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6-BA、IBA、2;4-D对杖藤组培增殖的影响



全 文 :广 西 植 物 Guihaia 23(1):49— 51 2003 年 1 月
6-BA、IBA、2,4一D对杖藤组培增殖的影响
曾炳山,刘 英 ,许煌灿 ,尹光天
(中国林业科学研究院热带林业研究所 ,广东广州 510520)
摘 要 :研究了 6-BA、IBA和 2,4一D对杖藤组培物增殖的影响。结果表明,6-BA对增殖芽数 、丛芽率 和母芽
高均有显著的作用 ,IBA和 2,4一D仅对增殖芽数有显著影响。适宜于增殖培 养的激素浓 度分别 为 6-BA 4.0
mg/L,IBA 0.25 mg/L,2,4一D 0.25 mg/L。以此激素浓度组合 ,连续增殖培养 6~7代后 ,平均的增殖芽数可
稳定在 1O个左右。
关键词 :杖藤 ;植物激素 ;丛芽诱导;继代增殖
中图分类号 :$723.1 文献标识码:A 文章编号 :1000—3142(2003)01—0049—03
Influence of 6-BA,IBA and 2,4一D on proliferation
of Calamus rhabdocladus0C a
ZENG Bing—shan,LIU Ying,XU Huang—can,YIN Guang—tian
(The Research Institute of Tropical Forestry,Guangzhou 510520,China)
Abstract:This paper deals with the influence of 6-BA(6-benzylaminopurine),IBA(indolebutyric acid)and 2,4一
D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)on in vitro proliferation of Calamus rhabdocladus Burret.The experimen—
tal results show that 6-BA has eminent influence on proliferation rate of explants,shoot amount proliferated
per explant and shoot height.IBA and 2,4-D only have eminent influence on shoot amount proliferated per ex—
plant.The appropriate concentrations of 6-BA,IBA and 2,4-D in proliferation medium of C.rhabdocladus are
4.0 mg/L,0.25 mg/L and 0.25 mg/L respectively.After seven subcultures on medium supplemented with
appropriate concentration of plant growth regulators,shoot amount proliferated per propagule can reach as
high as 11.33.
Key words:Calamus rhabdocladus Burret;plant growth regulator;proliferation;subculture.
杖藤(Calamus rhabdocladus Burret)又名华南
省藤 ,是我 国华南地 区的商 品藤种 之一(1]。上世纪
7O年代以来,我国棕榈藤资源长期处于过度采收状
态,华南省藤天然资源也遭到严重破坏 ,原藤产量急
剧下 降,每 年 需 从 东 南 亚 进 口原 藤 30 000 t以
上( 。要实现我国原藤 自给的目标,必须推广栽培
棕榈藤,而大面积栽培的种苗问题又需通过组培快
繁来解决。为此,我们开展 了杖藤组织培养研究。
诱导增殖是棕榈藤组培的难点之一[3),现将植物激
素对杖藤组培增殖影响的研究结果报道如下。
1 试验材料与方法
1.1试验材料和培养条件
种胚外植体采 自鼎湖山自然保护区。采集时,
果实已显现形态成熟,种皮由黄变黑,胚乳变硬。表
面消毒前,除去果皮果肉,洗净种子。消毒方法为
75 酒精 1 min+O.1% HgC12 15 min,无菌水冲洗
收稿 日期 :2001一l1—27; 修订 日期 :2002—03—18
基金项目:国家自然科学基金“棕榈藤萌蘖机理研究”的研究内容之一(39470957)
作者简介:曾炳山(1 969一),男,江西井冈山人 ,硕士,副研究员,从事热带林木组培快繁和基因转化研究。
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50 广 西 植 物 23卷
3~4次,每次 10 min,而后取出种胚进行丛芽诱导
的激素试验。
培养条件为培 养基 pH5.8±0.2、培养温度 28
±2 DC,每天光照 i0 h,光照强度 2 000 ix。基本培
养基为改 良的 MS培养基 。
1.2试验方法
1.2.1试验设计 选取其它藤类植物组培常用的植
物生长调节剂 6-BA、IBA和 2,4一D为参试激素,各
设置 3个浓度水平 ,6-BA 为 3.0 mg/L、4.0 mg/L、
5.0 mg/L,IBA为 0.1 mg/L、0.25,mg/L、0.5 rag/
L,2,4_D为 0.25 mg/L、0.5 mg/L、0.25 mg/L。采
用正交试验设计 L9(34),6-BA安排在第一列,IBA
安排在第-N,2,4-D安排在第四列,第三列空。每
处理组合重复 15瓶,每瓶接 3个外植体。受污染的
影响,试验结束时可测定的重复数不等,按随机均分
瓶数的原则,以 2个重复统计。
1.2.2试验观察 培养 45 d后 ,测定反映增殖速度
的增殖芽数和反映诱导效率的丛芽率。藤类离体芽
的高度对壮苗和生根有显著影响[ 53,因而对芽苗
高度也进行观测和分析。选出激素浓度的最佳水平
组合后,配制培养基对杖藤进行连续的继代培养,连
