全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 26(1)：74— 75 2006年 1月
矮牵牛组织培养及变异苗的 RAPD分析
张汉尧，刘小珍，周 健，龚秀会，杨宇明
(西南林学院 资源学院，云南 昆明 650224)
摘 要：探索了矮牵牛组织培养的配方 ，对组培过程 中产生的表型变异植株进行了 DNA水平的分析。并对
矮牵牛叶片组织培养及产生变异的影响因素等进行探讨。
关键词 ：矮牵牛；组织培养 ；变异苗 ；RAPD
中图分类号：Q943．1 文献标识码：A 文章编号：1000—3142(2006)01—0074—02
Study 0n tissue culture and RAPD analysis 0f
wiating ；eedling ’Petunie h ybridavar s ot Y
ZHANG Han—yao，LIU Xiao—zhen，ZHOU Jian，
GONG Xiu—hui．YANG Yu—ming
(Department of Forestry，SouthzL-est Forestry Colege，Kunming 650224，China)
Abstract：The prescription of the tissue culture of Petunie hybrida and the DNA Ievel of phenotypic variation seed
lings produced by tissue were discussed．W e also studied~actors ef{ecting the variation of P．hybrida by tissue culture．
Key words：Petunie hybrida；tissue culture；variating seedling；RAPD
矮牵牛花大色艳且花色丰富 ，为长势旺盛 的装
饰性花卉，而且还能做到周年繁殖上市 ，可以广泛用
于花坛布置、花槽配置、景点摆设、窗台点缀、家庭装
饰，所以销售量大 ，种植面广，有着很大的发展空问。
矮牵牛的常规育苗采用种子繁殖，但种子繁殖的实
生苗易产生变异 ，无法将其性状固定持续下去。对
于性状好的杂种 F 代 ，通过组织培养，可以用很少
的植物材料，在短时期内生产出大量整齐、健壮、性
状稳定的植株来(崔德才等，2003)。本研究初步报
道了矮牵牛组织培养的方法 ，并对组培过程中产生
的表型变异植株进行 了 DNA 水平 的分 析，也对矮
牵牛组培产生变异 的规律及原因作了初步的探索。
1 拣料与方法
1．1材料
红花单瓣矮牵牛。组织培养药品购自各国内厂
家。PCR扩增所用引物为加拿大 Sangon公司生产
的十聚体核苷酸 ，dN YPs、TaqDNA聚合酶购 自美
国 MBI公司，琼脂糖从 Spanish进 口。
1。2方法
在花盆内选取生长健壮无病虫害的幼嫩叶片和
茎段 ，用洗衣粉浸泡 3～5 min后 ，用 自来水清洗，细
流水冲洗过夜 ；将经过预处理的植株组织块置于白
瓷缸 内，注入 0．1 升汞溶液 ，用量 以盖过材料 为
宜 ，再加 2滴吐温 ，盖上盖 ，浸泡 lO～l5 min，期间
摇动 2～3次；消毒处理后 ，将瓶盖打开 ，将消毒液倒
出，注入适量的无菌蒸馏水 ，再盖上盖，摇动数次 ，将
水倒掉，如此重复 3次 ；将材料取 出，置于一个已灭
过菌的培养皿中，用经过火焰灼烧并冷却的剪刀和
镊子将叶片切成 l cm 大小 ，带腋芽的茎段切割成
l cm长短 ，接种到相应培养基上。
培养条件：实验用基本培养基为 MS，附加不同
种类 和浓度 的激素 ，增殖 培养基 为 MS+6-BA(1
收稿 日期：2004—1O一26 修回日期：2005—04—15
基金项目：国家“973”项 目经费资助(2003 CB 45102)[Supported by the National“973”Plan of China(2003 CB,15102)]。
作者简介：张汉尧(1975一)，男，福建永定县人 ，在职博士，主要从事植物生物技术领域的教学科研工作。
通讯作者(Author for c。rresp。ndence)，E-mail：~yymbamb@yahoo．corn．cn>．
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112 广 西 植 物 26卷
心作用，临床作局部抗感染剂 ，局部止痒和危重病人
的急救剂 (国家 医药 管 理局 中草药 情 报 中心 站，
1986)；长叶薄荷酮有很强 的抗炎作用(国家医药管
理局中草药情报 中心站，1986)；桉油醇具有解热、抗
炎、抗菌 、平喘和镇痛作 用，与樟脑等成分组成复方
制剂治疗头疼(国家医药管理局中草药情报中心站 ，
1986)；a一水芹烯对支气管有温和的刺激作用，制成
吸入剂用作祛痰剂(国家医药管理局中草药情报中
心站，1986)，这为进一步开发利用提供了依据 。
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数越多，变异率就越大。在增殖芽继代培育过程，如
果激素使用浓度偏高，也会产生变异。因此 ，在商品
化生产中增殖芽培育过程若发现有变异及不正常的
芽体必须坚决剔除，把变异苗减少到最低限度。变
异植株绝大多数失去商品价值。其变异表现症状主
要有 ：(1)叶片变小 ，叶面不规则凹凸；(2)叶片扭曲，
部分缺绿呈花叶状 。
另外，我们的结果说 明：表型的变化的确有一部
分是由 DNA水平上的碱基变化所引起 的。我们甚
至检测到了正常植 株 中，有个别植株 也有 DNA 条
带上的变化 。也就 是说 即使表型未发生变化 ，但在
一 些位点的碱基也发生了变化。所以外植体的建立
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和继代增殖培养的方式方法应严格控制 ，才能保证
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