全 文 :中国生态农业学报 2011年 7月 第 19卷 第 4期
Chinese Journal of Eco-Agriculture, Jul. 2011, 19(4): 902−906
* 江苏省引智项目(20093200147)资助
骆爱兰(1972~), 女, 硕士, 讲师, 主要从事农药残留分析、生物测定技术及环境安全研究。E-mail: lallal2002@ycit.cn
收稿日期: 2010-11-17 接受日期: 2011-03-03
DOI: 10.3724/SP.J.1011.2011.00902
氟啶胺对土壤中蔗糖酶活性及呼吸作用的影响*
骆爱兰 余向阳
(1. 盐城工学院化学与生物工程学院 盐城 224003; 2. 江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所 南京 210014)
摘 要 使用农药控制作物害虫和疾病可提高农业生产力, 然而农药的使用对土壤造成的污染已成为巨大且
日益严重的问题。重复、广泛使用的农药进入土壤影响土壤生物、生物代谢及其生物活性, 已成为农业生态
环境重要的研究内容。为了更好地了解氟啶胺对土壤微生物活性和土壤质量等潜在环境危险, 采用实验室模
拟的方法研究了氟啶胺农药残留动态, 以及氟啶胺对土壤呼吸强度、蔗糖酶活性及其动力学和热力学特征参
数的影响。结果表明: 高剂量(100 mg·kg−1)氟啶胺在土壤的降解速率常数最大, 氟啶胺在土壤中的半衰期范围
为 0.38~0.59 d。高剂量(50 mg·kg−1、100 mg·kg−1和 1 000 mg·kg−1)氟啶胺对土壤蔗糖酶表现出不同程度的抑制
作用; 低剂量(1 mg·kg−1、5 mg·kg−1)处理表现为抑制−激活−抑制作用, 且波动范围较大; 10 mg·kg−1氟啶胺对土
壤蔗糖酶前期表现为抑制、后期表现为激活作用, 波动范围较大。不同浓度氟啶胺胁迫下蔗糖酶促反应的
Michaelis常数(Km)和最大反应速率(Vmax)发生改变, 但变化不大。土壤中氟啶胺浓度为 1 mg·kg−1时蔗糖酶所需
的活化能(Ea)比 CK高, 其他浓度都低于 CK; 5 mg·kg−1、10 mg·kg−1、50 mg·kg−1、100 mg·kg−1和 1 000 mg·kg−1
所需的活化焓变(ΔH)随氟啶胺的浓度降低而变小; 在相同温度下蔗糖酶的活化熵变(ΔS)表现为: 1 mg·kg−1
剂量氟啶胺对土壤微生物呼吸作用的影响表现为随时间变化呈现抑制−激活趋势, 高低剂量表现为抑制作用。
土壤微生物的呼吸活性因氟啶胺的加入而产生波动。本研究结果有助于进一步分析研究受农药污染土壤的质
量和酶活之间的相关性。
关键词 氟啶胺 残留动态 蔗糖酶 动力学 热力学 土壤微生物 呼吸作用
中图分类号: S154.1 文献标识码: A 文章编号: 1671-3990(2011)04-0902-05
Effects of fluazinam on soil sucrase activitiy and respiration
LUO Ai-Lan, YU Xiang-Yang
(School of Bio-chemical Engineering, Yancheng Institute of Technology, Yancheng 224003, China; Institute of
Food Safety, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China)
Abstract Despite beneficial impacts such as improving and sterilizing agricultural products via pest and disease control, pesticide
pollution of soils continues to be a huge and growing environmental problem. Repeated and extensive application of pesticides
ultimately percolates into the soil, which in turn interact with soil organisms and affect their metabolic activities. Biological activi-
ties under continuous pesticide inputs constitute an important aspect of agro-ecological research. To better understand the potential
environmental risks of pesticide fluazinam on soil microbial activity and soil quality, the residues and degradation dynamics of