续观察增殖芽数 7代,验证试验结果。
2 结果与分析
2.1激素浓度与丛芽诱导
正交试验的丛芽率的方差分析结果表明[们,细
胞分裂素 6-BA浓度水平间的丛芽率差异显著,而
IBA和 2,4一D浓度水平间的丛芽率没有显著差异。
6-BA浓度为 3.0 mg/L时,丛芽率仅 1.28 9/6,而浓
度为 4.0 mg/L时,丛芽率提高至 5.53%,但浓度进
一 步提高到 5.0 mg/L时,丛芽率为5.60 ,没有明
显的提高。多重 比较显示,6-BA浓度为 4.0 mg/L
和 5.0 mg/L时的丛芽率显著高于浓度为 3.0 rng/
L时的丛芽率。因而,从诱导效率来讲,6-BA浓度
应为 4.O~5.0 mg/L。
表 1 不 同浓度的 6-BA,IBA,2,4-D对杖藤培养物丛芽诱导的影响( )
Table 1 Clump shoot percentage at different hormone concentrations and multiple comparison
表 2 不同浓度的 6-BA,IBA,2,4-D对杖藤培养物增殖芽数的影响
Table 2 Number of shoots proliferated by embryo at different hormone concentrations and multiple comparison
2.2激素浓度与丛芽数量
丛芽数量的方差分析结果表明 6-BA、IBA和
2,4一D对种胚增殖芽的数量均有显著的影响,其中
6-BA的影响达极显著水平。随着 6-BA浓度的提
高,芽的增殖数量显著上升,以 5.0 mg/L时增殖芽
数最多。IBA三个浓度水平间的增殖芽数也均有显
著差异,以中间浓度 0.25 mg/L时增殖 的芽数最
多。2,4一D则低 浓度时增 殖的芽 数最 多。因而 ,从
增殖芽数来看 ,6-BA的适宜浓度为 5.0 mg/L,次适
宜浓度为 4.0 mg/L,IBA 的最适浓度 为 0.25 rng/
L,2,4一D的最适浓度也为 0.25 mg/L。
2.3激素浓度与母芽高生长
据单叶省藤(C.simplicifolius C.F.Wei)、短
叶省藤(C.egregius Burret)和黄藤 (D.margaritae
(Hance)Becc.)的研究报道,离体芽的高度对壮苗
和生根有显著的影响,芽苗高度大于 2.0 cm时才有
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1期 曾炳 山等 :6-BA、IBA、2,4-D对杖藤组培增殖的影响 51
利于壮苗和生根(4-v-5 83。芽苗高度的方差分析结果
表明,6-BA浓度对芽苗高度有显著 影响 ,而 IBA 和
2,4一D三个浓度水平间的芽苗高度无显著差异。当
6-BA浓度增 至 5.0 mg/L时 ,芽苗 高度仅 为 1.91
cm,显著小于浓度 为 0.4 mg/L和 0.3 mg/L时的
芽苗高度。6-BA浓度为 5.0 mg/L时增殖芽数最
多,但芽苗过小不利于壮苗和生根,因而应选择 4.0
mg/L作为 6一BA的最适浓度。
2.4继代增殖
配制 6一BA、IBA和 2,4一D浓度分别为 4.0 rag/
L、0.25 mg/L、0.25 mg/L的培养基,对激素试验后
的芽苗进行连续的继代培养,增殖芽数和丛芽率的
测定结果如表 7。从 表 7可 以看 出,随着继代次数
的增加 ,丛芽率和增殖芽数不 断增加 ,至第 6代后 ,
增殖芽数稳定在 10个左 右 ,丛 芽率稳定 在 95 左
右,完全可以满足组培快繁的要求。
表 3 不同浓度的 6-BA,IBA,2,4-D对杖藤培养物高生长的影响
Table 3 Shoot height at different hormone concentrations and multiple comparison
表 4 连续继代杖藤培养物的增殖芽数和丛芽率
Table 4 Number of proliferated shoots and clump shoot percentage at successive subcultures
3 小 结
(1)细胞分裂素 6-BA对 丛芽率、增殖芽数和母
芽高均有显著影响。6-BA浓度为 4.0 mg/L和 5.0
mg/I 时的丛芽率显著高于浓度为 3.0 mg/L时的
丛芽率。增殖芽数则以 5.0 mg/L时最大,4.0 rag/
L时适中,3.0 mg/L时最低 。但 5.0 mg/L时芽苗
高度仅 1.92 cm,显著低于 4.0 mg/L以下的芽苗高
度。芽苗高度低于 2.0 cm不利于壮苗和生根,因而
6一BA的适宜浓度水平为 4.0 mg/L。
(2)IBA三个浓度水平间的丛芽率和芽苗高度
无显著差异,但水平间的增殖芽数有差异显著,其最
适浓度为 0.25 mg/L。
(3)与 IBA相 同,2,4-D的三个浓度水 平间,仅
增殖芽数差异显著,其最适浓度为 0.25 mg/L。
(4)以 6一BA、IBA和 2,4一D三者 的最适 浓度配
制增殖培养基 ,对杖藤进行连续的继代培养,增殖芽
数和丛芽率逐步提高,至 6~7代后,增殖芽数稳定
在 10个左右,丛芽率稳定在 95 左右,达到组培快
繁的要求。
参考文献:
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卷 1分册)EM].北京:科学出版社,1991.
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(4)刘 英 ,曾炳山 ,许煌灿 ,等.棕榈藤继代培养增殖
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(63林德光.生物统计的数学原理[M].沈阳:辽宁人民
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(83刘 英 ,曾炳山 ,尹光天.黄藤继代增殖和成苗的繁
殖体选择[J].林业科学研究,1998,11(2):152一
】55.
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