mg／L BA,0．1 mg／L NAA and 50 mg／L spermine．The monthly
Goeficient of proliferation was 7．3
．
and rate of root formation was 88．3％ ．The survival rate of
planting was over 90％ after plantlets tra nsplanted in the sand soil，they grew well and had a good
root systern．
Key words taro otocasia escutenta)；shoot—tip culture：rapid propagation
芋 (Colocasia esculenta)又名芋头、芋艿，为天南星科草本植物，原产我国及印度．马来半岛等热
带地区。芋适应性广、生长强健，是世界上广为栽培的蔬菜和粮食作物 。在我国，芋的栽培历史
1998—01—09收 稿
第一作者简介：毕可华，男，1944年 j生，副教授，从事植物组织培养教学和研究工作。
山东省教委资肪项 目
一
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62 广 西 植 物 9卷
悠久，优 良品种极多，如广西荔浦芋、上海白梗芋及四川宜宾的串根芋及nJ东莱阳毛芋头 。 川 莱阳
毛芋头屈多子芋，产量高，品质好，近年其加工品出口量增加迅速 芋做为我国重要的土特产品，进
一 步发展生产与出口业具有广阔的发展前途。但长期以来，芋多采用无性繁殖方法，病毒病十分普
遍，从而严重影响 产量和品质的提高。因此，通过组织培养技术对现有名种进行脱毒复壮研究很有
必要 ¨。本试验以莱阳毛芋头为试材，对其茎尖离体培养过程 中，外植体的表面灭菌、茎尖的启
动、不定芽继代繁殖及试管苗诱导生根、移栽等进行了研究和探讨，旨在为解决芋的品种退化，开发
脱毒种源奠定基础。
1 材料和方法
供试材料为莱阳毛芋头，取自山东省莱阳市岚子乡青扬夼村。将顶芽饱满、充实的球茎，剥去其
上的鳞片毛．经自来水冲洗后，切取顶芽或侧芽进行表面灭菌。采用的灭菌剂有升汞、新洁尔灭和次
氯酸钠等，试验在联用乙醇的情况下，不同灭苗剂的效果。为进一步提高灭菌效果，本试验设计了灭
菌过程中，再剥除二层幼叶的处理 将经表面灭菌处理的芋芽 剥取 O．3～1．2 mm 大小的茎尖，接种
于 MS培养基上进行培养 不同培养阶段附加不同浓度的 BA、NAA、精胺 (Spm)及芋块茎提取
液。培养基加蔗船 30 g／L，pH值 5．8，在 1．2 kg／cm 、12l℃饱和蒸汽压下灭菌 20rain。培养温
度 25±l℃，每天光照 12h，光照强度 l 500~2 000lx。试管苗移栽前，先置于 自然散射光下开瓶炼
苗 7 d。然后移至分别盛有蛭石，河砂或砂壤土的营养钵中，用 MS大量元素营养液浇透，加盖塑料
薄膜保湿 2周。期问注意保持土温 25℃左右。待 4月下旬将成活试管苗定植于大田，蜘_大棚栽培则
定植期提前到4月上旬。
2 结果与讨论
2．1 几种消毒剂及灭菌方法比较
芋球茎生长在地下，杂菌污染严重，因此给外植体的表面灭菌带来很大困难 为了获得无菌培养
物，选择灭菌效果好，对 试材杀伤力尽可能小的药剂和灭菌方法尤为重耍 升汞等三种杀菌剂及不同
灭菌方法的试验结果见表 1 对芋芽进行表面灭菌，在联用乙醇的情况下，单用升汞 新浩尔灭或次
表 1 不同药剂及灭菌方法的效果比较 (接种 20 d)
Table l C~mpatis~hs of sterilization efect between diferent methods
and reagents (20 days after inoculating)
处理编号 药剂及方法
No-oe Reage,n1．and rae~hodof
reatment sterilization
氯酸钠等任何一种药剂『l々效果都不理想，接种 20 d污染率为 73 1％～100 0％，其 中升汞的效果略
好一些，次氯胺钠效果撮差 试验表lJ耳，将芋芽先用 7O％乙醇浸泡 5 min，然后在无菌条件下剥 2
层幼I r1 再经 0．1％升汞处理 10rain，可以明显降低污染率，如果再辅加以新洁尔灭则效果更好 说
眦
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期 毕可华等： 芋茎尖离体培养和快速繁殖 63
明在外植体灭菌过程中，除了选择适当的灭菌剂外，操作方法也十分重要。芋芽灭菌先用乙醇、新洁
尔 灭长时间浸泡，然后在无菌条件下，剥去可能灭菌 不彻底 的外部幼叶， 内部组织 再经升汞处理 ，可