fluazinam in soils were determined in a laboratory simulation method. The effects of fluazinam pollution on soil basal respiration,
and kinetic and thermodynamic parameters of sucrase were analyzed. Significant fluazinam degradation rates were noted under
higher application rates of fluazinam. The half-life of soil fluazinam degradation was 0.38~0.59 d. With increasing concentrations
of fluazinam (50 mg·kg−1, 100 mg·kg−1 and 1 000 mg·kg−1), the degrees of inhibition effect on sucrase activity increased. However,
inhibition-activation-inhibition curves were fitted at lower concentration (1 mg·kg−1, 5 mg·kg−1) treatments with large ranges of
fluctuating. 10 mg·kg−1 of fluazinam initially inhibited and later enhanced soil sucrase activity with a great fluctuation. The maxi-
mum rate of enzymatic reaction (Vmax) of sucrase was noted along with different Michaelis constant (Km) under different fluazinam
concentrations. The activation energy (Ea) of sucrose was higher under 1 mg·kg−1 fluazinam than that under the control (CK), but
第 4期 骆爱兰等: 氟啶胺对土壤中蔗糖酶活性及呼吸作用的影响 903
lower under other fluazinam concentrations than under CK. Activation enthalpy change (ΔH) decreased with increasing fluazinam
concentrations (from 5 mg·kg−1 to 1 000 mg·kg−1). Sucrase activation entropy change (ΔS) under fluazinam concentration of 1
mg·kg−1 was lower than under CK for the same temperature conditions, though insignificant changes in free energy of activation
(ΔG). The maximum velocity constant (Q10) was in the thermodynamic temperature range of 320~330 K, and minimum in 290~300
K. Soil microbial basal respiration initially decreased, followed by a increase under lower fluazinam concentration treatments.
However, inhibition effects were noted in higher concentration treatments all through incubation period. The findings had useful
applications in future research on enzymatic mechanisms in relation to pesticides pollution and soil integrity.
Key words Fluazinam, Degradation dynamics, Sucrase, Kinetics, Thermodynamics, Soil microbe, Respiration
(Received Nov. 17, 2010; accepted Mar. 3, 2011)
氟啶胺是由日本石原株式会社开发的 2,6-二硝
基苯胺类低毒杀菌剂 , 是一种良好的保护性杀菌
剂。对交链孢属、葡萄孢属、疫霉属、单轴霉属和
核盘霉菌等都非常有效 [1−4], 对食植性螨类和十字
花科植物根肿病有良好预防效果 [5−6], 常用于防治
