全 文 ：书广 西 植 物 Gui hai a Z3 6 565 -567 Z003 年 11 月
黄柏中总生物碱的提取及测定方法研究
陈月圆1 !李典鹏1 !高江林Z
1.
广西壮族自治区
中 国 科 学 院
广西植物研究所 广西桂林 541006 Z. 桂林三金药业股份有限公司 广西桂林 54100Z
摘 要!对黄柏中总生物碱的提取 纯化条件进行了优化研究 其提取最佳工艺为醇提取 大孔树脂吸附纯化
法 同时采用柱层析 紫外分光光度法对产品进行含量测定 并对测定方法进行了系统的方法学考察 该方
法重现性好 准确度高
关键词 黄柏 提取工艺 含量测定
中图分类号 @946 文献标识码 A 文章编号 1000-314Z Z003 06-0565-03
St udy on extraction and deter mi nation of
t ot al al kaloi d of cortex Phellodendri
CHEN Yue-yuan1 LI di an-peng1 GAO Ji ang-li nZ
1. GuangJi I nstit ute o f Bot anS GuangJi Zhuangzu Autono mous Re gion and Acade mia Sinica
Guili n 541006 Chi na Z. Guilin Sanj in Phar maceutical Co .LTD Guili n 54100Z Chi na
Abstract The arti cl e st udi ed t he extracti on process and t he purifi cati on conditi on of t he t otal al kal oi d of cortex
Phellodendri . The results show t hat t he opti mu m extracti on process i s t he al cohol extracti on macroporous
resi n absor pti on purifi cati on met hod . In additi on t he products are assayed by Col u mn Chromat ography com-
bi ned wit h UV-spectr ophot ometr y and we make a syste mati c st udy on met hodol ogy on t he Anal ysi s \et hod .
The met hod is si mpl e accurate and reli abl e .
Key words cortex Phellodendri extracti on process deter mi nati on
黄柏系芸香科 Rutaceae 植物黄皮树 Phell o-
dendron c hinense Schnei d 及黄柏树 Phell oden-
dron amurense Rupr 的干燥树皮 树皮中含有小
檗碱 Ber beri ne 木兰花碱 \agnofl ori ne 黄柏碱
Phell odendri ne 等多种生物碱及内酯 甾醇等 其
中以小檗碱为主要药效成分 中华人民共和国药典
Z000 其性寒 味苦 具有清热燥湿 泻火解表 退
虚热之功效 为了充分利用黄柏树 开发我国特产
资源 我们对黄柏中总生物碱的提取工艺进行了比
较研究 探讨出了一条理想的生产工艺 测定小檗
碱含量的方法较多 有高效毛细管电泳法 彭艳梅
1997 薄层层析-紫外分光光度法 孔少仪 Z000
TLC 法和 HPLC 法 吕林等 1990 等等 其中高效
毛细管电泳法和 HPLC 法所需仪器较昂贵 测定成
本高 而TLC 法和薄层层析-紫外分光光度法操作
繁琐 且准确度低 我们采用柱层析 紫外分光光
度法检测黄柏提取物中总生物碱的含量 并考察了
该方法的重现性 回收率 准确度等 实验证明该方
法操作简便 重现性好 准确度高
1 实验材料