以做到既灭菌彻底，又不使外植体受到大的伤害，接转后污染率较低．这种对地下器官进行表面灭
菌，其污染率稳定地控制在 43．8％ 以下的结果已属不易。
上2 茎尖成活与分化、生长的影响因子
将茎尖接种到适宜的培养基中，5 d后茎尖
明显变绿 并开始膨大生长，说明 已经成活 茎尖
成活率高低与其大小有密切关系 试验表明，茎
尖 小 于 0．3 mm 其 成 活率 很 低， 而在 大于 0．6
mm的情况下，只要剥离、接转速度较快，成活
率可达 90％ 以上 (表 2)．茎尖成梧率也与培养
基 的硬度有关。据试验，在每升培养基加琼脂
(条状 )不高于 6．5 g的情况下，利于茎尖的成
表2 茎尖大小与成活率的关系(接种 30 d)
Table 2 Relationship between size ofshoot
tip and su rvival rate
活。成活的茎尖约经 20 d后，可直接分化形成不定芽．不定芽的分化能力与培养基中激素种类、配
比及精胺 ”(Spm)朐浓度有密切关系 试验表明，BA对不定芽的分化撤为重耍。在缺乏 BA 的情
况下，不定芽fl匀分化率很低，只有 11．1％ ～15．0％ NAA 对不定芽 的分化也有重要作用，缺乏
NAA，不定芽分化率只有 56．0％～68．I％。在 BA与 NAA配合使用的情况下、不定芽的分化率可
达 75．0％ -833％。精胺 (Spm)对不定芽的分化也具有良好的影响。添加 BA、NAA，并配合使
用较低浓 度的精胺 (Spm)，不定 芽的分 化率 高达 89．5％ ～100．0％ ，说 明多胺类化台物精胺
(Spin)对促进芋芽分化与BA、NAA问具有增益效应 (表 3)．本试验芋芽分化J【l勺最佳培养基J』]MS
+BA1+NAA 0．2+Spm 20 芋不定芽的生长也能为激素和精胺 (Spm)所促进，在上述芽分化最
佳培养基中，不定芽的生 氏也较为健壮。
表 3 不同激素与精胺(s )对芽讣化的影响 (30d)
Table 3 The efectof spermine anddiferenthormones on differentiation ofbuds．
(30 days after inoculation)
2．3 继代繁殖与根诱导
将高约 1．5～2．0 Gm 的无根芽苗接转到适 当的培养基中，可以实现继代繁殖和诱导生根一步完
)精胺 (Spermine Spm)Sigma公司产品
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成。 由表 4可见， 无根芽苗在 3号培养基 中，60 d即可大量增殖并发 根。其月增殖 系数为 7．3，生 根
率 88．3％。且发根质量较好。 以后的移栽试验显示，这类苗的移栽成活率也高。上述结果表明，精
胺 (Spm)做为重要的多胺类化合物，在芋芽的增殖和不定根发生中具有重要作用，这与前人的研究
结果是一致的 C5,6 3。芋提取液在诱导芽增殖和生根方面的效果并不明显。
芋试管苗继代繁殖和诱导生根的一步完成，为今后工厂化，低成本地快繁芋脱毒试管苗打下了有
利的基础
表 4 (接种 60d)
Tab]e4 The efectofdiferentreediaonthe$1bculture and rootformat[on
ofplant]etf60days afterinoculat[on)
2．4 试管苗的移栽
当试管苗株高 4-6 cm，生根 3～5条，根长 2 cm左右时，即可进行移栽。移栽试验表明，在砂壤土
中，芋试管苗成活率为 90％，且生长健壮，根系发达。采用河砂，肥水控制难度大，试管苗成活率虽
低 而蛭石虽然移栽前期试管苗成活率较高，但后期长势明显偏弱。因此，在芋试管苗生产中，移栽
基质以价廉高效fI勺砂壤土为好。考虑移栽前期试管苗根际通透性的重要性，如果在砂壤土的基础上，
试用分层培养基，即上层为河砂，中间为砂壤土，底层铺粗砂土，效果可能更好。此外，在移栽过程
中，环境温度，尤其是基质温度也十分重要。在基质含水量较大的情况下，温度过低、过高，都会引
起试管苗烂棍 甚至整株死亡。我们认为，芋试管苗移栽过程中，基质温度以20~30℃较为适宜
试管苗移栽成恬后 40 d左右，具4～5片叶，株高达 15 cm左右时，进行病毒检测。酶呋免疫吸
附试验 (ELISA)表明，培养茎 尖小于 0,6 mm 的试管苗已不带芋花 叶病 毒 (Dasheen mosoic
virus)”，其株系脱毒率为 100％，可以做为脱毒种源利用。
参 考 文 献
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芋花叶病毒抗血清由羹国 ATCC公司提供
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