辣椒疫病、马铃薯和番茄晚疫病等[7]。但其环境毒
性令人担忧, 2003 年日本有研究表明, 接触环境残
留的氟啶胺可引发哮喘病和皮炎等破坏人类免疫系
统的疾病[8]。目前有关氟啶胺对土壤环境的影响在
国际上还鲜见报道。本文的研究对象—— 土壤蔗糖
酶广泛存在于土壤中, 直接参与土壤有机质的代谢
过程, 它不仅能够表征土壤生物学活性强度, 也可
作为评价土壤熟化程度和土壤肥力水平的一个指
标。因此通过探讨氟啶胺在土壤中的残留动态及其
对土壤蔗糖酶活性和微生物的影响, 可以比较全面
地了解氟啶胺对土壤酶的影响以及可能对土壤环境
生态造成的危害。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试氟啶胺(98.5%)购于农业部环境保护科研
监测所。称取氟啶胺标样 0.05 g(精确至 0.000 2 g),
置于 100 mL 容量瓶中, 加丙酮稀释至刻度, 摇匀
备用。试验所用土壤于 3月 23日采自江苏盐城工学
院, 采集深度为 0~10 cm。将土样放置在阴凉通风处
风干, 研钵磨细, 过筛(140 目), 四分法使土样混合
均匀, 放置在塑料瓶中保存备用。常规方法[9]测定化
学性质, 土壤含有机质 5.85 g·kg−1、全氮 0.76 g·kg−1、
全钾 0.32 g·kg−1、全磷 0.75 g·kg−1, pH 8.28。
1.2 土壤培养方法
试验设 7个处理, 即称取 1 kg供试土壤放于直径
25 cm、深 10 cm的圆形水槽内, 分别添加不同浓度
的氟啶胺标准溶液, 使其质量分数分别为 0 mg·kg−1、
1 mg·kg−1、5 mg·kg−1、10 mg·kg−1、50 mg·kg−1、100
mg·kg−1和 1 000 mg·kg−1, 每个处理设 3次重复。加
水使土壤含水量达到最大持水量的 60%, 混匀封口,
恒温(37 )℃ 培养, 在培养期间适当补水使土壤持水
量保持不变。分别在培养 0 d、1 d、3 d、7 d、14 d、
21 d、28 d和 35 d时取样, 采用随机取样法, 每次取
的土样放在室温风干待测。
1.3 指标测定方法
土壤蔗糖酶活性测定采用 3,5-二硝基水杨酸比
色法 [10]。以蔗糖为基质 , 根据酶促产物葡萄糖与
3, 5-二硝基水杨酸生成有色化合物 3-氨基-5-硝基水
杨酸的量进行比色测定。同时做标准曲线、无基质
对照和无土壤对照试验。
动力学测定: 取 5.0 g土壤在不同农药浓度下分
别加入 0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、
10.0 mL、15.0 mL、20.0 mL、25.0 mL的 8%蔗糖溶
液, 5 mL pH为 5.5的磷酸缓冲溶液和 5滴甲苯。摇
匀混合物后, 放入恒温箱, 在 37 ℃下培养 24 h, 测
定蔗糖酶活性。
热力学测定: 5.0 g土壤在不同农药浓度下加入
15 mL的 8%蔗糖溶液, 5 mL pH为 5.5的磷酸缓冲溶
液和 5滴甲苯。摇匀后放入恒温箱, 在 7 ℃、27 ℃、
47 ℃、57 ℃、67 ℃、77 ℃下分别培养 24 h, 测定
蔗糖酶活性。
土壤中氟啶胺残留测定参见文献[11]。土壤呼吸
强度的测定方法选用密闭静置测 CO2 法[12]。
1.4 酶促反应参数计算
1.4.1 土壤酶促反应动力学参数计算
根据经典米氏方程:
[ ]
[ ]max0 m
V S
V
K S
×= + (1)
经数学变换后得到:
[ ]
[ ]
[ ] [ ]0 0 max1 1ln
m m
S S S V
t S K t K
−= − × + (2)
式中, t为酶促反应时间; [S0]和[S]分别为初始和 t时
间的底物浓度。将不同时间的 [ ][ ]0
1 ln
S
t S
和 [ ] [ ][ ]0
S S
S
− 进
行拟合, 即可求得米氏常数 Km和最大酶促反应速度
Vmax。
904 中国生态农业学报 2011 第 19卷
1.4.2 土壤酶酶促反应热力学参数计算
活化自由能: ln RTG RT
hkN
⎛ ⎞Δ = ⎜ ⎟⎝ ⎠ (3)
活化焓: aH E RTΔ = − (4)
活化熵: H GS
T
Δ −ΔΔ = (5)
式中, T为开氏温度(K), k为温度 T时的反应速度常
数, R为气体常数 8.314 J·mol−1·K−1, N为阿伏伽德罗
常数(6.023×1023 个分子数 ·mol−1), h 为普朗克常数
(6.626×10−34 J·S−1)。
2 结果与分析
2.1 氟啶胺在土壤中的降解速率常数和半衰期
表 1 结果表明, 不同初始浓度的氟啶胺在土壤环
境中均明显发生降解, 随着氟啶胺初始浓度的增加, 其
降解速率常数逐渐变大, 即初始浓度越大, 氟啶胺的降
解半衰期越短, 这可能是由于随着氟啶胺浓度的增加,
碳源、氮源增加, 从而加速土壤微生物降解作用。
表1 不同浓度氟啶胺处理下土壤蔗糖酶动力学参数
Table 1 Kinetics parameters of sucrase in tested soils under