仪器 UV-Z10 紫外分光光度计 日本岛津 超
声波仪 层析柱 1 c m 30 c m 上海玻璃仪器厂
试剂 中性氧化铝 100 Z00 目 上海五四农场化学
试剂厂 盐酸 95 乙醇 甲醇均为分析纯 盐酸小
檗碱对照品 中国药品生物制品检定所 A 型大孔
树脂 河北沧州产 黄柏药材 由桂林三金药业集
团科研所提供 黄柏提取物 本所植化室自制
收稿日期 Z00Z-05-17 修订日期 Z003-03-17
作者简介 陈月圆 1978- 女 广西全州人 研究实习员 从事天然产物的开发利用工作 为通讯联系人
Z 实验方法和结果
2 .1 黄柏的提取纯化工艺
Z .1 .1 工艺流程 黄柏原料 (1 >破碎 -称重 -(Z >
提取 - 过滤 -(3>滤液经不同方式分离纯化 -成
品 工艺步骤说明:(1>黄柏原料由桂林三金药业集
团科研所提供 破碎成30 目左右的样品粉末 (Z >
在提取过程中所采用的 3 种提取溶剂 分别是水~
70 乙醇~0 .3 HZSO4 溶液 提取 Z 次 每次 1 h
(3>在黄柏的提取纯化工艺中 最关键的是分离纯化
这个工序 我们采用盐析~大孔树脂吸附~乙醇沉淀
3 种纯化方法 在盐析工艺中 首先加入 Z 滑石
灰 用饱和石灰水调 p H 至10 静置 过滤后滤液用
Z5 HCl 调p H 至Z 加入 NaCl 放置 Z4 h 抽滤
干燥得成品 在大孔树脂吸附纯化工艺中 首先对
树脂型号从吸附量大小~洗脱难易程度~树脂再生处
理难易程度等方面做了选择 最后采用河北沧州产
的 A 型大孔树脂 该树脂黄柏中总生物碱吸附性
好~洗脱也很容易 上样流速控制在柱的最大流速的
1/4 先用低醇预洗 再用 70 的乙醇洗脱 减压回
收乙醇 干燥得成品 在醇沉过程中 先将提取液浓
缩至膏状 加入95 乙醇沉淀 过滤 滤液减压回收
乙醇 干燥得成品
Z .1 .Z 黄柏三种提取溶剂的综合评价 以提取300
g 黄柏原料计 原料含量以盐酸小檗碱计为3 .65
对黄柏3 种提取溶剂作综合评价(表1 >(分离纯化
用大孔树脂吸附>
表 1 不同提取溶剂的结果
Tabl e 1 Results of dif f erent extracti on sol vent
提取溶剂
Extracti on
sol vent ( >
得率
Yiel d
( >
含量
Content
( >
总提取率
Extracti on
rate( >
水 Water 8 .0 Z6 .3 55 .Z
乙醇 Et hanol 10 .1 3Z .8 84 .4
酸水 Aci d water 9 .0 18 .9 36 .6
从上表可看出 乙醇作为提取溶剂明显优于其
他溶剂
Z .1 .3 提取物总生物碱纯化 为了较好的去除杂
质~提高总生物碱的含量 我们采用了大孔树脂吸
附~盐析~沉淀等方法对黄柏提取物中总生物碱进行
分离纯化(表Z >(以醇提为提取工艺路线>
从表Z 可看出 采用大孔树脂吸附的纯化方法
的得率~总提取率高于其他方法
2 .2 黄柏中总生物碱的含量测定
Z .Z .1 标准曲线的制备 (1 >标准溶液的配置:精密
称取盐酸小檗碱对照品 5 .0 mg 置 Z5 mL 容量瓶
中 加甲醇溶解并稀释至刻度 摇匀 精密吸取该液
5 .0 mL 置Z5 ml 容量瓶中 加95 乙醇稀释至刻
度 摇匀 作为对照品母液 (Z >标准曲线的绘制:精
密吸取对照品母液1 .0 ~Z .0 ~3 .0 ~4 .0 ~5 .0 ~6 .0 mL
分别置于10 mL 容量瓶中 加入0 .1 moL/L 的盐酸
溶液稀释至刻度 摇匀 以95 乙醇为空白 在紫
外最大吸收波长 345 n m 下测定吸收值 以吸收值
A 为纵坐标 浓度 C 为横坐标 得出回归方程 A=
6 .455 8 C R=0 .999 8
Z .Z .Z 样品溶液制备 (1>黄柏提取物供试液:精密
称取提取物50 .0 mg 置于50 mL 容量瓶中 先加入
少量甲醇 超声波振荡溶解 再用甲醇稀释至刻度 摇
匀备用 (Z >黄柏药材供试液:取黄柏原料于70 80
C烘干 研碎成细粉末 过40 目筛 精密称取粉末1 .