different fluazinam concentrations
氟啶胺浓度
Fluazinam
concentration
(mg·kg−1)
速率常数
Rate constant
(d−1)
半衰期
Half-life
(d)
动力学方程
Kinetic equation
R2
1 1.382 0.51 y=−1.383x+1.948 0.954 5
5 1.178 0.59 y=−1.178x+0.724 0.890 1
10 1.181 0.58 y=−1.181x+0.639 0.860 0
50 1.655 0.42 y=−1.655x+2.092 0.794 5
100 1.829 0.38 y=−1.829x+2.752 0.795 4
2.2 氟啶胺胁迫对蔗糖酶活性的影响
由图 1可以看出, 添加 50 mg·kg−1、100 mg·kg−1、
1 000 mg·kg−1氟啶胺的土壤蔗糖酶活性影响的变化
规律基本一致, 在 35 d内对蔗糖酶表现出反复性抑
制作用, 前期(1~3 d)和后期(28~35 d)变化幅度比较
大, 具体变化幅度与质量分数之间未发现明显相关
性。添加 1 mg·kg−1、5 mg·kg−1、10 mg·kg−1氟啶胺
对土壤蔗糖酶活性在 1~3 d表现为抑制率降低阶段。
添加 1 mg·kg−1氟啶胺的处理在培养过程中出现激活
作用, 在 3~14 d出现反复性激活作用, 14~28 d表现
出震荡性抑制作用, 在 28~35 d抑制作用降低; 添加
5 mg·kg−1氟啶胺的处理在 3~14 d出现反复性抑制作
用, 在 14~21 d表现为震荡性激活作用, 在 21~35 d
出现反复性抑制作用; 添加 10 mg·kg−1 氟啶胺的处
理在 3~14 d出现反复性抑制作用, 在 14~35 d表现
出反复性激活作用; 具体变化幅度与氟啶胺浓度之
间未表现出明显相关性。在 35 d, 添加 10 mg·kg−1、
50 mg·kg−1、100 mg·kg−1、1 000 mg·kg−1氟啶胺的土
壤蔗糖酶抑制率均未恢复至对照水平 , 添加 1
mg·kg−1 氟啶胺的土壤蔗糖酶激活率也未恢复至对
照水平。初步判断氟啶胺对蔗糖酶活性的作用时间
应该在 35 d 以上。
图 1 不同浓度氟啶胺处理对土壤蔗糖酶活性的抑制率
Fig. 1 Inhibition rates of different fluazinam concentra-
tions on sucrase activity in tested soils
2.3 氟啶胺对蔗糖酶动力学参数的影响
1/Km 可以近似表示酶对底物亲和力的大小 ,
1/Km 愈大亲和力愈大, Km 愈大则亲和力愈小。Vmax
为蔗糖酶完全被底物饱和时的最大反应速率。
Vmax/Km指氟啶胺胁迫下蔗糖酶促反应的初速度。由
表 2 可以发现, 不同浓度氟啶胺胁迫下蔗糖酶促反
应的 Km和 Vmax发生改变。在 10 mg·kg−1氟啶胺胁迫
下, 蔗糖酶对底物的亲和力最小, 而 100 mg·kg−1氟
啶胺胁迫下 , 蔗糖酶对底物的亲和力最大。由
Vmax/Km 可以看出, 在不同浓度氟啶胺胁迫下蔗糖酶
促反应的初速度变化不大。
表2 不同浓度氟啶胺处理的土壤蔗糖酶动力学参数
Table 2 Kinetic parameters of sucrase in tested soils under different fluazinam concentrations
氟啶胺浓度 Fluazinam concentration (mg·kg−1) y=β1×x+β01) 相关系数 Correlation coefficient Km2) Vmax3) Vmax/Km
CK y=0.320 0x+1.383 5 0.92 0.231 3 0.722 8 3.125
1 y=0.315 0x+1.326 9 0.88 0.237 4 0.753 6 3.174
5 y=0.337 5x+1.377 9 0.96 0.243 3 0.724 7 2.979
10 y=0.327 5x+1.269 0 0.89 0.258 1 0.788 0 3.053
50 y=0.297 9x+1.385 0 0.85 0.215 1 0.722 0 3.357
100 y=0.300 1x+1.467 6 0.79 0.205 2 0.681 4 3.321
1 000 y=0.290 1x +1.396 4 0.82 0.207 7 0.716 1 3.448
1) β1=Km/Vmax, β0=1/Vmax.. 2) Km为蔗糖酶的特性常数, 也被称为米氏常数 Km is the special parameter of sucrase, also be called Michaelis constant;
3)Vmax为蔗糖酶完全被底物饱和时的最大反应速率 Vmax is the maximum rate of activity when all enzymes are substrate-saturated;下同 The same below.
第 4期 骆爱兰等: 氟啶胺对土壤中蔗糖酶活性及呼吸作用的影响 905
2.4 氟啶胺对蔗糖酶热力学参数的影响
由图 2 可知, 不同浓度氟啶胺胁迫下蔗糖酶活
性随温度升高呈先升后降趋势。开氏温度为 330 K
时蔗糖酶活性升到最高。可以得出蔗糖酶的最适宜
温度为 330 K。
图2 不同浓度氟啶胺处理下温度对土壤蔗糖酶活性的影响
Fig. 2 Effects of thermodynamic temperature on sucrase ac-
tivity in tested soils under different fluazinam concentrations
Ea 是指化学反应中, 由反应物分子到达活化分
子所需的最小能量。由表 3 可以看出, 不同浓度氟
啶胺处理中, 土壤蔗糖酶 Ea值表现为: 1 mg·kg−1>50
mg·kg−1>5mg·kg−1>100 mg·kg−1>10 mg·kg−1>1 000
mg·kg−1, 说明高浓度条件下有利于酶−底物络合物
的形成, 从而加速了土壤生化反应进程及氮、磷营
养元素的转化。
ΔH 通常用以表征酶的活性部位与反应物发生
互补时从外界获取的能量。从表 3可知, 1 mg·kg−1氟
啶胺胁迫下蔗糖酶的 ΔH 高于 CK, 其他浓度氟啶胺
胁迫下蔗糖酶的 ΔH低于 CK。氟啶胺浓度在 1 mg·kg−1
时, 酶的活性部位与反应物发生互补时从外界所获
取的能量大, 说明蔗糖酶难与底物结合; 在其他氟
啶胺浓度时, 酶的活性部位与反应物发生互补时从
外界所获取的小, 说明蔗糖酶易与底物结合。
ΔG 是酶促反应自发进行可能性的量度, ΔG 值
越小, 酶促反应进行的可能性越大, ΔG 值小于零时
反应可自发进行。由表 4 可以看出各浓度氟啶胺胁
迫下蔗糖酶的 ΔG>0, 说明土壤蔗糖酶形成活化络
合物的过程不能自发进行。在同一温度下, 蔗糖酶
的活化自由能变化差异较小, 表明同一温度下氟啶
胺对酶促反应活化自由能的影响不大。
ΔS 是表征实现过渡态可能性的量度, ΔS 越小,
反应物在酶活性中心定向有序性越大, 酶促反应越
强。由表 4得出, 不同浓度氟啶胺处理蔗糖酶的 ΔS<0,
说明酶与反应物形成活化络和物的过程使体系有序
性增强。不同浓度氟啶胺处理的蔗糖酶 ΔS值在 290
K时最大, 说明在 290 K时, 蔗糖酶活性中心定向有
序性达到最大。在同一温度下, 仅 1 mg·kg−1处理蔗糖
酶 ΔS
表 3 不同浓度氟啶胺处理的土壤蔗糖酶活化能(Ea)和土壤蔗糖酶焓变(ΔH)
Table 3 Activation energy (Ea) and enthalpy change (ΔH) of sucrase in tested soils under different fluazinam concentrations
Ea ΔH 氟啶胺浓度
Fluazinam concentration
(mg·kg−1) Y = β1
1)
× X+β0
相关系数
Correlation coefficient
Ea
(KJ·mol−1) Y = β1
2)× X+β0
相关系数
Correlation coefficient
ΔH
(KJ·mol−1)
CK Y=−4 430.4X+14.394 0.920 5 36.8 Y=−4 126.3X+7.675 0.910 1 34.3
1 Y=−4 679.1X+15.216 0.920 2 38.9 Y=−4 375.1X+8.497 0.910 3 36.4
5 Y=−4 210.9X+13.673 0.934 4 35.0 Y=−3 906.8X+6.954 0.925 2 32.5
10 Y=−4 005.8X+13.007 0.925 8 33.3 Y=−3 701.7X+6.288 0.914 8 30.8
50 Y=−4 238.2X+13.728 0.945 2 35.2 Y=−3 934.1X+7.009 0.937 5 32.7
100 Y=−4 179.8X+13.720 0.959 8 34.8 Y=−3 875.7X+6.824 0.954 0 32.3
1 000 Y=−3 983.9X+12.908 0.947 2 33.1 Y=−3 679.9X+6.189 0.939 4 30.6