000 g 置于100 mL 锥形瓶中 加入甲醇30 mL 超声
波振荡下提取15 mi n 过滤 滤渣重复提取Z 次 滤液
合并 甲醇定容稀释至100 mL 容量瓶中 摇匀备用
表 2 不同纯化方式结果
Tabl e Z Results of dif f erent purifi cati on conditi ons
纯化方法
Purifi cati on conditi ons
得率
Yiel d
( >
含量
Content
( >
总提取率
Extracti on
rate( >
盐析Salti ng-out 1 .75 96 .4 46 .Z
大孔树脂吸附 \acroporous res-
i n absor pti on
10 .3 30 .8 84 .4
乙醇沉淀 Et hanol preci pit ati on 7 .3 Z6 .1 5Z .Z
表 3 样品测定结果
Tabl e 3 Results of deter mi nati on of dif f erent sa mpl es
样品
Sa mpl e
黄柏原料
La w materi al
提取物 Extracti on
I I H V V V
含量Con-
tent ( >
3 .65 Z6 .8 Z6 .1 64 .7 18 .7 3Z .8 4Z .3
Z .Z .3 样品含量测定 精密吸取Z .Z .Z 项下得供试
液各5 .0 mL 置于中性氧化铝柱(5 g 湿法装柱 乙
醇预洗> 95 乙醇洗脱 收集洗脱液 置于 Z5 mL
容量瓶中 用95 乙醇稀释至刻度 摇匀 精密吸
取Z .0 mL 此液 置于 10 mL 容量瓶中 加入 0 .1
moL/L 盐酸溶液稀释至刻度 紫外345 n m 下测定
吸收度 按照标准曲线计算含量(表3>
Z .Z .4 加样回收率测定 精密称取已知含量样品
Z5 .0 mg 置于Z5 mL 容量瓶中 同时加入盐酸小檗
碱对照品Z .5 mg 甲醇超声振荡溶解 稀释至刻度
摇匀 精密吸取此液5 .0 mL 上中性氧化铝柱 按
Z. Z. 3 项下的方法操作(表4>
665 广 西 植 物 Z3 卷
表 4 加样回收率实验结果
Tabl e 4 Results of added recover y
编号
No .
加入量
Added
a mount
测得量
Found
a mount
回收率
Recover y
< >
平均回收率
Average
recover y< >
1 Z .5 Z .57 103 -
Z Z .5 Z .47 99 10Z
3 Z .5 Z .60 104
Z .Z .5 方法重现性考察 对同一样品分别按样品处
理方法和测定方法测定<表5>O
3 小结
<1>以小檗碱为指标 对黄柏 3 种提取溶剂~3
种分离纯化方法的提取物中总生物碱含量的工艺路
线的产品得率~含量及方法总提取率进行了综合评
价 总的来说 醇提取~大孔树脂吸附方法明显优于
其他方法O
迅速 方法准确度好 稳定性~重现性好O适用于黄
柏中总生物碱工业化生产中的含量控制O
表 5 重现性实验结果
Tabl e 5 Results of reproduci bilit y t ests
编号
No .
含量
Content < >
平均含量
Average content < >
CV
< >
1 33 .4 - -
Z 33 .Z - -
3 33 .7 33 .3 0 .7
4 33 .1 - -
5 33 .Z - -
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7656 期 陈月圆等:黄柏中总生物碱的提取及测定方法研究
黄柏中总生物碱的提取及测定方法研究
作者： 陈月圆， 李典鹏， 高江林
作者单位： 桂林三金药业股份有限公司,广西桂林,541002
刊名： 广西植物
英文刊名： GUIHAIA
年，卷(期)： 2003,23(6)
被引用次数： 47次
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引用本文格式：陈月圆.李典鹏.高江林 黄柏中总生物碱的提取及测定方法研究[期刊论文]-广西植物 2003(6)