1) β1= −Ea/R; 2) β1=−ΔH/R.
表 4 不同浓度氟啶胺处理对不同温度下土壤蔗糖酶活化自由能(ΔG)、熵变(ΔS)及 Q10 的影响
Table 4 Effects of different fluazinam concentrations on the free energy of activation (ΔG), entropy change (ΔS), and Q10 of sucrase
in tested soils under different temperatures
ΔG (KJ·mol−1) ΔS (KJ·mol−1) Q10 氟啶胺浓度
Fluazinam concentration (mg·kg−1) 280 K 290 K 300 K 280 K 290 K 300 K 280~290 K 290~300 K 320~330 K
CK 91.43 92.59 95.25 −271.46 −266.38 −266.63 1.86 1.13 3.11
1 91.76 92.60 95.99 −292.14 −285.24 −287.30 2.09 0.97 2.98
5 91.23 92.63 95.21 −261.50 −257.59 −257.87 1.70 1.15 2.68
10 91.24 92.94 95.27 −234.14 −232.21 −232.50 1.60 1.23 2.80
50 91.22 93.01 95.33 −233.89 −232.28 −232.53 1.57 1.23 2.53
100 91.14 92.48 94.84 −239.07 −235.72 −236.00 1.73 1.19 2.26
1 000 90.97 92.71 95.07 −237.79 −235.97 −236.23 1.56 1.20 2.36
906 中国生态农业学报 2011 第 19卷
Q10 是温度上升 10 ℃时, 反应速度常数增加的倍
数。由表 4可以看出温度在 320~330 K时反应增加的倍
数最大, 说明蔗糖酶的活性在这个温度提高很快, 而在
290~300 K时提高较慢。整体看来蔗糖酶活性在 280~330
K时开始增加的很快, 转而变慢, 最后又有明显加快。
2.5 氟啶胺对土壤微生物呼吸作用的影响
由表 5 可知, 在供试土壤中加入不同浓度氟啶
胺培养 2 d 时, 处理土样的呼吸强度均受到抑制, 且
氟啶胺浓度越高, 所受抑制程度越大。而后, 低浓度
(10 mg·kg−1)处理处于抑制−激活波动 ; 但中浓度
(100 mg·kg−1)和高浓度(1 000 mg·kg−1)处理呼吸强度
基本上低于对照样品, 7 d抑制达最大, 7 d后呼吸作
用有回升但仍未恢复到对照水平。这表明氟啶胺的
加入对于土壤微生物活性有一定抑制作用。
表 5 不同浓度氟啶胺处理对土壤微生物呼吸强度的影响
Table 5 Respiration of tested soil under different fluazinam concentrations mg·g−1
培养时间 Incubation time (d) 氟啶胺浓度
Fluazinam concentration (mg·kg−1) 0~2 2~5 5~7 7~10 10~12 12~15
CK 972.5 920.4 598.7 950.8 1 382.4 2 516.3
10 946.2 1 274.0 978.8 1 300.7 1 405.7 2 034.8
100 795.2 794.6 637.3 985.4 1 099.0 2 283.3
1 000 737.7 617.5 545.3 808.0 1 001.9 1 087.3
3 结论
本研究的结果表明, 氟啶胺半衰期短, 属易分
解农药; 不同浓度氟啶胺处理对蔗糖酶活性有不同
影响, 在供试浓度范围和时间内, 高浓度对土壤蔗
糖酶活性的影响表现抑制, 浓度越高, 抑制作用越
明显; 低浓度对土壤蔗糖酶活性的影响表现为先抑
制后激活再恢复的过程。不同浓度氟啶胺胁迫下蔗糖
酶促反应的 Km和 Vmax发生改变, 但变化不大; 不同
浓度处理中, 土壤蔗糖酶 Ea值的顺序为: 1 mg·kg−1>
50 mg·kg−1>5 mg·kg−1>100 mg·kg−1>10 mg·kg−1>1 000
mg·kg−1, 说明高浓度氟啶胺降低了土壤酶促反应的
活化能, 有利于酶−底物络合物的形成; 氟啶胺的加
入对于土壤微生物活性有一定的抑制作用, 且氟啶
胺浓度越高, 所受抑制程度越大。
参考文献
[1] Johnson D A, Atallah Z K. Timing fungicide applications for
managing sclerotinia stem rot of potato[J]. Plant Disease,
2006, 90(6): 755−758
[2] Matheron M E, Porchas M. Activity of boscalid, fenhexamid,
fluazinam, fludioxonil, and vinclozolin on growth of Scle-
rotinia minor and S. sclerotiorum development of lettuce
drop[J]. Plant Disease, 2004, 88(6): 665−668
[3] Leonard R, Dowley L J, Rice B, et al. Comparison of the
NegFry decision support system with routine fungicide ap-
plication for the control of potato late blight in Ireland[J].
Potato Research, 2001, 44(4): 327−336
[4] Matheron M E, Porchas M. Comparative ability of six fungi-
cides to inhibit development of phytophthora gummosis on
citrus[J]. Plant Disease, 2002, 86(6): 687−690
[5] Mitani S, Sugimoto K, Hayashi H, et al. Effects of cyazo-
famid against Plasmodiophora brassicae Woronin on Chinese
cabbage[J]. Pest Management Science, 2003, 59(3): 287−293
[6] Donald E C, Porter I J, Lancaster R A. Band incorporation of
fluazinam (Shirlan) into soil to control clubroot of vegetable
brassica crops[J]. Australian Journal of Experimental Agri-
culture, 2001, 41(8): 1223−1226
[7] Dowley L J, O’ Sullivan E. Activity of Fluazinam against late
blight of potatoes[J]. Irish Journal of Agricultural and Food
Research, 1995, 34(1): 33−37
[8] Draper A, Cullinan P, Campbell C, et al. Occupational asthma
from fungicides fluazinam and chlorothalonil[J]. Occupa-
tional and Environmental Medicine, 2003, 60(1): 76−77
[9] 南京农学院. 土壤农化分析[M]. 北京: 农业出版社, 1982
[10] 关松萌. 土壤酶及其研究法[M]. 北京: 农业出版社, 1986:
274−278
[11] 董丰收 , 杨爽 , 刘新刚 , 等 . 气相色谱电子捕获法测定氟啶胺
在辣椒和土壤中动态残留[J]. 中国农业科学 , 2008, 41(6):
1684−1690
[12] 许光辉, 郑洪元. 土壤微生物分析方法手册[M]. 北京: 农业出版社,
1986: 227